• KSBB Journal
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• 제11권2호
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• pp.193-200
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• 1996

DNA를 인식하여 절단하는 제한효소의 발견은 유전자를 연구, 조작할 수 있게 되어 분자생물학 연구에 큰 발전을 가져 왔다. 제한효소의 인식자리는 반 응용액의 산도, 유기용애의 소수성에 따라서 달라질 수 있다. 제한 효소 BamHI의 특이성 변화는 유기용 매의 소수성CLogP)과 산도에 직접적인 관계가 있다. 제한효소 BamHI의 인식자리의 특이성 변화는 산도 7.5에셔 LogP값이 -1.3~-1.35, 8.0에서 -1. 0 03~-2.5, 8.5에서 0.75~-2.5, 8.9에서 -0.32 ~­2 2.5 벙위에셔 각각 나타난다. 통일한 유기용매 혼합 물에서 산도가 알카리 일수록 낮은 유기용매 놓도에 서 특이성의 변화가 나타난다. DMSO용액에서 Bam H HI의 특이성 변화는 산도가 7.5일때 20% 농도에서 나타나지만 산도가 8.9일때는 4%에서 나타난다.

• 한국수산과학회지
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• 제30권5호
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• pp.804-808
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• 1997

한국산 참굴의 유전적 특성을 조사하기 위하여 한국의 지역별 참굴을 대상으로 mtDNA 제한효소 절편분석과 클로닝을 수행하였다. 지역별로 각각 20개체의 mtDNA에 대하여 8가지 제한효소를 사용하여 DNA 절편양상을 분석한 결과 서해안산 참굴에서는 개체간 차이가 없는 단일 양상이었으며 남해안산의 경우는 두 가지 양상을 보였으며 차이는 HindIII 절단양상에서만 나타났다. 그 중 소수 개체들에서 나타난 양상은 서해안산 개체들에서의 양상과 동일하여 남해안에 서해안산 참굴이 유입되어 혼재하는 것으로 추정되었다. 한국산 참굴의 mtDNA를 대장균 E. coli HB101에서 클로닝하여 유전적 분석을 용이하도록 하였다. 전체 mtDNA를 제한효소를 사용하여 세부분으로 나누어 pUC19 유전자운반체에 클로닝하였다. 클로닝된 재조합 DNA를 제한효소들로 절단하여 한국산 참굴 mtDNA의 제한효소지도를 작성하였다. 남해안산과 서해안산 참굴 mtDNA에서 HindIII 적단 양상이 다르게 나타남을 확인하였고 이는 남해안산이나 서해안산에서 염기치환의 돌연변이에 의한 것으로 사료되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권3호
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• pp.289-294
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• 1992

토양에서 분리한 여러 알칼리성 세균을 대상으로 제한효소의 유무를 조사하여 Bacillu sp. 8-13으로부터 제한효소의 활성을 발견할 수 있었다. 이 균주의 제한효소는 streptomycin sulfate 침전, ammonium sulfate 침전, DEAD-cellulose와 phosphocellulose ion exchange colum chromatography와 phosphocellulose ion exchange colum chromatography 과정을 통하여 정제하였고 0.1 SDS를 포함하는 7.5 polyacrylamide gel electrophoresis로 subunit의 분잘량을 조사한 결과 약 32,000 dalton이었다. 또 특히 이 균주는 형태적 배양학적 특성이 Bacillus alkalophilus subsp. haldurans와 매우 유사하며, 최적 생육, pH는 10.3이었고, 최적 증식온도는 $50^{\circ}C$ 이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제15권6호
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• pp.436-440
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• 1987

앞서 보고한 바와 같이 토양으로부터 분리한 K. pneumoniae NFB-320의 pullulanase 유전자를 pBR 322을 이용하여 E. coli에 cloning한 결과 약 14.4kb 의 재조합 plasmid DNA pYKL451을 얻었다. 이러한 pullulanase 유전자에 대한 유전적 정보를 얻기 위해 여러 가지 제한효소로 단일 혹은 이중 절단을 행하여 삽입된 pullulanase 유전자의 제한효소 절단지 도를 작성하였으며, E. coli(pYKL451)과 K. pneumoniae NFB-320이 생산하는 pullulanase의 효소적 특성을 조사하였다. 생산되는 두 균주의 효소는 50-55$^{\circ}C$ 부근에서 최적온도를 나타냈으며 최적pH는 모두 6.0이었다. 효소 안정성에 미치는 pH의 영향은 4$0^{\circ}C$에서 90min 간 방치했을 때 pH 5.0-10.0에서 안정하였으며 열안정성은 (pH6.0) 각 온도에서 한시간 처리하였을 때 4$0^{\circ}C$까지는 안정하였으나 5$0^{\circ}C$ 이상에서는 효소의 활성이 급격히 감소하였다.

• 한국동물학회지
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• 제36권1호
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• pp.14-20
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• 1993

한국산 도룡농, Hvnobius leechii의 7개 집단에서 mitochondrial DNA(mtDNA)의 변이가 조사되었다. MtDNA의 크기에서의 차이는 관찰되지 않았으나 제한효소 인식 부위에서의 차이가 조사되었다. MtDNA의 절편 양상은 각 집단에서 동일하게 나타났다. 제한 효소로 처리하여 얻어진 절편의 비교에서 종내 변이는 염기 치환에 의하여 발생한 것임이 분석되어졌다. 특히 하동과 제주 집단은 몇개의 제한 효소 인식 위치에서 나머지 5개 집단과 뚜렷한 차이를 보였다. 염기치환율(p값)은 공통 절편 비율(p값)을 토대로 하여 얻어졌으며 그 값은 0.004에서 0.064의 범위 내의 값으로 측정되었다. 하동과 제주 집단을 제외한 5개 집단의 비교에서는 비교적 낮은 침의 염기 치환율을 보였으나 제주와 나머지 집단들과의 비교에서는 염기치환율이 높게 측정되었다. 염기 치환율과 관련지어 염기 분화 연대를 측정한 결과 도룡뇽 7개 집단은 3개의 group으로 나뉘어 졌으며 이들은 약 188만년전에 분화된 것으로 사료되어 진다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제36권3호
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• pp.139-145
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• 1993

등전점 전기영동법에 의한 동위효소 분석과 제한효소 단편 다형화현상(RFLP) 분석기법을 이용하여 보리 품종 19종의 품종형을 구분하고 근연관계를 검토하였다. 보리 19품종은 동위효소 형태특성 에 따라 esterase는 7가지형으로, phosphoglucose isomerase는 3가지형으로, peroxidase는 4가지형으로, alcohol dehydrogenase는 2가지 형으로 각각 분류되었으며, 그 핵 DNA를 제한효소 EcoRV로 절단하여 DNA probe pMSU 71로 RFLP를 분석한 결과 2가지 품종형으로 구분되었다. 이 4가지 동위효소의 형태특성 및 핵 DNA의 RFLP 특성을 종합하면 보리 19품종을 13가지 품종형으로 구분할 수 있었다. 이렇게 구분된 13가지 품종형들은 Nei's F-statistics의 계산식으로 그 근연관계를 분석하였더니 $97.4{\sim}66.5%$ 범위의 근연관계를 보였다.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제52권4호
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• pp.271-280
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• 2010

본 연구는 제한급여하는 포유모돈사료에 Aspergillus niger 유래 복합효소를 수준별로 첨가하였을 때, 무제한급여 무첨가구와 비교하여 포유모돈의 생산성, 유생산 및 혈액성상에 미치는 영향을 조사하였다. 처리군은 무제한급여 대조군, 제한급여군내 0%, 0.02%, 0.04%, 0.08% 복합효소첨가구의 5처리구이었고, 처리구당 10두씩 총 50두의 모돈(Berkshire)을 공시하였다. 포유기간 동안 모돈당 포유자돈수는 9두로 표준화하였다. 모돈의 혈액성상을 조사하기 위하여 포유 27일차 오전사료급여 전에 전 모돈의 혈액을 채취하였다. 복합효소 첨가수준이 증가함에 따라 복당이유체중, 자돈이유체 중 및 복당증체중은 유의하게 증가하였고(P<0.05), 무제한급여 대조군과 제한급여내 첨가군 간에는 유의한 차이가 나타나지 않았다. 복합효소 첨가수준이 증가함에 따라 이유시 체평점 및 등지방두께가 유의하게 증가하였고(P<0.05), 포유 중 등지방두께가 전반적으로 복합효소 첨가수준이 증가함에 따라 적게 감소하는 경향이었다(P>0.05). 혈중 무기인의 농도는 복합효소수준이 증가함에 따라 유의하게 증가하였고(P<0.05), 혈중 유리지방산농도는 복합효소의 수준이 증가함에 따라 유의하게 증가하였다(P<0.05). 유생산량은 처리군 간에 유의한 차이가 없었고, 유지방생산량은 복합효소첨가 수준이 증가함에 따라 유의하게 증가하였다(P<0.05). 분배설량은 무제한급여군이 제한급여군보다 유의하게 높았지만(P<0.01), 제한 급여군내 복합효소수준이 증가함에 따라서는 유의한 차이가 나타나지 않았다. 분중 인배설량은 복합효소수준이 증가함에 따라 분내인배설량이 유의하게 감소하였다(P<0.05). 복당자돈증체대비 모돈 사료비는 복합효소수준이 증가함에 따라 무제한급여 대조군에 비하여 1.25% 내지 9.67% 절감되었다. 이상의 결과로부터 제한급여하는 포유모돈사료에 복합효소의 첨가는 포유기동안 복당 자돈생산성을 증가시켰을 뿐만 아니라 무제한 급여수준에 준하는 생산성적을 나타내어 사료비 절감효과가 나타났다. 또한 복합효소의 수준별 첨가에 따른 분중 인배설량 감소는 환경오염감소에 기여할 수 있을 것으로 생각된다.

• 한국축산식품학회지
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• 제25권2호
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• pp.218-225
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• 2005

본 연구는 mt DNA의 D-loop 영역을 probe로 이용한 Southern blot hybridization 분석 기법을 이용하여 한우에서 mt DNA의 RFLP를 분석하고 RFLP marker가 유생산에 미치는 영향을 분석하여 산유량 관련 DNA marker를 개발하고자 수행하였다. Mt DNA의 D-loop 영역내 404번부터 15061까지 1142 bp 크기의 염기 서열 부위를 특이적인 primer를 이용하여 PCR로 증폭하였다. Mt DNA를 HpaII, BamHI, XbaI, HinfI, EcoRI, HindII 및 RsaI 7종류의 제한효소를 이용하여 각각 절단한 후 DIG로 표지된 D-loop probe를 이용하여 검출한 결과 XbaI, RsaI, BamHI 및 HpaII 4종류의 제한효소에서 각각 RFLP 다형성이 검출되었고 EcoRI, HindIII 및 HinfI 3종류 제한효소는 변이가 존재하지 않았다. 다유 계통과 저유 계통 선발 집단간의 각 제한효소별 RFLP type의 출현빈도를 비교한 결과 BamHI 및 RsaI 제한효소에서 두 집단간의 RFLP type의 출현율에 각각 통계적 유의성(P<.05)이 인정되었다. 다유 및 저유성으로 극단의 육종가 값을 갖는 두 계통의 mt DNA D-loop영역의 염기 서열을 비교 분석한 결과 441번째 염기가 G/C, 469번째 염기는 T/C, 503번째 염기는 C/T, 569번째 염기는 G/A, 614번째 염기는 C/A그리고 644번째 염기는 C/T로 각각 염기가 치환되었고 특히, 다유 계통 개체의 677번째의 A염기가 저유 계통 개체에서는 결실되어 있다는 사실이 확인되었다. 한편, 한우 암소의 유생산에 영향을 미치는 효과를 규명하기 위하여 mt DNA RFLP 형과 송아지 이유시 체중, 생시체중 및 비유량을 측정하여 얻어진 육종가의 성적을 근거로 통계 분석한 결과 XbaI 제한효소의 RFLP type이 산유 능력 육종가와 유의적인 관련성이 확인되었다 (P<05). 즉, RFLP A type을 갖는 축군의 평균 육종가 추정치가 6.233으로 B type을 갖는 축군의 평균 육종가 추정치 0.757보다 월등히 높은 것으로 나타났다. 결론적으로 산유량과 관련성이 확인된 mt DNA RFLP type은 한우의 산유량 향상을 위한 DNA marker로 이용 가능할 것으로 기대된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권4호
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• pp.301-306
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• 1989

Zymomonas mobilis ATCC 10988로부터 분리된 chromosomal DNA를 제한효소 Sau3Al으로 부분 절단한 후 이를 BamHI으로 완전 절단하여 alkaline phosphatase를 처치한 pUC9과 ligation하여 Escherichia coli JM83을 형질전환시키는데 사용하였다. 알코올 탈수소 효소활성을 나타내는_대장균 형질전환체를 선별하기 위해 allyl alcohol을 사용하였는데 이 때 allyl alcohol을 함유한 LB 한천 배지에서 자라지 못하는 두개의 clones을 얻었다. 이들 clones으로부터 분리한 plasmids를 여러가지 제한효소로 처리하여 agarose gel 전기영동으로 분석한 결과 2.6kb 크기의 동일한 DNA 조각을 공유하고 있음이 밝혀졌으며 이들 plasmids를 함유하고 있는 대장균 형질전환체와 Z. mobilis에서 생성된 효소를 각기 polyacrylamide gel 전기영동한 후 효소활성을 염색하고 또한 알코올 기질특이성을 조사한 결과 이들 plasmids 가 Z. mebilis 의 alcohol dehydrogenase II 유전자를 함유하고 있음이 밝혀졌다.

• 미생물학회지
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• 제25권3호
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• pp.180-183
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• 1987

Type II제한효소 Stu I을 순수정제하고 그 효소적 특성을 연구하였다. 100g(we weight)의 Streptomyces tubercidicus(ATCC 25502)로부터 얻은 crude extranct를 ammonium sulfate fractionation한 후, DEAE-Sephadex(A-50), QAE-Sephadex(A-50) 그리고 Heparin-agarose의 순서로 column chromatography를 수행하여 1,2mg의 비특이성 nuclease가 없는 Stu I 제한효소를 얻었다. 이 시료에 포함되어 있는 다른 오염 단백질은 Sephadex G-100 column으로 gel filtration 하여 제거함으로써, 순수한 Stu I 단백질을 얻을 수 있었다. 정제된 Stu I 제한효소는 10% SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 결과 한 개의 band로 나타났으며, 그 분자량은 34,000 $\pm$ 1,000 dalton이었다. 이 효소는 $Mg^{2+}$이온 존재하에 중성의 pH(7.0-8.0)에서 최대의 활성을 나타내었다. NaCl은 이 효소의 활성에는 필요하지 않았다.