• 미생물학회지
• /
• 제52권3호
• /
• pp.254-259
• /
• 2016

시드로포어인 2, 3-dihydroxybenzoic acid (DHB)를 생산하는 Acinetobacter sp. B-W의 플라스미드를 분석한 결과, 20 kb 크기의 플라스미드를 함유하였다. 배양 온도 $43^{\circ}C$ 가 플라스미드가 제거된 돌연변이체 생산에 효과적이었다. 이 돌연변이체는 2,3-DHB 생산 능력을 소실하였으며, chrome azurol S (CAS) 아가 배지에서 시드로포어 생산이 검출되지 않았다. 포도당과 황산 망간을 함유한 배지에서 $28^{\circ}C$로 3일간 배양한 B-W 원 균주와 돌연변이체의 배양 상등액의 pH는 각각 4.5와 8.5로 나타났다. 돌연변이체에서는 ampicillin, actinomycin D, bacitracin, lincomycin과 vancomycin 같은 항생제에 대한 저항성이 사라졌으며, 이러한 항생제에 대한 최소 억제 농도(MIC)가 급격하게 감소하였다. B-W 균주에서 분리한 플라스미드로 대장균을 형질전환시킨 결과, 원 균주와 같은 크기의 플라스미드가 이 형질전환 대장균에서 발견되었다. 플라스미드가 제거된 돌연변이체에서는 플라스미드가 발견되지 않았다. 20 kb 크기의 플라스미드에 2,3-DHB 생산 유전자와 여러 항생제 저항성 유전자가 자리잡고 있는 것으로 추정된다.

• 미생물학회지
• /
• 제28권1호
• /
• pp.35-40
• /
• 1990

Thiostrepton 내성 유전자(tsr)를 포함하는 multi-copy 재조합 플라스미드 pJY7J2의 제한효소 절단지도를 작성하였다. pJY, 712는 Streptomyces에서 넓은 host range를 나타내었으며 cloning 목적에 사용할 수 있는 단일 BgtIl 제한효소 인식부위를 갖고 있었다. 플라스미드 pJY 712는 lethal zygosis(Ltz+) 현상을 보였다. pJY 712의 혁질전환빈도는 S. lividans에서 $5.0\times 10^{4}$ TFU였다. pJY 712의 Bell 제한효소 인식부위에 tyrosmase 유전자(mel)를 삽입하여 플라스미드 PJY713을 제조하였다. met 유전자를 포함한 재조합 플라스미드 pJY 714는 pJY 713의 일부분(1.9kb BgllI-BelI 단편)을 제거하여 제고하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제13권3호
• /
• pp.199-201
• /
• 1985

플라스미드 YEp13과 pMA56을 두가지 다른 방법으로 liposome속에 봉입시켰다. 이 두가지 방법에 따르면 플라스미드 DNA는 6$0^{\circ}C$에 1.5시간 동안 노출되거나, 4$^{\circ}C$에서 2-5분 동안 sonication 처리를 받아야 한다. 일단 봉입된 플라스미드를 다시 뽑아낸 다음, 그들에 대한 물리적인 구조와 유전적 전환능력을 조사했다. 그 결과 이 두 플라스미드 DNA는 liposome 봉입과정을 통해 아무런 손상을 입지 않았음이 밝혀졌다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제18권1호
• /
• pp.94-97
• /
• 1990

Thiostrepton 내성 유전자(tsr)를 포함하는 multicopy 재조합 플라스미드 pJY502(5.5kb)의 제한효소 지도를 비교해본 결과 pJY502는 새로운 플라스미드로 확인되었다. pJY502는 Streptomyces에서 넓은 host range를 나타내었으며 cloning에 사용할 수 있는 단일 BglII 제한효소 인식부위를 갖고 있었다. pJY502의 형질전환 빈도는 S.lividans에서 $2.2 \times 10^5$이었다. 또한 E.coli-Streptomyces bifunctional 플라스미드 pJY504을 제조하였다.

• 미생물학회지
• /
• 제43권4호
• /
• pp.337-340
• /
• 2007

Pseudomonas syringae pv. syringae는 우리나라에서 참다래 꽃썩음병의 원인세균으로 알려져 있다. 본 연구에서는 우리나라의 서로 다른 참다래 과수원에서 분리되어 동정된 11개 균주의 꽃썩음병균이 가지고 있는 플라스미드 양상을 pulsed-field 젤 전기영동으로 조사하였다. 그 결과 전체 균주들은 가지고 있는 플라스미드의 개수와 크기에 따라 6개 그룹으로 나누어 졌다. 플라스미드의 수는 0에서 4개, 크기는 22 kb에서 160 kb로 다양하였다. 이들 중 두 개의 플라스미드를 가지고 있는 그를 III에 속하는 4균주가 Cu에 대한 저항성을 보였다. Southern blot hybridization 결과 Cu 저항성 유전자는 48 kb 크기의 플라스미드에 들어 있었다.

• 생명과학회지
• /
• 제7권4호
• /
• pp.253-261
• /
• 1997

E. coli에서 글루타치온 생산 증가를 위해서 E. coli에서 분리한 gehI과 gshII유전자를 함유하고 있는 여러 재조합 플라스미드를 구성하여 도입하였다.pBR325 벡터에 gehI 유전자를 각각 1-3개를 포함한 재조합 플라스미드 및 gehI과 gehII 유전자를 동시에 갖는 재조합 플라스미드를 구성하였다. 계속적으로 반복된 gehI 유전자가 증폭된 E. colidml $\gamma $-gluramylcysteine synthetase의 효소활성은 삽입된 gehI 유전자의 부에 따라 증가하였다. 구성된 재조합 플라스미드를 함유한 E.coli의 글루타치온 생산능을 accetate kinase반응을 ATP재생계로 사용하여 조사한 결과 반복된 gehI 유전자를 함유한 E.coli의 글루타치온 생산능력은 삽입된 gehI 유전자의 수에 비례한여 증가하였으며, gehI 유전자의 추가적인 도입에 의해 글루타치온 생산능력은 2배 증가하였다. E.coli에서 글루타치온의 효소적 생산은 주로 \gamma $-gluramylcysteine synthetase의 효소활성에 의해 영향을 받았다. 가장 높은 글루타치온 생산능은 pGH501 (pUC8-gsh.I.II.III) 플라스미드를 갖는 균주에서 관찰되었다.

• 미생물학회지
• /
• 제34권4호
• /
• pp.236-242
• /
• 1998

박테리오파지 P2-P4 시스템은 바이러스 조립과정 기작 연구를 위한 뛰어난 실험 소재로 연구되어 왔으나, 이 시스템에 유전자 조작상 필수적인 유용한 플라스미드가 없는 관계로 그의 필요성이 대두되고 있다. 본연구에서는 도움파지가 없을 때 플라스미드 상태로 존재하는 P4 ash8 (sid71)을 시작물질로, 항생제 내성 유전자를 도입하여 선택성을 줄 목적으로 P4 파지 증식에 불필요한 P4 DNA 단편을 pUC4-K 플라스미드의 kmr(kanamycin resistance) 유전자로 치환하여 P4 ash8(sid71) kmr을 생성하였다. 이 플라스미드는 박테리오파지 P2로 induction하여 박테리오파지 P4 상태로 증식시킬 수 있게 그 genome 크기를 조정하였으며, 파지 상태로 전환된 것을 burst size 결정 및 CsCl 부양 균등밀도 편차실험을 통해 입증하였다. 생성된 P4 플라스미드 유도체를 유전자 조작하여 P4의 integrase 기능을 잃은 변이체를 쉽게 만들 수 있었으며, 역시 박테리오파지 P4 상태로 증식시킬 수 있었다. 이러한 변이체 플라스미드의 안정성 실험을 수행하여, P4의 integrase 기능이 지속적인 플라스미드 상태 유지를 위해 필요하다는 것을 보여주었다.

• 미생물학회지
• /
• 제34권3호
• /
• pp.120-125
• /
• 1998

pNPG는 염색체 1번의 동원체 왼편에 위치하는 npgA1을 상보할 수 있는 genomic DNA를 포함하는 플라스미드인데 Aspergillus nidulans의 형질전환율을 현저히 증가시키는 특징을 보여주었다. 이 플라스미드로 형질전환시켰을 때 $Trp^+$형질전환체 모두가 $Npg^+$이었고 이들 중에 불완전 형질전환체는 전혀 형성되지 않았다. pNPG를 제한효소 PstI으로 절단하여 얻어진 10.4 kb 절편내에 형질전환율을 증가시키는 DNA서열이 존재함을 확인하고 pILJ16의 PstI site에 재조합하여 pKJH10.4라 명명하였다. pKJH10.4에 의한 A. nidulans의 형질전환율은 pILJ16 보다 대략 200배 이상 증가하였다. pKJH10.4에 의한 형질전환체를 비선택적 조건에서 배양하였을 때 $Arg^+$무성생식포자의 약 80%이상이 $Arg^-$로 복귀됨으로써 플라스미드가 매우 불안정함을 보여주었다. argB2 지표와 다른 종류의 연관된 유전자 지표를 지니는 플라스미드로 형질전환하였을 경우 비선택적 조건에서 argB2 지표가 결손될 때 연관된 다른 지표도 항상 함께 결손되는 현상을 보여주었다. 이 결과는 이 플라스미드에 의한 형질전환체의 불안정성이 염색체로 삽입되었다가 절제되어 나오기 때문이기보다는 염색체 밖에서 자가 복제하기 때문임을 시사한다. 형질전환율을 증가시키는 최소한의 DNA절편은 EcoRI-HaeIII 4.9 kb 절편이었으며 PvuII-EcoRI 2.2 kb 절편은 플라스미드의 불안정성과 관련이 있었다. 이러한 결과들을 종합해 볼 때 형질전환율을 증가시키는 새로운 DNA 서열의 특성이 ANS1 보다는 AMA1과 유사하였으므로 AMA2라 명명하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제20권4호
• /
• pp.377-383
• /
• 1992

Bacillus thuringiensis 7균주를 한국의 토양에서 분리하여 특성을 연구했다. 상기의 7균주를 HL-8, 10, 12, 13, 14, 15와 16으로 명명했으며, 이들 균주들은 세포내의 다양한 형태의 parasproal endotoxin crystal과 내생포자를 형성한 것을 위상차현미경으로 관찰했다. 분리균주들의 생화학적인 특성은 이미 알려진 균주들과 유사했으나, 특이한 차이점을 가지고 있었다. 각 분리균이 가지고 있는 플라스미드를 분리하여 분자량과 수를 조사한 결, HL-8 과 HL-10은 6종류의 플라스미드를 가지고 있었으며, 분자량의 범위는 3.01-15.1Md 이었고, HL-12균주는 4종규의 플라스미드를 가지고 있었으며, 분잘량의 범위는 5.4-21.9Md이었고, HL-13균주도 4종류의 플라스미드를 가지고 있었으나 분자량은 차이가 없었다. HL-15균주도 3종류의 플라스미드를 가지고 있었으며, 분자량의 범위는 2.4~13.5Md이었고, HL-15균주도 3종류의 플라스미드를 가지고 있었으며, 분자량의 범위는 3.4~11.4Md이었고, HL-16도 3종류의 플라스미드를 가지고 있었으며, 분자량의 범위는 2.4~20.1Md이었다. 상기 분리균는 공히 ampicillin, bacitracin, cephalothin, methicillin과 penicillin G에 저항성을 나타냈다. HL-8과 15는 48시간내에 Culex pipiens 모기 3령유충에 100%의 살충성을 나타냈고, 다른 균주는 이보다 낮았다. 특히 HL-13은 살충성이 없었다.

• 미생물학회지
• /
• 제28권2호
• /
• pp.109-113
• /
• 1990

Mutator 기능을 가지는 플라스미드 pKM101과 이의 돌연변이체 pSL4를 DNA 수복능력이 다른 Esherichia coli B/r(phr, recA, uvrA, uvrB)균주들에 도입하여 돌연변이원인 UV와 MNNG에 대한 보호효과와 mutagenecity를 조사형ㅅ다. pKM101과 pLS4의 mutator 기능과 보호효과는 repair 기능에 따라 다르나 전반적으로 두 플라스미드의 UV와 MNNG에 대한 저향성과 돌연변이율을 증가시켰고 pLS4는 pKM101보다 그효과가 높았다. 이러한 pLS4와 pKM101의 기능적 차이는 이들 플라스미드의 mutator 유전자상에 일어난 변이에 의한 것이라고 생각되었다.