본 연구에서는 ion-pair reversed-phase high performance liquid chromatography (IP-RP-HPLC)방식을 이용한 denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC)방법을 사용하여 기관지 천식을 조절하는 ${\beta}_2$-교감신경수용체 유전자의 돌연변이를 검출하였다. 50명의 천식 환자의 혈액에서 genomic DNA를 추출하여 중합효소연쇄반응 (polymerase chain reaction, PCR)을 이용해 증폭하고, 그 산물을 DHPLC로 분석한 결과, 50개의 시료 가운데 15개 (30%)의 돌연변이를 검출하였다. 최종적으로 유전자 염기서열결정법을 통해 DHPLC의 돌연변이 검출률이 정확함을 확인하였다.
25일령의 한우송아지가 10일 간의 호흡기질환과 출혈성 설사의 병역을 나타내다가 폐사하였다. 이 송아지는 다른 송아지들과 비교해보았을 때 극도로 위축되어 있었다. 꼬리와 회음부의 분변 흔적은 만성설사가 지속되었음을 말해주었다. 부검시 다양한 기관(조직)에서 반상출혈이 관찰되었다. 역전사 중합효소연쇄반응에 의하여 소 바이러스성 설사병 바이러스가 진단되었다. 이 증례는 계통발생분석에서 BVDV-2a 그룹에 속하는데, 이것은 고병원성인 미국 균주890 (U18059)과 유사하다. 본 증례는 BVDV-2가 한국에서 유행하고 있다는 증거를 제공한다. 이를 통해 우리는 BVDV-2의 발생을 재확인하였다.
The present study attempted to apply polymerase chain reaction (PCR) to develop a rapid differential diagnosis among Marek's disease, reticuloendotheliosis and avian leukosis. The primers chosen to detect Marek's disease virus (MDV) flank the 132bp tandem direct repeat of the MDV genome. The primers selected for reticuloendotheliosis virus (REV) and avian leukosis virus (ALV) are based on proviral long terminal repeats of spleen necrosis virus and Rous-associated virus-2 genomes, respectively. The specific PCR products of MDV, REV and ALV were observed with each primer and the reaction was not cross-reacted among the viruses. MDV-specific DNA was also amplified from the MDV-induced lymphoma (MDCC-MSB1) but not from the REV-induced tumor and ALV-induced lymphoma (LSCC-1104B1). In addition, proviral DNA of REV from REV-induced tumor and proviral DNA of ALV from ALV-induced lymphoma were also amplified by REV-specific and ALV-specific PCRs, respectively. Therefore these three PCR methods may be used to rapidly differentiate among MDV, REV and ALV-associated tumors in diagnosis.
The purpose of this study was to evaluate the usefulness of the automated TB-PCR assay for the detection of Mycobacterium tuberculosis. The 807 cases were analyzed with their TB-PCR, AFB smear and culture in bronchial washing fluids, sputum and body fluids samples. The TB-PCR positive of the bronchial washing fluid, sputum and body fluids were 11.3%, 7.3% and 3.6%, respectively, in cases of AFB smear-negative and culture-negative. The sensitivity values of the bronchial washing fluid, sputum and body fluids were 93.3%, 100% and 50%, respectively, according to the culture result. The sensitivity of body fluids was lower than that of the bronchial washing fluid and sputum. The specificity values of the bronchial washing fluid, sputum and body fluids were 83.3%, 89.0% and 95.7%, respectively, according to the culture result. In conclusion, the automated TB-PCR assay proved to be a useful method for the detection of Mycobacterium tuberculosis in the bronchial washing fluid and sputum. But we think that there is still a need for us to study body fluids further.
PDMS와 ITO 유리를 이용하여 continuous-flow PCR chip을 제작하였다. PDMS를 이용하여 microchannel을 형성하여 주었고, ITO electrode를 heater와 sensor로 사용하기 위하여 반도체 공정을 통해 패턴을 형성하였다. microchannel내에 흐르는 시료의 온도를 제어하기 위하여 heater와 sensor를 calibration을 하였다. ITO heater는 인가된 전압에 대해 매우 선형적인 발열을 하였으며, ITO sensor는 온도에 대해 선형적인 저항 변화를 나타낸 바, 그 결과 continuous-flow PCR chip의 정확한 온도 제어가 가능하였다.
복부팽만, 안구돌출 및 체색혹화의 외부증상을 대표적으로 나타내며, 세균 및 기생충과 같은 병원체 감염의 원인이 아닌 버나바이러스성으로 판단되어지는 남해안 양식산 넙치, 조피볼락, 농어를 대상으로 RT-PCR 법에 의한 체내 감염 바이러스 검출을 행하였다. IPNV 및 MBV만을 선택적으로 확인 검출 할 수 있으며 감염어체를 사용한 검출에서 배양 세포법(12/50)에 비하여 높은 검출 감도(46/50)를 나타내는 RT-PCR 진단법을 도입하였다. 아울러 우리나라 남해안 양식장에 버나바이러스의 감염이 폭넓게 진행되고 있음을 확인할 수 있었다.
Objectives: Oral bacterial samples included subgingival, supragingival, and saliva plaques. As the diversity and number of microorganisms deffer depending on the area of the oral cavity and the method used, an appropriate and reliable collection method is important. The present study investigated oral bacterial sampling methods. Methods: Supragingival dental plaque was collected from the buccal and lingual tooth surfaces of study participants using sterilized cotton swabs. Plaques were collected from the subgingival area using a sterilized curette. Bacterial genomic DNA was extracted using MagNA Pure 96 DNA and Viral NA low-volume kits. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was performed using the PowerCheckTM Periodontitis Pathogens Multiplex Real-time PCR kit. Results: Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Prevotella intermedia, and Fusobacterium nucleatum of the orange complex were not observed in the subgingival biofilms of all study participants. For Porphyromonas. gingivalis, a significant correlation was observed between supragingival, subgingival, and total tooth surface biofilms. Compared to the supragingival and subgingival biofilmss, total tooth surface biofilm exhibited the highest bacterial count when the inswabbing method was used. Conclusions: Based on these findings, the supragingival swab method is recommended for oral bacterial research.
배 경 : 최근 결핵에 대한 새로운 백신 개발은 초회 면역 방법 및 추가 면역 방법을 이용하는 방향으로 연구되고 있다. 본 실험은 새로운 백신 후보 물질로서의 가능성을 알아보기 위하여 결핵균 adenylate kinase (AK), nucleoside diphosphate (NdK) 및 heat shock protein 70(Hsp70)의 결핵균에 대한 방어면역효능을 측정하였다. 방 법 : 재조합 단백질들을 정제하기 위하여 중합효소 연쇄반응으로 증폭한 결핵균 유전자 단편들을 E.coli expression vector, pQE30에 클로닝한 후, Ni-NTA resin을 이용하여 정제하였다. DDA와 재조합 단백질들을 마우스에 면역주사하고 면역반응 생성 유무를 확인하기 위하여 항체와 $IFN-{\gamma}$ 생성능을 측정하였다. 면역주사 한 마우스에 결핵균을 공기 감염시킨 후, 폐와 비장을 분리하여 결핵균 생균수 실험을 하였다. 결 과 : 재조합 단백질 AK, NdK 와 Hsp70을 면역보강제인 DDA를 이용하여 면역주사 한 결과에서, 생리식염수 혹은 DDA를 면역주사 한 마우스에 비교하여 재조합 단백질을 면역주사 한 마우스에서는 각 항원에 대해 항체와 $IFN-{\gamma}$ 생성능이 높게 나타났으나 결핵균에 대한 효과적인 방어면역효능은 나타나지 않았다. 결 론 : 마우스를 모델로 한 결핵균에 대한 방어면역효능 실험에서, 면역보강제 DDA를 이용한 재조합 단백질 AK, NdK 및 Hsp70을 면역주사 한 경우에는 결핵균의 성장을 효과적으로 조절하지 못하였다. 혼합 단백질 혹은 다른 T세포 면역보강제의 사용에 의한 추시가 필요하다.
본 연구는 치주인대 세포에 지속적이고 점진적 인장력을 가하여 치아 이동 시 형성되는 인장부위의 기계적 자극에 대한 생화학적 전달과 치조골 흡수와 생성 조절 기전을 이해하고자 하였다 치주인대 세포가 배양된 유연한 성장 표면을 가진 배지에 지속적이고 점진적인 인장력을 가하고 골흡수 인자인 $PGE_2$와 골형성 인자인 ALP의 생성량을 1 3 5. 12시간 후에 측정하여 정량비교하였고 파골세포 분화기전을 조절하는 OPG RANKL의 인자들과 matrix metalloproteinase(MMP)-1, -8, -9, -13, tissue inhibitor of matrix metalloproteinase(TIMP)-1의 인자들을 역전사 중합효소 연쇄반응 검사하여 m-RNA 발현을 비교한 결과 치주인대 세포에 인장력을 가한 경우 대조 군보다 $PGE_2$의 농도가 적었고 (p<0.05) ALP의 농도 변화는 없었으며 OPG의 mRNA 발현이 증가하였으나, RANKL의 mRNA 발현은 감소하였다 그리고 TIMP-1과 MMP-1 -8 -9, -13의 mRNA 발현이 대조군과 차이가 없었다. 이상의 연구에서 사람의 치주인대 세포는 점진적이고 지속적인 인장력에 대한 반응으로 $PGE_2$의 생성과 RANKL의 mRNA 발현은 감소하고 OPG의 mRNA 발현은 증가하여 골흡수를 억제하는 효과를 보이는 것으로 나타났다.
최근 유구치의 치수절단술 약제로 MTA의 임상 적용이 문헌들에서 보고된 바 있으나 MTA 표면에서 일어나는 유치 치수 세포의 반응에 대한 시험관내 연구는 많이 보고되지 않았다. 이번 연구의 목적은 유치 및 영구치에서 유래한 치수기질세포가 경화된 MTA 표면에서 나타내는 증식 및 분화 능력을 비교 평가하는 것이었다. 사람 영구치와 유치 치수 조직에서 분리된 치수기질세포를 경화된 MTA 표면에서 배양 후 세포증식율과 세포주기를 검사하였으며, 정량적 역전사 중합효소 연쇄반응(RT-PCR)을 사용하여 분화양상을 분석하였다. Runt-related transcription factor 2(Runx2)와 alkaline phosphatase(ALP)가 정량적 RT-PCR의 표지자로 사용되었고, MTA 표면에서 증식된 치수기질세포의 형태학적 변화를 주사전자현미경 하에서 관찰하였다. 영구치와 유치의 치수기질세포군은 세포증식률, 세포주기 분포 및 mRNA 발현 양상에 있어서 차이를 보이지 않았으며, 주사전자현미경 상에서 두 군 모두 수지상 형태를 나타내었다. MTA 상에서 관찰된 유치와 영구치의 치수기질세포의 비슷한 증식력 및 광화를 유도하는 세포로의 분화능은 유치의 치수절단술 제재로 MTA가 생체친화적으로 적합함을 보여준다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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