The methylotrophic yeast Pichia pastoris is one of the best host for the production of foreign proteins because of the presence of the strong AOX1 promoter induced by methanol. Methanol feeding induces the protein production and provides energy sources for the host cells. However, excess methanol inhibits the growth of host cells, while an insufficient methanol lead to poor growth and protein production. We have used various controled methanol feeding strategies to obtain the maximum proteins.
The methanolic extract of Glycine maxim increased the expression of the promoter in B16 mouse melanoma cells harboring a tyrosinase promoter. Extract concentrations of 10 ${\mu}g/m{\ell}$ and 100 ${\mu}g/m{\ell}$ resulted in tyrosinase promoter expression rates of approximately 113% and 184%, respectively, as compared to the control. The fraction layers consisting of butyl alcohol and methylene chloride improved expression effects on the tyrosinase promoter. In particular, the butyl alcohol fraction evidenced a high expression rate at 100 ${\mu}g/m{\ell}$. In the MTT assay, the methanolic extract did not evidence cytotoxicity at concentrations under 500 ${\mu}g/m{\ell}$. Therefore, the results observed with the extract of Glycine maxim showed that the substance exerted a positive effect on the tyrosinase promoter.
Babesia equi ema-1 5' intergenic(IG) nucleotide was PCR amplified and analyzed for restriction sites in order to identify a promoter region in this IG nucleotide sequence. B equi ema-1 5' IG specific primers identified a 1268 bp PCR product. The sequence had restriction sites for 34 restriction enzymes when analyzed by a computer program. Among them, 26 enzymes had only one restriction site, but the others had more than one sites. When four restriction enzymes (Bgll , HindⅢ, Kpn1 and BamH1) were treated to digest the 1268 bp nucleotide, they had restriction sites as expected by the computer program. Information of restriction sites in the 1268 bp IG nucleotide will be applied to select restriction enzymes for cloning the IG nucleotide to a vector.
To estimate the inhibitory effect of Rubus coreanum extract on melanin biosynthesis, we tested its inhibitory effects on tyrosinase promoter in B16 mouse melanoma cells. Rubus coreanum extract by methanol had inhibitory effect approximately 10% on tyrosinase promoter at $100{\mu}g/mL$. In the MTT assay, the same extract exhibited very low cytotoxicity under $100{\mu}g/mL$. The fractions of methylene chloride, butyl alcohol and water did not showed the inhibitory effect on tyrosinase promoter, but the fraction of ethyl acetate exhibited inhibitory effect approximately 11% at $100{\mu}g/mL$.
To estimate the inhibitory effect of some mushroom extract on melanin biosynthesis, we tested its inhibitory effects of five mushroom extracts on tyrosinase promoter in Bl6 mouse melanoma cells. In five mushroom extracts, Cordyceps militaris and Poria cocos exhibited low repression effect on tyrosinase promoter. However, Ganoderma lucidum, Paecilomyces japonicus, Phellinus linteus showed high repression effect, Especially, Paecilomyces japonicus and Phellinus linteus extracts had very higher repression effect approximately $81{\sim}83%\;at\;100{\mu}g/mL$. In the MTT assay, Paecilomyces japonicus and Phellinus linteus extracts exhibited high cytotoxicity. Therefore, repression effect of the extracts were closely connected with cytotoxicity.
Proceedings of the Korea Information Processing Society Conference
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2005.11a
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pp.603-606
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2005
하나의 유전자는 또 다른 유전자의 단백질과 프로모터 영역에서 Binding 함으로써 그 유전자의 발현에 영향을 미칠 수 있다. 이러한 두 유전자간의 조절 상호 작용을 유전자 조절망이라 하며 유전체의 핵심적인 기능을 보다 간결하게 표현하는 조절망을 설계할 수 있다. 대표적인 설계 방법으로는 Time-Series Data 를 이용한 방법과 Steady-State Data 를 이용하는 방법이 있으며 이 논문에서는 Steady-State Data 즉, Knock-out Data 를 이용하여 유전자 조절망을 재구성함으로써 기존의 방법을 개선하여 보다 정확한 결과 예측을 목표로 한다.
Ryu, Jea Woon;Lee, Sang Cheol;Yoo, Jae Soo;Kim, Hak Yong
Proceedings of the Korea Contents Association Conference
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2013.05a
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pp.75-76
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2013
유전자 염기서열의 직접적인 변화 대신 후성기작을 통해 유전자 발현이 조절되는 후성유전은 크게 DNA 메틸화(methylation), 히스톤 변형(modification), ncRNA(non-coding RNA)로 제어가 가능하다. 후성유전을 이해하기 위해 노화 관련 유전자를 대상으로 데이터베이스를 구축하고 전반적인 연구결과를 살펴보고자 한다. 유전자의 프로모터(promoter), CpG island(CGI) 부위에 메틸화가 될 경우 다른 부위에 비해 유전자 발현에 큰 영향을 주므로, 특히 CGI 부위를 중심으로 전체 유전자 그룹과 노화 관련 유전자 그룹간의 분포도를 비교 분석하였다. 또한 ncRNA 중 miRNA와 노화 유전자와의 상호작용을 분석하였다. 이와 같은 분석접근 방법은 노화 관련 유전자의 조절을 이해하는데 도움이 될 것으로 사료된다.
The Transactions of the Korean Institute of Electrical Engineers D
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v.53
no.7
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pp.531-535
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2004
A new method is presented to construct a classifier. This was accomplished by combining a generalized regression neural network (GRNN) and a genetic algorithm (GA). The classifier constructed in this way is referred to as a GA-GRNN. The GA played a role of controlling training factors simultaneously. The GA-GRNN was applied to classify 4 different Promoter sequences. The training and test data were composed of 115 and 58 sequence patterns, respectively. The classifier performance was investigated in terms of the classification sensitivity and prediction accuracy. Compared to conventional GRNN, GA-GRNN significantly improved the total classification sensitivity as well as the total prediction accuracy. As a result, the proposed GA-GRNN demonstrated improved classification sensitivity and prediction accuracy over the convention GRNN.
Binary vectors, pBI-ActR1, pBI-ActF1 and pBSH-ActR1, were constructed using pGA642, the replication origin of pTi12 and the rice actin promoter. The sizes of pBI-ActR1, pBI-ActF1 and pBSH-ActR1 were 12.9 kb, 13.2 kb and 11.95 kb, respectively. These vectors containing a rice actin promoter followed by a GUS structural gene could induce stronly the expression of GUS gene in transformed rice cells. Rice explants from 3-4 day old seedlings after germinatin were cocultured with A. tumefaceins harboring pBI-ActR1, pBI-ActF1 or pBSH-ActR1, and then GUS expression in the explants was assayed. Transformation of rice explants by these binary vectors was tissue-specific, such that the meristematic regions of shoot apex, root and hypocotyl were transformed by these binary vectors.
Development of expression vectors is important for the basic and applied researches on kimchi LAB (lactic acid bacteria). An expression vector, pSJE6c was constructed by inserting P6C promoter sequence from Lactococcus lactis into pSJE, a shuttle vector for E. coli and Leuconostoc species. To test the efficiency of pSJE6c, aga ($\alpha$-galactosidase) and lacZ ($\beta$-galactosidase) genes were expressed in Lactobacillus brevis 2.14. Compared to the pSJE, expression levels of both genes were increased, indicating P6C promoter was better than indigenous promoters. Enzyme activities of L. brevis cells harboring pSJE6caga (pSJE6c with aga) or pSJE6Z (pSJE6c with lacZ) were 1.5-2 fold higher than those with pSJEaga (pSJE with aga) or pSJEZ (pSJE with lacZ). More RNA transcripts were detected in cells harboring pSJE6c based recombinant plasmid. The results indicated that heterologous gene expressions in kimchi LAB could be improved significantly by use of efficient expression vectors.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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