목 적 : human CMV가 생성하는 분자량 72,000 dalton의 immediate early protein(p72)과 반응하는 단세포군 항체를 국내에서 분리된 CMV 야생주로 직접 제작하여 진단에 사용해 보기 위한 것이다. 방 법 : 정상 인체 섬유아세포(Foreskin 유래)를 10% 우태아혈청이 함유된 Eagle' s minimal essential medium(MEM)에서 배양하여 사용하였으며 마우스 골수종세포는 P3X63 Ag8.653(ATCC, Mary land USA)을 $5{\times}10^5/ml$ 세포수를 유지하도록 배양하였다. 사용된 항원은 선천성 CMV 감염아의 소변으로부터 검출한 CMV(KJHJ90)를 대량 증식시켜 사용하였다. 생후 6~8주된 Balb/c마우스의 복강내에 CMV 항원을 1주일 간격으로 4회 주사한 후 면역시킨 마우스 비장에서 얻은 임파구와 형질세포종세포로 최적발육기의 P3X63-Ag8.653을 사용하여 융합하였다. 융합세포를 배양한 후 간접면역형광항체법을 이용하여 항체가가 높은 것을 골랐다. 결 과 : 생산된 28종의 단세포군항체 중 그림 1과 같이 LPC12와 LPC23클론이 AD169에 감염된 세포의 핵에 특히 강하게 반응하였다. 정제된 AD169를 SDS-PAGE한 후 Western blotting을 하여 생산된 단세포군항체가 반응하는 항원의 분자량을 확인하였으며 그 중 LPC12와 LPC23클론에서 생성된 단세포군항체는 약 72KDA의 항원과 특이적으로 가장 강하게 반응하였다. 결 론 : 본 연구에서 제작된 LPC12와 LPC23 클론에서 생성된 단세포군 항체를 이용하여 선천성 CMV감염으로 확인된 소아의 소변을 이용하여 CMV AD 169 주 유래 항체(P63-27)과 비교한 DEAFF 검사상 동일한 결과를 확인한 바 LPC12와 LPC 23 클론 항체는 AD 169(P63-27)과 같이 CMV 감염의 조기진단에 사용할 수 있을 것으로 사료된다.
본 연구에서는 배연가스속에 함유되어 있는 휘발성 유기화합물과 입자물질 등의 오염물질을 보텍스 사이클론의 원리를 이용하여 동시에 제거하는 메카니즘을 규명하고 나아가 효율을 높이기 위한 영향인자들을 분석 하였다. 보텍스 사이클론 속에 접선방향으로 압축된 공기를 주입함으로써 Joule-Thomson 팽창에 의하여 형성된 저온부분에서 페놀, 탄산가스 및 수분이 활성탄소 입자표면에 응집, 응축 및 흡착이 일어나도록 하였다. 활성탄소와 같은 입자물질은 쉽게 응축될 수 있는 물질들이 저절로 응집이나 응축은 입자물질의 입경이 증가함에 따라 속도는 급속도로 빨라져서 제거효율이 상승된다. 본 연구실험에서 탄산가스와 페놀의 제거효율은 각각 87.3%와 93.8%로 얻어졌다. 그리고 페놀 제거효율은 톨루엔과는 달리 상대습도의 증가에 따라 함께 증가되었고, 활성탄의 주입으로 제거효율도 증폭되었다. Joule-Thomson 계수는 상대습도 10%~50% 범위에서는 도입되는 압력이 높아짐에 따라 같이 상승하였다. 실험의 결과로는 도입되는 압력과 수분이 보텍스 사이클론의 처리효율에 미치는 영향은 공기 속에 함유되어 있는 대상물질의 물리화학적 특성과 입자물질의 특성에 따라 많은 영향을 받고 있음을 알 수 있고, 따라서 휘발성 유기화합물의 제거효율은 수분의 양과 입자물질의 물리화학적 특성을 조절함으로 제어할 수 있다고 판단된다.
항-AFP 단일 클론 항체를 생산한 다음, 이를 이용한 noncompetitive ELISA 방법으로 정상인과 간암 및 그 밖의 간질환 환자의 혈청내 AFP농도를 측정해 본 결과 간암진단 방법으로는 혈청 AFP농도 측정이 필수적임이 확인되었다. 또한 간암 및 그 밖의 간질환 환자의 조직에 대한 항-AFP-항체의 반응성을 immunperoxidase 방법과 indirect immunofluorescence 방법으로 검정해 본 결과, 간암조직세포 및 일부 간질환 조직세포에서 항-AFP-항체에 대해 양성반응을 나타내었다. 그러나 그 반응성의 정도는 간암조직세포에서 보다 간암조직 주위의 비신생 간세퐁서 더욱 높았다. 그러므로 간암 진단에 있어서 AFP항원을 면역조직화학적으로 검정하는 방법은 적합하지 않았다.
유전자 재조합 균주의 발효에 있어서 플라스미드의 안정성과 발효공정의 최적화에 대해 개략적으로 서술하였다. 클론된 DNA의 발현은 플라스미드의 안정성을 크게 저해하며, 저하된 플라스미드의 안정성은 재조합 균주의 생산성을 많이 떨어뜨린다. 최적 발효 조건은 각각의 숙주-벡터 시스템, 사용한 배지, 생성물 등에 따라 크게 변한다. 동일한 숙주-벡터 시스템의 경우도, 사용하는 배지에 따라 온도, 희석률 또는 성장속도에 의존하는 정도가 달라지고 또 최적값도 다 변한다. 또한 발효조건의 최적화가 균체 내 플라스미드의 자기복제,mRNA로의 전사, 단백질로의 translation, 더 나아가 미생물 전체의 생리와 밀접하게 관련이 있다.
국내에서 소비되는 콩 14품종에 대한 항원성 검사를 토끼에서 생산된 다클론 항체와 콩 알레르기 환자 혈청을 이용하여 검사하였다. 그 결과 콩 특이성을 갖는 다클론 항체를 이용한 연구에서는 일부 콩 품종에서 항원성을 나타내는 단백질이 추가적으로 존재하거나 결여된 것을 확인할 수 있었으며, 14품종 중 특히 진품콩에서는 다른 품종보다 항원성이 강한 단백질이 확인되었다. CAP검사에 의해 콩 항원에 대한 특이 항체 값이 65 U/mL 이상인 콩 알레르기 환자 4명의 혈청을 이용한 반응성 비교에서는 다른 품종에 비해 단백콩과 신팔달2호에서 조사된 모든 콩 알레르기 환자혈청과 상대적으로 뚜렷이 높은 반응성을 나타냈고, 대원콩에서 제일 낮은 반응성을 나타냈다. 이러한 결과는 콩 품종에 따라 포함된 단백질의 알레르기성 차이가 있음을 의미하며 콩을 원료로 식품을 제조할 때 콩 품종을 고려함으로써 알레르기 반응으로 인한 문제를 줄일 수 있는 가능성을 제시한다.
$25^{\circ}C$의 수온환경에서 조도에 대한 생태적지위 성분의 종내 변이성을 파악하기 위 해, 한국연안 산규조인 Skeletonema Costatum 클론 7종류의 최종생물중 (흡광도 최대) 과 일일성장률(일일 분열 횟수)을 측정하였다. 7가지 S. costatum 클론 중 6종류의 최 대성장률이 적용한 중간 조도인 6000 lux에서 가장 높았고, 연해역에서 분리된 나머지 한 종류인 YS4는 9000 lux에서 최대치를 나타내었다. 적용한 최저 조도인 2000 lux에 서 4종류의 S. costatum 클론들은 9000lux에서 가장 낮은 최종생물량 값을 나타내었 다. 세 가지 조도 각각에서 구한 측정치의 변동계수로써 표시한 7가지 S.costatum 클 론들의 평균성장률 및 평균 최종생물량의 종내 변이도는 모두 10% 이내였다.
혈청의 종류에 따른 하이브라도마 2c3.1세포의 성 장과 간염 표면 항원에 대한 단얼클론항체 생산에 미치는 영향을 조사하였다. 혈청은 fetal bovine s sera, newborn bovine calf sera, including supple m mented calf sera, horse serum, goat serum의 종류 를 사용하였다. 혈 청농도를 0.5%, 1.25%, 2.5%, 5%(v/v)로 변화시키고, 초기 세포농도를 $5{\times}10^4, 1{\times}10^5, 2{\times}10^5,$ cells/ml로 변화하여 현탁배양한 후 각각의 배지에서 하이브리도마 세포성장과 생산된 단일클론항체의 최대값을 비교하였다. 초기 세포농도를 $1{\times}10^5,$ cells/mlcells/ml로 일정하게 유지하였을 때 세포성장은 혈청의 종류에 관계없이 혈청농도의 증가와 밀접한 관련이 있었고, 혈청농도의 증가에 따른 서l포성장 증가로 인하여 항체 생산도 또한 증가되였 다. 5%의 혈청농도에셔 세포성장과 항체 생산은 초기 세포농도의 증가함에 따라 증가하였다. 같은 종 류의 혈청이라도 혈청 제조사에 따라 세포성장과 항 체 생산에 따른 영향을 끼침을 알았다. 이들 결과로 부터 하이브라도마 세포성장과 항체 생산을 증가하고 세포배양 비용을 줄일 수 있는 혈청의 종류와 농도를 결정하였다.
90 kDa-heat shock protein (HSP90)은 여러 가지 스트레스에 의해서 유도되는 주요 스트레스단백질 가운데 하나이다. HSP90은 스트레스가 없는 정상적인 상황에서도 일정량 합성되는 단백질로, 세포 내에서 kinases나 스테로이드호르몬 수용체와 같은 여러 조절단백질 및 구조 단백질과 결합하는 것으로 알려져 있다.본 연구에서는 HSP90의 생화학적인 특성을 조사하는데 사용할 목적으로DEAE- cellulose chromatography, hydroxyapatite chromatography, Sephacryl S-300 gel filtration의 방법으로 닭근육조직으로부터 HSP90을 순수 분리하고, 이에 대한 단일클론항체를 murine hybridoma technique을 이용하여 생성하였다. 생성된 클론들에 대해서 ELISA와 Western blot을 실시한 결과 HSP90을 인지하는 A204, C112, C302, C410의 4가지 단클론을 얻었다. 특히 C112는 Western blot과 native immunoprecipitation 실험에서 인간, 토끼, 닭, 쥐, 어류의 HSP90을 인지하지만 초파리, E. coli의 HSP90은 인지하지 못하는 것으로 나타났다.
CALLA 항원에 대한 단일클론 항체는 백혈병의 진단이나 치료에 대한 활용가능성을 잠재하고 있기 때문에 구미, 일본 등지에서는 이에 대한 연구가 활발하다. 이 점에 유의하여 본 연구자들은 CALLA에대한 새로운 단일클론항체 KP-22를 개발하고, 이 단일클론항체를 이용 CALLA의 분포를 여러 세포주에 대하여 조사한 결과 common ALL, Burkitt's lymphoma, T-ALL 세포주는 현저한 CALLA양성 반응을 보였으나 사람의 섬유아세포 계역을 제외한 모든 비백혈병성 암세포주 및 myelocytic leukemia 세포주들은 음성이었다. 막 단백질을 125I 방사능 표지한 후 KP-22를 이용, 면역 침전법으로 백혈병세포주와 사람의 정상 섬유아세포에서 CALLA를 정제하여 전기영동한 결과 각각 분자량이 약 95Kd 및 100Kd인 단일 band로 확인되었으나 이들의 peptide mapping 양상은 같았으므로 분자량에서의 미세한 차이는 posttranslational modification 과정에서 첨가되는 sialic acid에 기인 하는 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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