In order to investigate the possibility of in vitro mass propagation via somatic embryogenesis from Sicyos angulatus L., effects of plant growth regulators and carbon sources on callus induction and somatic embryogenesis were evaluated. Optimal combinations of plant growth regulator for callus induction from cotyledon and inflorescence explants were 2,4-D 2.0 mg/L + BA 0.1 mg/L and 2,4-D 1.0 mg/L + BA 0.1 mg/L in MS basal medium supplemented with sucrose 30 g/L,, respectively. Somatic embryogenesis was observed from cultured inflorescence explants, but it could not be achieved from leaf or cotyledon explants. The most effective plant growth regulators for somatic embryogenesis from callus was NAA 1.0 mg/L + kinetin 10 mg/L in the half strength of MS basal medium supplemented with 20 g/L sucrose.
An efficient protocol has been developed for rapid mass propagation of sweetpotato from shoot-tips derived embryogenic callus. Optimal embryogenic callus was induced from shoot apical meristem explants on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 1mg/L 2,4-D. The addition of casein hydrolysate in the media increased the embryogenesis efficiency of sweetpotato. Somatic embryos were easily induced from the embryogenic callus on MS basal medium containing 300-500mg/L casein hydrolysate without phytohormon. Treatment of casein hydrolysate (100∼300mg/L) with 1mg/L 2,4-D also improved the secondary embryonic efficiency from somatic embryos below 2mm in length. Plant regeneration was achieved via somatic embryogenesis and direct organogenesis. Regenerated planlets with well developed shoots and roots on MS basal medium were successfully transferred to soil.
This study was conducted to investigate the effect of electric fusion methods on cell fusion rate and embryo development by somatic cell nuclear transfer in Korean Native Cattle. The KNC ear cell was cultured in vitro for confluence in serum starvation condition(DMEM+0.05% FBS) for cell confluence. The zona pellucida of IVM oocytes were partially dissection using micro pipette. Ear cells were transferred into an enucleated oocyte. The reconstructed embryos were electrically fused with Zimmermann Cell Fusion Medium(ZCFM). Nuclear transfer embryos were activated with a combination of 10${\mu}{\textrm}{m}$ calcium ionophore(5 min) and 2.0mM 6-DMAP(3 hr). The activated embryos were cultured in CR1 -aa medium contains 0.3% BSA or 10% FBS at 37$^{\circ}C$, 90% $N_2$, and 5% $CO_2$in incubator for 6 days. The fusion rates were 51.6%(chamber) and 68.9%(needle), respectively and there were significantly difference between the fusion method(P<0.05). But, lysis rates were not significantly different(10.7%, 11.5%), respectively. The cleavage rates were significantly different between the chamber method(73.2%) and needle method(80.3%), respectively(P<0.05). The rates of early embryos(2∼4cells) and blastocysts of chamber and needle methods were 54.1%, 61.1% and 18.4%, 26.3% respectively, and needle method was significantly higher than chamber method(P<0.05). But, morulae formation rate were not significantly differences between the chamber(6.7%) and needle(6.2) method(P <0.05). These result suggest that electric fusion of needle method was to be profitable for nuclear transfer embryo fusion rate, blastocyst formation rate and reduce of oocyte lysis.
The somatic chromosome numbers of the Korean species of Senecio L. and two related genera are investigated here. Three different chromosome numbers were found: 2n = 40 in Senecio argunensis Turcz., S. nemorensis L., S. vulgaris L., Tephroseris flammea (DC.) Holub and 2n = 44 in T. phaeantha (Nakai) C. Jeffrey & Y.L. Chen. and 2n = 48 in Sinosenecio koreanus (Kom.) B. Nord., T. kirilowii (Turcz. ex DC.) Holub and T. pierotii (Miq.) Holub. The chromosome numbers of Sinosenecio koreanus (Kom.) B. Nord., Tephroseris flammea (DC.) Holub and T. phaeantha (Nakai) C. Jeffrey & Y.L. Chen. were different from those in previous reports.
The factors affecting direct somatic embryogenesis from different parts of explant in liquid culture of Scrophularia buergeriana were investigated. Direct somatic embryogenesis was dependent on the explant tissues and stem was the most efficient explant. Rapid shoot development occurred on stem after 3-week culture but roots were not developed yet. Plantlets were not formed through somatic embryogenesis after 3-week culture of petiole. Though direct somatic embryo was not observed from leaf segment culture for 3 weeks, normal plantlets were developed after 8-week culture. BA played the main role for somatic embryogenesis in liquid culture and adding of either IAA or NAA caused rather adverse effects. Culture of stem segments in MS liquid medium with BA at 0.5 mg/ l or 0.1 mg/ l was proved to be the most efficient method for producing plantlets through direct somatic embryos.
The effects of 2-arnino-3-methyIimidazo[4,5-fq]u inoline (IQ), 2-amino-6dimethyl-dipyrido[l,2-a;3',2'-d] imidazole (Glu-P-1) and aflatoxin B1 (AFBI) on the mitotic recombinations and somatic chromosome mutations were investigated using the transgenic Drosophila bearing a chimeric gene consisting of a promoter region of Drosophila actin 5C gene and rat DNA polymerase $. For investigating mitotic recombinations and the somatic chromosome mutations, the heterozygous (mwhl+) strain possessing or lacking transgene pol P was used. The spontaneous frequency of small mwh spots, due to deletion or nondisjunction etc., in the non-transgenic w strain and the transgenic plpol $1-130 strain was 0.351 and 0.606, respectively. The spontaneous frequency (0.063) of large mwh spots, arising mostly from somatic recombination between the centromere and the locus mwh, in the transgenic plpol $1-130 strain, was about three times higher than that (0.021) of the non-transgenic w strain. The mutant clone frequencies of two types induced by two heterocyclic mines (IQ and Glu-P-1) and AFBl in the transformant pbol PI-130 were two or three times higher than those in the host strain w. These mean that rat DNA polymerase P participates at least in the somatic chromosome mutations and mitotic recombination processes. And the present results suggest that the transgenic Drosophl!~ used in this study can be used as a hypersensitive, in vivo short-term assaying system for various environmental mutagens.
복제기법을 이용한 체세포 복제우의 생산에 있어서 문제점은 복제란의 이식후 수태율이 매우 낮으며 이에 대한 근본적인 원인을 해석하고, 수태율을 증진시킬 수 있는 새로운 방법이 요구되고 있는 실정이다. 따라서 본 연구는 체세포 복제 가축의 수태율이 낮은 근본적인 원인을 규명하기 위한 기초자료를 확보할 목적으로 복제란 이식우의 임신기간 중혈중 progesterone, cortisol, IGF-Ⅰ 및 IGF-Ⅱ의 농도를 분석하여 복제우의 수태율을 높이기 위하여 시험을 실시하였다. (중략)
본 연구실에서는 체세포복제 수정란 이식우의 분만전후 태아와 모체 및 태반과의 내분비적인 관계를 검토하기 위해 복제수정란 이식우의 분만 전후에 있어서, 혈중progesterone 과 TGF-$\beta$$_1$ 수준을 분석한 결과 정상우의 분만직전과 달리 혈중progesterone 및 TGF-$\beta$$_1$ 농도는 감소되지 않고 높은 수준을 그대로 유지되어 복제수정란이식우의 경우 정상적인 분만 signal이 나타나지 않는 것으로 나타났다. 본 연구는 체세포 복제소 수정란 이식우에 있어서 태반조직의 특성을 정상우의 동일한 시기의 태반과 비교 검토하였으며 분만시기에 있어서 태반의 역할을 검토하였다. 태반은 복제란 이식우 및 정상우 임신우를 술을 실시하여 태반을 채취하여 실험에 공시하였다. 정상우의 임신기간중 혈중 progesterone 농도는 임신초기와 중기에 다소 증가되어 유지되다가 임신말기에는 급격한 progesterone의 감소현상과 더불어 분만이 유기되는 것으로 나타났으나 복제우의 경우 분만예정일 직전까지 progesterone의 급격한 감소는 일어나지 않고 높은 농도로 유지되는 현상을 보였다. 이때 제왕절제 수술중 제대근방에 있는 태반궁부를 적출하여 중량을 측정한 결과 정상우의 궁부에 비해 유의적으로 무거웠으며, 이것은 태아의 중량과 정의 상관관계가 있음이 확인되었으며 태아 및 궁부의 중량이 무거울수록 분만 전후의 태아사망율이 높은 것으로 나타났다 이때의 궁부를 조직학적으로 검토한 결과, 복제우의 태반궁부는 정상우의 궁부에 비해 cytotrophoblast 및 syncytiotrophoblast가 적었으며 치밀하지 못한 형태를 확인할 수 있었다. 이때의 태반조직를 이용하여 세포질을 추출하여 단백질양상을 검토한 결과, 정상태반에 비해 복제태반은분자량 90kd, 65kd 및 18kd의 특이단백질이 존재하고 있음을 확인할 수 있었으며 이들 단백질을 HPLC system에 의해 분리한 결과 fraction 2와 3에서 특이한 단백질을 분리하였다. 이와 같이, 복제우의 태반에는 정상적인 임신과 분만을 비롯하여 복제송아지의 생존에 중요한 인자가 관여하고 있을 확인할 수 있었다.
Somatic chromosome numbers of 19 taxa of Korean Rubus was investigated. Subg. Anoplobatus (2 species), subg. Cylactis (1 species), subg. Idaeobatus (15 taxa) and subg. Malachobatus (1 species) are found in Korea. All taxa belonging to subg. Idaeobatus except for R. parvifolius which shows tetrapolid and hexaploid are diploid. The basic chromosome number of the genus was x=7. New chromosome numbers for 5 taxa were reported here: R. hongnoensis of Jeju-island endemic species, 2n=14; R. longisepalus, 2n=14; R. longisepalus var. tozawai, 2n=14; R. parvifolius, 2n=28; R. parvifolius var. taquetii, 2n=28. The rest 12 taxa except for R. coreanus Miq was well counted as 2n=14 and well consistent with previous reports from China and Japan. Our new chromosome level for R. parvifolius as 6x may indicate that speciation by polyploidization has occurred within Korean population. Unlikely to Japanese population (2n=42), Korean population of R. buergeri has same ploidy level with Taiwanese population as 2n=56.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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