Exploring microRNA (miRNA) and mRNA regulatory interactions may give new insights into diverse biological phenomena. Recently, miRNAs have been discovered as important regulators that play a major role in various cellular processes. Therefore, it is essential to identify functional interactions between miRNAs and mRNAs for understanding the context- dependent activities of miRNAs in complex biological systems. While elucidating complex miRNA-mRNA interactions has been studied with experimental and computational approaches, it is still difficult to infer miRNA-mRNA regulatory modules. Here we present a novel method, termed layered hypernetworks (LHNs), for identifying functional miRNA-mRNA interactions from heterogeneous expression data. In experiments, we apply the LHN model to miRNA and mRNA expression profiles on multiple cancers. The proposed method identifies cancer-specific miRNA-mRNA interactions. We show the biological significance of the discovered miRNA- mRNA interactions.
A cDNA library was constructed using mRNA from the cells of 7-day-old cultures of Flammulina velutipes after induction of fruiting treatment. A cDNA clone, FVFD16 (Flammulina velutipes fruiting body differentiation), was selected by differential screening. The expression property of the FVFD16 gene was examined by Northern blot analysis. FVFD16 represents mRNA that is specifically expressed during differentiation of fruit bodies. The conspicuous accumulation of the FVFD16 mRNA was detected in 4-day-old and 1-day-old cultures. The nucleotide sequence of the FVFD16 gene was determined and the mRNA contained an open reading frame that encoded a putative protein of 128 amino acid residues (13.5 kDa).
Kim, Byeong Cheol;Kim, Mi Ok;Kim, Tae-Hyung;Sohn, Jang Won;Yoon, Ho Joo;Shin, Dong Ho;Park, Sung Soo
Tuberculosis and Respiratory Diseases
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v.56
no.4
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pp.393-404
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2004
Background : Nucleic acid hybridization has become an essential technique in the development of our understanding of gene structure and function. The quantitative analysis of hybridization has been used in the measurement of genome complexity and gene copy number. The filter hybridization assay is rapid, sensitive and can be used to measure RNAs complementary to any cloned DNA sequence. Methods : The authors assessed the accuracy, linearity, correlation coefficient and specificity of the hybridization depending on the added dose(0, 1, 5, and $10{\mu}g$) of non-specific rat spleen RNA to hybridization of surfactant protein A mRNA. Filter hybridization assays were used to obtain the equation of standard curve and thereby to quantitate the mRNA quantitation. Results : 1. Standard curve equation of filter hybridization assay between counts per minute (X) and spleen RNA input (Y) was Y=0.13X-19.35. Correlation coefficient was 0.98. 2. Standard curve equation of filter hybridization assay between counts per minute (X) and surfactant protein A mRNA transcript input (Y) was Y=0.00066X-0.046. Correlation coefficient was 0.99. 3. Standard curve equation of filter hybridization assay between counts per minute (X) and surfactant protein A mRNA transcript input (Y) after the addition of $1{\mu}g$ spleen RNA was Y=0.00056X-0.051. Correlation coefficient was 0.99. 4. Standard curve equation of filter hybridization assay between counts per minute (X) and surfactant protein A mRNA transcript input (Y) after the addition of $5{\mu}g$ spleen RNA was Y=0.00065X-0.088. Correlation coefficient was 0.99. 5. Standard curve equation of filter hybridization assay between counts per minute (X) and surfactant protein A mRNA transcript input (Y) after the addition of $10{\mu}g$ spleen RNA was Y=0.00051X-0.10. Correlation coefficient was 0.99. Conclusions : Comparison of cpm/filter in a linear range allowed accurate and reproducible estimation of surfactant protein A mRNA copy number irrespective of the addition dosage of non-specific rat spleen RNA over the range $0-10{\mu}g$.
In neurons, kinesin is the molecular motor that transport cargos along microtubules. KIF5s (alias kinesin-I), are heterotetrameric motor conveying cargos, but the mechanism as to how they recognize and bind to a specific cargos has not yet been completely elucidated. To identify the interaction proteins for KIF5C, yeast two-hybrid screening was performed, and specific interaction with the $\underline{S}$am68-$\underline{l}$ike $\underline{m}$ammalian protein $\underline{2}$ (SLM-2), a member of the $\underline{s}$ignal $\underline{t}$ransducers and $\underline{a}$ctivators of $\underline{R}$NA (STAR) family of RNA processing proteins, was found. SLM-2 bound to the carboxyl (C)-terminal region of KIF5C and to other KIF5 members. The C-terminal domain of Sam68, SLM-1, SLM-2 was essential for interaction with KIF5C in the yeast two-hybrid assay. In addition, glutathione S-transferase (GST) pull-downs showed that SAM68, SLM-1, and SLM-2 specifically interacted to Kinesin-I complex. An antibody to SAM68 specifically co-immunoprecipitated SAM68 associated with KIF5s and coprecipitated with a specific set of mRNA. These results suggest that Kinesin-I motor protein transports RNA-associated protein complex in cells.
Chinese cabbage (Brassica campestris), one of the major vegetable crops in Korea, undergoes self-incompatible pathway for reproduction. To maintain inbred lines of chinese cabbage, a method in that $CO_2$ gas is treated to the pistils to break the self-incompatibility and thereby self-pollens can successfully make germination and fertilization has been selectively used in speed company. In this study, the pistil genes induced by the $CO_2$ treatment was investigated by mRNA differential display (DD-PCR) method. The result shows PCR products amplified in a differential pattern from both $CO_2$ gas treated- and untreated-pistil mRNAs, suggesting that the pistil genes are probably regulated positively and also negatively by the $CO_2$ gas.
This study was aimed for a development of a useful gene promoter which has a transcript expressional specificity in the early embryonic period of the silkworm, Bombyx mori. To select a useful gene expressed in the early embryonic stage, we constructed and analyzed a PCR-base subtraction cDNA library. In subtractive hybridization analysis, we confirmed four clones as differently expressed genes(BmNanos-like, BmNanos-P, BmNanos-O, BmVasa mRNAs). Northern hybridization and real time PCR results reveled that the BmNanos-like gene promoter is suitable for the silkworm transgenic vector system. Further defined studies on molecular functions and biological roles of their promoters will give us well-fined information and its application.
The purpose of this study was to determine whether a single bout of aerobic exercise affects the expression level of toll-like receptor4 (TLR4), IL-6, TNF-${\alpha}$, and suppressor of cytokine signaling-3 (SOCS-3) expression in rat hindlimb muscles depending on fiber types. To accomplish this, thirteen 7-wk Balb/c male mice were randomly assigned to an experimental group or a control group. The exercise protocol consisted of a single bout of treadmill exercise (inclination $10^{\circ}$, speed 17 cm/sec 10 min, 33 cm/sec 10 min, 50 cm/sec) and the animals were killed 24 hr after the exhaustion protocol. The level of TLR4, IL-6, TNF-${\alpha}$, and SOCS-3 mRNA expression was measured by quantitative real-time PCR in soleus and plantaris muscles. A single bout of aerobic treadmill exercise increased TLR4 mRNA expression in the soleus muscle (p<0.05), whereas plantaris TLR4 mRNA expression did not change. Additionally, acute exercise led to a significant increase in IL-6, TNF-${\alpha}$, and SOCS-33 mRNA in the soleus muscle, while transcripts of these genes were not affected by exercise in the plantaris muscle. In conclusion, expression level of several immune-related genes such as TLR4, cytokines, and SOCS-3 is regulated by acute exercise in a fiber type specific manner.
We present here a new PCR-based cloning technique that allows the different PCR products during mouse embryogenesis. Recently, mRNA differential display described by Liang & Pardee (Science 257, 1992) and re-confirmed by Zimermann & Schultz (PNAS 91,1994). This method will detect the appropriate changes in the temporal patterns of expression or in the transition from maternal control to zygotic control as well as the functional difference of embryo with polyspermy or monospermy, the difference of expression between successfully hatched blastocyst and blastocyst failed to hatching, response to agents, and cell cycle regulation. By this methods, we have cloned an eDNA, which showed mouse 2 cell specific expression. Genomic DNA digested with EcoRI showed approximately 15 kb and then showed higher expression in fetal liver rather than adult liver. Furthermore, this gene is likely to have 2 mRNA by alternative splicing.
Proceedings of the Botanical Society of Korea Conference
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1987.07a
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pp.357-389
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1987
In an attempt to clarify the physiological functions of individual isoperoxidases, we have studied enzymatic and immunological properties as well as cellular distribution of isoperoxidases from tobacco callus and Korean radish. The gene expression patterns of isoperoxidases in shoot and non-shoot-forming tobbaco callus were also examined by rabbit reticulocyte lysatein vitro translation system. These results indicate that fraction of translatable poly(A)-isoperoxidase mRNA was increased considerably in shoots. At the present time, at least 6-7 isoperoxidases could be detected from the translation mixture of total cellular RNA, among which only one cell wall localized anodic isoperoxidase (named A3) mRNA was bimorphic mRNA. These data suggest the possible regulation of peroxidase activity during shoot formation by altering the polyadenylation state of mRNA. In case of Korean radish seedlings, poly(A)- peroxidase mRNA were also increased depending upon aging.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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