이 연구의 목적은 원래의 치수조직과 유사한 조직을 재생하기 위한 pulp tissue engineering의 한 방법으로 건전한 조직으로부터 배양된 치수세포와 쥐의 조섬유세포(NIH 3T3 cell)를 Rat tail type I collagen solution에서 3차원적으로 관찰하기 위한 것으로, 콜라젠 젤의 수축량과 세포의 증식 량을 비교하였으며, 또한 마모된 사람치아의 표면과 배양용기에서 두 세포의 증식 량을 비교하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 콜라젠 젤에 NIH 3T3 세포를 배양한 경우 그 수축량은 최소였으나, 치수세포를 배양한 경우 그 수축량은 현저하였다. 2. 서로 다른 수의 치수세포를 콜라젠 젤에서 배양시킨 경우 세포 수가 많을수록 수축량이 증가하였으며, 세포가 없는 콜라젠 젤은 수축하지 않았다. 3. 치수세포를 콜라젠 젤에서 18일간 배양시킨 후 세포의 증식은 거의 없는 반면, NIH 3T3 세포는 계속 증식하였다. 4. 마모된 사람 치아 표면과 배양 용기에서 치수세포와 NIH 3T3세포를 배양한 경우 NIH 3T3세포가 치수세포에 비해 빠르게 증식 하였으며 , 특히 사람 치아의 표면에서 NIH 3T3세포가 현저히 빠른 증식을 보였다. 이상의 결과는 치수세포를 type I collagen gel에서 3차원 적으로 배양 후 치수조직의 재생을 유도하는 pulp tissue engineering에 관한 연구에 발판이 될 것으로 사료된다.
조직공학에서 생체재료의 생체적합성과 조직재생능력은 생체재료가 생체에 적합한지를 판단하는 가장 중요한 요소이다. 콜라젠은 인체조직을 이루는 주된 단백질이고, GAGs은 조직의 미세환경을 결정짓는 주요한 요소로 알려져 있다. 본 연구에서는 1형 콜라젠 스폰지를 탈수 열처리 (A군)하고 EDC로 가교결합한 것 (B군)과 CS를 첨가하여 EDC로 가교결합한 군 (C군)의 스폰지 형태의 콜라젠 지지체을 제조하였다. 제작된 콜라젠 스폰지를 3 mm의 디스크 형태로 토끼 각막의 실질부위에 주머니형태로 이식하였다. 8주 동안 각막의 신생혈관 생성, 혼탁, 지지체의 투명도 정도를 확인하고, 2주, 4주, 8주 후에 적출하여 염증과 각막 섬유모세포의 이동을 확인하였다. 모든 군에서 염증, 신생혈관 생성, 혼탁은 일어나지 않았다. 그러나 CS가 첨가된 콜라젠 스폰지에 섬유모세포의 이동이 많았고, 이식물의 투명도가 증가하였다. 1형 콜라젠 스폰지는 각막 간질에의 생체적합성이 뛰어나 각막 간질로의 대체 가능성이 크고, CS가 첨가된 1형 콜라젠 스폰지는 조직공학적 생인공각막의 재구성에 큰 도움을 줄 것으로 기대된다.
본 연구에서 프로모터-리포터 분석방법을 통해 인슐린 유사 성장인자-1의 프로모터를 자극하는 천연물을 선별한 결과 사인 추출물이 가장 좋은 프로모터 자극효과를 나타냈으며, 무모생쥐에서 패쇄첩포 후 RT-PCR로 실험한 결과 IGF-1 mRNA를 $35\%$ 증가시키는 것으로 나타났다. 사인 추출물의 피부 주름개선 효과를 알아보기 위하여 인체 섬유아세포에서는 type-I collagen과 MMP-1 합성 변화를 관찰하였으며, 무모생쥐에서는 콜라젠의 증가와 진피 두께를 관찰하였다. 그 결과, 동위원소를 이용한 콜라젠 증가실험에서 type-I collagen은 $38\%$ 증가하였으며 무모생쥐에서 실시한 RT-PCR 결과에서는 mRNA가 $21\%$ 증가하는 것으로 관찰되었다. MMP-1 효소발현의 경우 ELISA 분석을 통해서 $63\%$의 높은 발현저해능을 확인하였고 Western blot에서도 발현이 저해되는 것을 확인하였다 추출물을 무모생쥐에 패쇄첩포 하였을 경우 대조군에 비해 진피 두께가 두꺼워지고 콜라젠 양도 증가되는 것으로 조직염색 관찰을 통해 확인하였다. 이상의 결과를 통해 사인추출물은 피부 주름개선에 좋은 효과를 나타내는 것으로 보이며, 여기에는 인슐린 유사성장 인자-I의 발현증가와 관련된 기전이 관여하는 것으로 판단된다.
양막은 다양한 생체재료로 이용되어 왔으며 생체적합성과 환부의 치료효능이 우수한 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 양막을 갈아 양막스폰지를 제조하고 중간엽줄기세포를 배양한 뒤 누드마우스이식을 통하여 콜라젠스폰지와 비교하여 골형성유도능에 대한 연구를 실시하였다. 연구결과 세포의 부착과 증식면에서는 두 시료가 유사하였으나, 체내에 이식한 결과 양막스포지군에서 좀 더 많은 콜라젠 분비와 칼슘이 침착되었음을 확인하였다. 그리고 면역화학염색 결과 골형성 시 필요한 오스테오칼신과 오스테오넥틴이 좀 더 발현된 것을 관찰할 수 있었다. 따라서 양막은 골형성유도를 향상시킬 수 있는 가능성이 있음을 알 수 있었다.
L-Ascorbic acid 및 그 유도체는 항산화 작용과 미백작용 및 섬유아세포의 생장 촉진과 콜라젠 생합성의 증가시키는 효과가 있으므로 화장품에서 오래 전부터 사용되어 왔다. 본 연구에서는 생체에 대한 안전성과 안정성이 우수한 L-Ascorbic acid 유도체를 개발하기 위하여 인지질과 유사하게 L-Ascorbic acid 에 3-Aminopropane phosphoric acid를 결합하여 L-Ascorbic acid-3-aminopropane phosphoric acid diester를 합성하였다. ASA-APPA 는 2-Chlorotetrahydro-2H-1, 3, 2-oxazaphosphorine P-oxide 와 5, 6-isopropylidene L-Ascorbic acid 를 반응 시킨 후 산 사수분해 반응을 통하여 얻을 수 있었다. ASA-APPA는 수용액에서 안정성이 우수하였으며, 독성실험에서 무독성 물질이며, 인체 첩포 실험에서도 무자극 물질임을 확인하였다. 그리고, ASA-APPA 는 L-Ascorbic acid 와 3-APPA 의 혼합물과 거의 유사한 섬유아세포의 증식효과를 나타내었으며, melanoma 에 대한 멜라닌 생성 억제 실험에서 L-Ascorbic acid phosphate magnesium salt 와 유사한 효과를 보였다. 따라서 ASA-APPA 는 멜라닌 생성 억제 효과와 섬유아세포의 증식 효과를 갖는 새로운 화장품 원료로서 사용이 가능할 것으로 생각된다.
Harmaline을 포함한 ${\beta}-Carboline$ 알카로이드들은 마이크로조움의 효소성 또는 비효소성 지질 과산화를 억제한다고 제시되고 있으나, 이들의 항산화 작용기전은 분명하지 않다. 본 연구에서는 $Fe^{2+}$와 $H_2O_2$에 의한 hyaluronic acid, 지질과 콜라젠의 산화성 손상에 있어 harmaline과 harmalol의 항산화 능력을 관찰하였다. 또한 반응성 산소대사물에 대한 이들의 제거작용을 조사하였다. Harmaline, harmalol, superoxide dismutase, catalase와 DMSO는 $Fe^{2+}$와 $H_2O_2$에 의한 hyaluronic acid의 변성과 $Fe^{2+}$에 의한 지질 과산화를 억제하였다. 이들 반응에서 DABCO는 hyaluronic acid의 변성을 억제하였으나 지질 과산화에 영향을 나타내지 않았다. ${\beta}-Carboline$은 $Fe^{2+}$, $H_2O_2$와 ascorbic acid에 의한 cartilage collagen의 변성을 억제하였다. Superoxide dismutase에 의하여 억제되는 $Fe^{2+}$의 자가산화에 따른 ferricytochrome c의 환원은 harmaline과 harmalol의 영향을 받지 않았다. 또한 이들은 $H_2O_2$에 대하여 분해작용을 나타내지 않았다. $Fe^{2+}$와 $H_2O_2$의 존재하에서 OH 생성은 harmaline, harmalol과 DMSO에 의하여 억제되었다. Harmaline과 harmalol은 반응성 산소대사물인 OH 과 아마도 철이온-산소 복합체에 대한 제거작용으로써 $Fe^{2+}$와 $H_2O_2$에 의한 hyaluronic acid, 지질과 콜라젠의 산화성 손상을 억제하고, 항산화 능력을 나타낼 것으로 추정된다.
n-3 불포화지방산이 관절염의 발생 및 경과에 미치는 영향에 대해 알아보고자 Louvain종 흰쥐를 사용하여, 실험군을 정상군과 면역유도 (콜라겐+incomplete Freund's adjuvant)군으로 나누었고, 면역유도군은 다시 대조군 (정상식이) 및 n-3 다불포화지방산군 (식이에 5% n-3 다불포화지방산 함유) 으로 구분하여, 관절염 유도 1 주일전부터 n-3 다불포화지방산이 함유된 식이를 섭취시켰으며 관절염의 발생여부를 x-ray 소견과 광학현미경적 관찰을 통하여 확인하였다. 면역유도 5 주에 대조군의 38%에서 x-ray 소견상 족부종과 광학현미경상 염증소견이 발견되었으나 n-3 다불포화군에서는 이러한 변화가 없었다. 혈당과 혈장 인슐린은 면역유도나 n-3 다불포화지방산 투여에 의한 변화가 없었으나 혈장 중성지방과 콜레스테롤은 n-3 다불포화지방산투여에 의하여 감소하였다. n-3 다불포화지방산의 투여가 콜라젠에 의한 관절염의 발생을 예방 또는 치료할 수 있을 것으로 생각되며 이의 작용기전을 설명하기 위하여 후속 연구가 요망된다.
다양한 pH 환경에서 감응 할 수 있는 CNTs/Collagen Hydrogel들을 양이온성 CNT인 CNT-NH2와 그리고 음이온성 CNT인 CNT-COOH를 Collagen(CG)과의 접목을 통하여 양이온성 또는 음이온성 Hydrogel들을 합성하는데 성공하였다. 구체적으로 pH 4에서 크게 Swelling되는 양이온성 CNT-NH2/CG Hydrogel과 pH 10에서 크게 Swelling되는 음이온성 CNT-COOH/CG Hydrogel들을 합성하였다. pH 4~10 범위에서의 제타전위 값 측정을 통해 사용된 CNT(CNT-NH2와 CNT-COOH)들, CG, 합성된 CNT-NH2/CG Hydrogel 및 CNT-COOH/CG Hydrogel들의 표면전하 값 변화를 추적하였다. 서로 다른 pH 조건에서 Swelling 변화 실험을 통해 CG의 Fibril사이 공극 변화를 예측해 약물 방출 가능성을 체크하였다. 양전하성 CNT-NH2/CG Hydrogel의 경우 pH 4에서 가장 높은 Swelling(pH 7 대비 5% 상승)을 보였으며, 반대로 음전하성 CNT-COOH/CG Hydrogel의 경우에는 pH 10에서 가장 높은 Swelling(pH 7 대비 10% 상승)을 보였다. 이러한 결과는 본 연구에서 개발 한 pH 감응성 Hydrogel들이 산성(pH ~2의 위장) 또는 알칼리성(pH ~9의 소장)에서 특이적으로 확장된 다공성 구조를 통해 약물을 쉽게 방출 할 수 있는 pH 감응성 약물전달 시스템에 적용 가능함을 확인 하였다.
국내에서 런천미트라고 통칭되는 돈육통조림의 품질 비교를 위하여 시중에서 유통되는 4개국 8개회사의 제품 12가지를 분석하였다. 아질산염 함량은 제품간에 다양한 수준을 보여주었으나 모두 낮은 수준이었으며, 소디움은 한두개의 제품을 제외하고는 비슷한 수준이었다. 사용된 원료육의 품질비교를 위하여 콜라젠 함량과 총육색소 함량을 분석하고 전기영동으로 순수한 돈육과 비교하였다. 수입품에서는 런천미트와 chopped meat 사이에는 차이가 있었으며, 국내산에서는 대부분 비슷하였다. 수입품과 국내산 비교시에는 국내산은 콜라젠 함량이 수입품의 chopped meat와 비슷한 수준이었으나 총육색소 함량은 월등히 높았다. 전기영동상으로는 런천미트나 chopped meat 제품 혹은 기타제품 모두의 돈육함량을 정량적으로 비교하기가 매우 곤란한 것으로 보인다. 일반성분상으로는 국내산이나 수입품 모두 런천미트가 다른 제품보다 탄수화물 함량이 높고, 국내산 런천미트의 품질은 수입품 런천미트나 chopped meat 제품의 혼합상태로 판단된다. 따라서 국내에서도 런천미트라는 저가제품의 품질규격이 확립되어야 수입품과의 가격경쟁력을 가질 수 있을 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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