에스트로겐은 조직세포의 유형과 이들의 생리적 상태에 따라 세포증식을 촉진 또는 억제 시킬 수 있으며, 주로 에스트로겐 수용체(ER)에 의해 매개되는 신호전달 경로를 통해 작용한다. 이 연구는 특히 유방암세포에서 ER에 대한 길항제로 잘 알려진 fulvestrant (Ful)가 CHO 세포주의 증식 및 세포사멸에 미치는 영향과 이들에 대한 $17{\beta}$-estradiol (E2)의 작용에 미치는 효과를 조사하고자 하였다. 이를 위하여 먼저 다양한 농도의 E2, Ful 및 E2 plus Ful의 처리기간에 따라 세포증식에 미치는 효과를 조사하였다. Cell proliferation 분석에서, 6-10일의 처리기간 동안 E2는 1 ${\mu}M$의 농도까지는 세포증식에 영향을 주지 않았지만, 15-40 ${\mu}M$에서는 처리기간의 증가에 따라 점진적으로 현저히 세포증식을 억제하였다. 흥미롭게도 Ful 또한 1 ${\mu}M$의 농도까지는 세포증식에 영향을 주지 않았지만, 10-40 ${\mu}M$에서는 농도 및 시간 의존적인 세포증식 억제효과를 보였다. 뿐만 아니라, Ful은 10일 동안 E2와의 혼합처리에서 E2에 의한 세포증식 억제효과를 감소시키기 보다는 오히려 증대시켰다. 따라서 Ful은 CHO 세포에서 E2의 항 증식작용에 대한 길항적 효과를 갖지 않음을 제시한다. 한편, E2 및 Ful에 의한 DNA 분절효과를 확인하기 위한 TUNEL assay에서 20 ${\mu}M$의 E2로 처리된 CHO 세포주에서는 DAPI로 염색된 거의 모든 핵에서 TUNEL 양성반응이 나타났으며, 40 ${\mu}M$ Ful 및 20 ${\mu}M$ E2 plus 40 ${\mu}M$ Ful로 처리된 CHO 세포주에서는 TUNEL 양성반응을 보였으나, E2 처리군과 비교하여 현저히 낮은 비율로 나타났다. 이러한 결과는 Ful이 CHO 세포에서 E2의 항증식작용에 대한 길항적 효과를 갖지 않으며, E2와 Ful에 의한 세포증식 억제와 DNA 분절을 통한 세포사멸 관련기전은 다른 신호전달 경로를 통해 매개됨을 시사한다.
목적 : 골쇄보(骨碎補) (Drynariae Rhizoma)는 한의학에서 골격계 질환의 치유력을 강화시키는 것으로 알려져 있는데, 항 virus, 항 박테리아, 항 염증 작용이 있는 것으로 보고되고 있다. 질병을 치료하기 위하여 면역 반응을 조절하는 기전에 관하여 오랫 동안 많은 관심을 기울여왔는데, 식물에서 추출한 약재들이 면역기능을 조절할 수 있는 가능성에 대하여 광범위하게 연구되었다. 이에 저자는 골쇄보(骨碎補)의 ethanol 추출물을 가지고 항 세포성과 변역 조절 기능에 대하여 연구하였다. 방법 : 사람의 혈액단핵구 (PBMC)의 배양은 thymidine 법으로 검정하고 nitric oxide (NO) 생성은 mouse macrophage RAW 264.7 세포주를 이용하였으며 IL-2, IFN 와 TNF-a 생성은 ELISA 기술로 검정하였다. 세포 증식은 FACScan으로 측정하고 세포 표면항원 CD16, CD25 및 HLA-DR 은 FITC/PE 항체로 측정하였다. 결과 : 골쇄보(骨碎補)는 mitogen (phytohaemagglutinin; PHA) 과 antigen (purified protein derivative; PPD) 에 의해 자극받은 human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) 의 증식을 억제하였다. 더욱이, 골쇄보(骨碎補)는 mouse 와 인간에 기원한 여러 세포들의 성장을 억제하였다. 또한, nitric oxide (NO), interleukin-2 (IL-2)와 tumor necrosis $factor-{\alpha}\;(TNF-{\alpha})$ 의 생성을 억제하였다. 한편, human PBMCs 에서 intracytoplasmic $interferon-{\gamma}\;(IFN-{\gamma})$와 cell surface markers 인 CD16, HLA-DR 의 expression은 골쇄보(骨碎補)에 의하여 영향을 받지 않았으나, CD25 expression 은 현저히 통제되었다. 결론 : 골쇄보(骨碎補) ethanol 추출물이 in vitro 에서 항 증식성과 변역 억제작용을 가지고 있다는 가능성을 의미하는 것으로 사료된다.
항 진균제의 인체에 대한 부작용을 완화시키는 방법은 부작용이 적은 새로운 항 진균제 개발이나 기존 항 진균제와 혼용하여 상승효과를 나타내는 물질이 필요하다. 이를 위해 Rahnella aquatilis AY2000가 생산하는 항 효모물질은 일종의 단백질성 고분자 물질이란 점에서 기존 항 진균제와 차이가 있다. 이 항 효모물질은 유도기나 대수증식 기에 있는 효모 생육을 억제시켰으며, cell cycle 분석에서 sub-G1기에 속하는 세포수의 증가 없이 세포를 arrest시켰다. 따라서 항 효모물질은 Candida albicans에 정균작용을 나타내었다. 또한 in vitro 실험에서 이 항 효모물질과 itraconazole이나 fluconazole을 병용한 후 fractional inhibitory concentration index 분석을 행한 결과 항 효모활성이 더욱 상승되었다. 결론적으로 이 항 효모물질은 정균 작용을 가질 뿐만 아니라 azole계의 항 진균제와 혼용하면 상승효과를 가짐으로 부작용이 적은 새로운 개념의 항 진균제로 개발할 가치가 있을 것이라고 생각된다.
감잎의 메탄을 추출물과 이를 극성이 다른 용매로 더욱 불리한 용매별 획분들의 돌연변이 유발 억제효과를 spore rec assay를 이용하여 검토하고 사람의 결장암 세포인 HT-29와 사람의 위암 세포인 AZ-521의 증식에 대한 저해효과를 실험하였다. 감잎의 메탄을 추출물은 spore rec assay에서 N-methyl- N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG) 의 돌연변이성을 61% 정도 억제하였으며, 감잎의 메탄을 추출물에서 효과가 있었던 활성물질을 정제하기 위하여 다시 극성이 다른 용매들로 각각 추출하여 얻은 획분 중에서는 헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트 획분이 강한 돌연변이 유발억제효과를 나타내었다. 그리고 감잎의 메탄을 추출물은 암세포의 증식을 억제시키는 항발암 효과가 관찰되었는데 사람의 결장암 세포인 UT-29와 사람의 위암 세포인 AZ-521에 감잎의 메탄을 추출물을 50$\mu\textrm{g}$/ml와 100$\mu\textrm{g}$/ml 첨가시 이들 암세포의 증식이 각각 90%와 99%가지 크게 억제되었다. 감잎의 메탄을 추출물을 다시 극성이 다른 용매들로 분리한 획분들 중에서는 사람의 결장암 세포인 HT-29와 사람의 위암세포인 AZ-521에 감잎의 클로로포름 획분을 각각 50$\mu\textrm{g}$/ml와 100$\mu\textrm{g}$/ml 첨가시 이들 암세포의 증식 억제율이 100%에 달하였고 감잎의 에틸아세테이트 획분도 사람의 결장암 세포(HT-29)와 사람의 위암세포(AZ-521)에 대해 클로로포름 획분 다음으로 강한 항발암 효과가 관찰되었으며, 헥산 획분도 이들 두 획분(클로로포름 및 에틸아세테이트)보다는 낮았으나 암세포 증식을 억제하는 효과가 관찰되어 항돌연변이 실험에서와 일치하는 결과를 얻었다.
S-allylcysteine (SAC)은 숙성마늘에 다량 함유된 수용성 유기황 화합물로서 항산화 및 항염증 효과뿐만 아니라 여러 유형의 암에서 예방 및 항암 치료를 위한 하나의 식품유래 대체물질로 주목 받아 오고 있다. 그러나, SAC에 의한 자궁경부암세포에서의 항암효과는 아직 보고된 바 없다. 본 연구의 목적은 SAC가 자궁경부암세포주 HeLa의 증식에 미치는 억제효과를 분석하고, 이에 대한 세포 항증식 작용기전 중 세포자멸 및 세포주기에 미치는 영향을 조사하는데 있다. 이를 위하여, 먼저 다양한 농도의 SAC가 처리기간에 따라 세포증식에 미치는 영향을 분석하였다. SAC 처리는 HeLa 세포의 형태학적 변화를 유도하였을 뿐만 아니라, 세포의 viability 감소 그리고 농도 및 시간 의존적인 세포증식 억제효과를 초래하였다. 또한 SAC는 DNA fragmentation assay 및 TUNEL assay에서 DNA 분절을 유도하였으며, 세포주기 분석에서 G2/M기에서의 세포주기 억제를 유도하였다. 이러한 결과는 SAC가 최소한 부분적으로 세포사멸의 유도 및 세포주기의 통제를 통하여 HeLa 세포의 증식을 억제함을 제시한다.
전반적인 피부세포의 생리적 지능 자하로 인한 자연노화와 더불어, 여러 피부 스트레스 요인들이 다양하게 작용하여 발생하는 외인성노화를 방지하거나, 개선할 수 있는 항노화소재로서의 개발 가능성을 알아보기 위해, 예로부터 항염활성이 있다고 알려진 oleanolic acid(OA)를 포함한 ursolic acid(UA), betulin, betulinic acid(BA) 등의 triterpenoids가 어떻게 피부에서의 항노화 활성을 나타내는지를 알아보았다. 시험 결과, OA는 자외선에 의한 각질형성세포에서의 PGE$_2$ 생성과 섬유아세포(NHF)에 의한 matrix metalloproteinase-1(MMP-1) 분비를 억제하였다. 그리고, NHF의 procollagen 생성을 촉진하였으며, 이런 procollagen 생성촉진활성이 in vivo에서도 발현되는 것을 무모생쥐의 실험을 통해서 확인하였다. 또한 OA는 각질세포의 증식과 분화를 촉진하여 표피세포로 하여금 세라마이므와 필라그린 생성을 증가시키도록 하는 작용도 있음을 보여주었다. 더불어 실험한 UA, betulin, BA 들은 비록, betulin, BA의 경우 세포 독성이 다른 물질 들에 비해 높았고, UA가 각질세포의 분화를 오히려 억제하는 양상을 보이기는 했지만, 대부분의 기능은 OA와 유사하였다. 피부세포보호작용과 진피 기질물질에 대한 작용, 그리고, 표피의 장벽기능과 보습기능에 대해 시험한 본 연구는, 식물성분인 triterpenoids가 피부를 위한 항노화소재로서의 개발 가능성이 있음을 확인하는 계기가 되었고, 그 중에서도 OA가 보다 우수한 항노화 소재가 될 수 있음을 시사하고 있다.
HIV와 유사하게 retro virus의 일종인 Friend virus of Anemia strain (FVA)을 BALB/c mice 에게 감염시 reverse transcriptase 의 활성에 의해 비장의 erythroid progenitor cell 에서 증식되므로서 비장의 비대 및 빈혈을 초래하게 된다. 이를 지표로 하여 reverse transcriptase 억제작용을 지닌 항 virus 약물을 천연성분으로 부터 검색하고자 하였다. 우선, 대조약물로 사용한 기존의 항 AIDS 약물인 zidovudine (AZT) 을 FVA 가 감염된 BAB/c mice 에게 18일간 투여시 (약 100 mg/kg/day, p.o. ) 대조군에 비해 비장의 비대 및 reverse transcriptase 활성이 90% 이상 억제되었으며, 이들의 혈청을 정상 BALB/c mice 에게 재투여시에도 유사한 결과를 나타내어 reverse transcriptase 를 억제하므로서 항 virus 작용을 나타낸다는 것을 입증하였다. 그러나, 혈액중 Hemoglobin등 빈혈의 지수는 대조군과 유사한 수치를 나타내므로서 정상으로 회복되지를 못하였다. 이것은 zidovudine 자체가 지니는 골수억제에 의한 부작용 때문인 것으로 고려된다.
본 연구는 말똥성게에 대한 항 발암 효과와 항산화 효과에 대하여 조사하였다. 먼저 말똥성게 분획물의 항 발암 효과를 알아보기 위하여 핵산, 메탄올, 부탄올 및 물로 순차적으로 분획하여 각 분획별로 암세포에 대한 증식 억제효과와 암 예방 지표인 QR 유도 활성 효과를 측정하였다. 그 결과 4종의 모든 암세포주 HepG2, MCF-7, HT29 및 B16-F10에서 농도 의존적인 암세포 증식 억제 효과를 나타내었으며, 모두 HPMH층에서 가장 높은 암세포 성장 억제 효과를 나타내었다. 그러나 HepG2에서 측정한 QR 유도 활성 효과는 HPMB층에서 가장 높은 효과를 보였다. 또한 항산화 효과 중 ROS 제거활성 측정결과에서는 HPMH층이 가장 높게 나타났으며 13.00 ${\mu}g/ml$에서 50%의 ROS 제거활성 효과를 나타내어 positive control로 사용한 trolox와 비교하였을 때 거의 유사한 제거활성을 보였다. 그리고 $ONOO^-$ 제거활성 역시 HPMH층이 가장 높게 나타났으며, positive control과 비교하였을 때 penicillamine의 $IC_{50}$값인 5.51 ${\mu}g/ml$ 보다는 낮았으나 15.14 ${\mu}g/ml$의 $IC_{50}$값을 나타내어 다른 분획층에 비해서는 높은 항산화 효과를 확인할 수 있었다. 아질산염 제거활성 측정 결과에서도 HPMH층이 가장 높은 제거활성 효과를 나타내었으며 특히 pH가 낮을수록, 시료농도가 증가할수록 아질산염 제거활성 효과가 증가함을 알 수 있었다. 이상으로 항 발암효과 중 암세포에 대한 증식 억제효과는 HPMH층이 가장 높았고 QR 유도 활성 효과는 HPMB층에서 가장 높았으며 항산화 효과는 ROS, ONOO- 및 아질산염 제거활성에서 모두 HPMH층이 가장 높음을 알 수 있었다. 따라서 앞으로 HPMH층과 HPMB층에 대한 집중적인 연구가 요구되어지며 말똥성게를 이용하여 항암관련 기능성 식품과 식품 저장성과 안전성 향상을 위한 식품첨가제나 보존제등의 개발가능성과 그 효과도 기대할 수 있을 것으로 생각된다.
중국에서 약용 및 음용식물로 사용되고 있는 여주 (Mo-mordica charantia L.)를 이용하여 추출, 분획한 후 항균, 항암 및 암예방 효과를 살펴보았다 여주의 MCU층을 제외한 모든 층에서 항균력을 보였으며 특히 Staphylococru aureus의 MCMEE층에서 가장 높은 항균활성을 나타내었다 실험에 사용한 각균에 대한 여주 분획물의 암세포 증식 억제 효과를 MTT assay로 실험한 결과, 3종의 인체 암세포 HepG2, HeLa 및 MCF극에서 모두 여주의 ethyleth-er 분획층인 MCMEE와 ethylacetate 분획층인 MCMEA 층에서 아주 높은 암세포 증식억제 효과를 나타내었다. HepG2세포를 이용하여 암예방 QR 유도 활성을 측정한 결과, 다른 분회층에 비해 비극성 용매층인 hexane 분획층 MCMH에서 아주 높은 QR 유도를 활성시키는 것으로 나타났다. 본 실험 결과, 여주에는 식품 보존과 항균제로서의 개발가능성이 보이며. 항발암 효과를 보기위한 암세포 증식 억제 효과는 ethylether층 MCMEE과 ethylacetate층 MCMEA층에서 월등하였고, 비극성 용매층인 hexane 분획층에는 암발생을 예방하는 quinone reductase inducer가 있는 것으로 사료되며. 나아가 단계적인 생리활성 연구의 분리 동정이 계속 이루어져야 할 것으로 사료된다.
Resazurin(alarmar Blue$^{TM}$)을 이용하여 in vitro 적으로 P. ovale의 최소 발육저지농도 (Minimum Inhibitory Concentration , MIC)를 측정함으로써 여러 가지 조성의 항비듬제의 항비듬 효과를 측정하고자 하였다. 최적의 실험 조건을 결정하기 위한 기초 실험 결과, 약 2.6$\times$$10^{5}$ cfu/$m\ell$ 이상의 농도로 P. ovate가 주입되는 경우 alarmar Blue$^{TM}$ 흡광도의 변화를 정 하게 관찰할 수 있었고 alannar Blue$^{TM}$ 자체의 희석 배율이 1:1-1:4이며, 16시간과 24 시간 배양을 하여야 비교적 정량적인 결과를 얻을 수 있었다. alarmar Blue$^{TM}$ 가 균체의 증식에 미치는 영향을 고찰하여 본 결과 1:1의 희석 용액에서도 alarmar Blue$^{TM}$가 균체의 증식에 영향을 미치지 못함을 알 수 있었다. Zinc pyrithione과 Climbazole의 혼합계에서 항비듬 효과를 관찰하여 본 결과 일정 혼합비에서 효과적인 항비듬 효과를 관찰할 수 있었고, 현미경 관찰에 의한 MIC 측정법과,SDDM(Skin-Disk Diffusion Method)법에 의한 항비듬 효과와 비교하여 본 결과 유사한 경향성을 관찰할 수 있었다. 이상의 결과를 종합해볼 때 alarmar Blue$^{TM}$를 사용한 in vitro 항비듬 효과 측정법은 시료나 배지의 탁도에 크게영향을 받지 않으며, Micro-plate reader를 사용함으로써 많은 종류의 시료에 대한 결과를 마르고 정확하게 얻을 수 있다는 장점을 가지고 있으므로, 향후 효율적인 in-vitro 항비듬 평가 방법으로 활용이 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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