• 한국양봉학회지
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• 제32권3호
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• pp.171-180
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• 2017

Slow Bee Paralysis Virus (SBPV)는 꿀벌 그리고 뒤영벌의 병원성 바이러스로써, 벌의 앞발을 마비시킴으로 폐사를 야기한다. 본 연구는, 뒤영벌에서 빠르게 SBPV 검출하고자 SBPV 특이 초고속 PCR법을 개발한 것을 보고하는 것이다. SBPV 특이 초고속 PCR은 제반 조건을 최적화한 후, $1.0{\times}10^8$ 분자의 SBPV 특이 유전자의 존재를 3분 35초 만에 인식할 수 있었으며, 최소 $1.0{\times}10^1$ 분자의 DNA까지 정량적으로 측정할 수 있었다. 한편, 국내외에서 생산된 뒤영벌을 시료로 SBPV 특이 초고속 역전사 PCR을 시행하였으며, 수입된 뒤영벌과 국내생산 뒤영벌 1종에서 SBPV가 존재함을 보일 수 있었다. 국내 처음으로 뒤영벌에서의 SBPV의 존재를 확인한 것이다. SBPV 특이 유전자 초고속 역전사 PCR법은 실험실 내에서 뿐만 아니라 현장에서 정량적 검출을 하기에 유용한 방법이 될 것이며 더 나아가 뒤영벌 수출입을 위한 검역 기준을 이용하여 집단적 발병 방지에 기여하기를 기대한다.

• 한국임상수의학회지
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• 제28권4호
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• pp.427-430
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• 2011

6개월령의 잡종 수컷 고양이가 갑작스런 호흡곤란과 식욕부진 증상으로 내원 하였다. 신체검사상 심음의 감소와 함께 확연한 호흡곤란이 확인 되었다. 혈액학적 검사에서 고글로블린 혈증을 동반한 고단백혈증이 관찰되었으며, 다클론성 감마글로블린병증이 확인 되었다. 환축은 흉부 방사선 검사에서 흉수가 확인 되었으며, 흉수는 비감염성 삼출물로, 흉수 역시 다클론성 감마글로블린병증을 동반한 고글로블린증과 감소한 알브민 대 글로블린 비율이 관찰되었다. 또한 흉강 삼출물을 통한 역전사 중합효소연쇄반응에서 고양이 코로나바이러스에 양성반응을 확인하였다. 따라서, 환축은 고양이 전염성 복막염이 강하게 의심되었으며, 재조합 인간 인터페론 알파, pentoxifylline 과 스테로이드제를 이용한 적극적인 치료가 시작 되었다. 환축은 초기 치료에 반응이 좋았으며, 치료 이후 5개월간 재발 증상이 관찰되지 않았다. 결론적으로 본 증례는 재조합 인간 인터페론 알파와 pentoxifylline을 이용한 고양이 전염성 복막염의 치료 반응에 대한 국내 첫 증례보고이다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제35권1호
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• pp.1-8
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• 2011

Techniques to evaluate gene expression profiling, such as sufficiently sensitive cDNA microarrays or real-time quantitative PCR, are efficient methods for monitoring human pluripotent stem cell (hESC/iPSC) cultures. However, most of these high-throughput tests have a limited use due to high cost, extended turn-around time, and the involvement of highly specialized technical expertise. Hence, there is an urgency of rapid, cost-effective, robust, yet sensitive method development for routine screening of hESCs/hiPSCs. A critical requirement in hESC/hiPSC cultures is to maintain a uniform undifferentiated state and to determine their differentiation capacity by showing the expression of gene markers representing all three germ layers, including ectoderm, mesoderm, and endoderm. To quantify the modulation of gene expression in hESCs/hiPSC during their propagation, expansion, and differentiation via embryoid body (EB) formation, we developed a simple, rapid, inexpensive, and definitive multimarker, semiquantitative multiplex RT-PCR platform technology. Among the 9 gene primers tested, 5 were pluripotent markers comprising set 1, and 3 lineage-specific markers were combined as set 2, respectively. We found that these 2 sets were not only effective in determining the relative differentiation in hESCs/hiPSCs, but were easily reproducible. In this study, we used the hES/hiPS cell lines to standardize the technique. This multiplex RT-PCR assay is flexible and, by selecting appropriate reporter genes, can be designed for characterization of different hESC/hiPSC lines during routine maintenance and directed differentiation.

• 한국정보통신학회논문지
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• 제18권2호
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• pp.482-487
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• 2014

본 연구는 testosterone이 지방세포생성에 미치는 영향과 그것에 대한 분자생물학적 조절기전을 역전사-중합효소 연쇄반응과 일시적인 형질전환 분석을 통해 조사하였다. 정소절제수술 마우스(CAST)에 비해 testosterone이 처리된 정소절제수술 마우스(CAST+T)는 백색지방조직 무게와 지방세포 특이유전자($PPAR{\gamma}$와 aP2)의 발현이 감소되었다. In vivo 결과와 일치되게, testosterone 처리는 분화된 3T3-L1세포에서의 triglyceride축적과 지방세포 특이유전자($PPAR{\gamma}$와 aP2)의 발현을 억제시켰다. Testosterone에 의해 활성화된 androgen receptor(AR)는 $PPAR{\gamma}$ transfection에 의해 유도된 luciferase reporter gene 활성을 억제하였다. 따라서 본 연구결과는 testosterone이 AR을 통해 지방세포분화에 대한 $PPAR{\gamma}$의 작용을 억제 조절한다는 것을 시사하고 있다.

• 구강회복응용과학지
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• 제37권1호
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• pp.23-30
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• 2021

목적: 본연구의 목적은 다양한 산용액을 이용하여 지르코니아의 표면을 처리하여 표면의 양상과 골유착에 미치는 영향을 알아보는 것이다. 연구 재료 및 방법: 준비된 지르코니아 디스크에 다양한 산용액 및 광촉매 산부식을 이용하여 표면을 처리하였다. 각 시편을 SEM으로 관찰하고, 골유착을 관찰하기 위해 MC3T3E-1 세포를 이용하여 형광염색과 역전사 중합효소 연쇄반응을 통해 평가하였다. 결과: 처리한 방법에 따라 다양한 거칠기를 보였다. 불산처리군은 표면의 거칠기가 증가하였으나 약한 네트워크 구조를 가지고 있었다. 골유착능에서는 광촉매 산부식을 시행한 군에서 더 좋은 결과를 보였다(P < 0.05). 결론: 지르코니아를 광촉매 산부식방법으로 처리할 경우 다른 산처리방법에 비해 골유착능을 높이는데 효과적일 것으로 사료된다.

• Restorative Dentistry and Endodontics
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• 제36권5호
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• pp.397-408
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• 2011

연구목적: 이 연구에서는 mineral trioxide aggregate 제재인 white ProRoot MTA (wMTA)와 수산화칼슘 제재인 Dycal을 인간치수세포에 적용한 후 치수세포의 분화와 증식, 석회화, 신생혈관형성(angiogenesis) 그리고 염증에 관여하는 유전자들의 발현 변화를 비교하였다. 연구 재료 및 방법: 실험군은 wMTA와 Dycal을 테플론 튜브(내경 10 mm, 길이 1 mm)에 담아 4시간 경화시킨 후 일차세포배양한 인간치수세포에 적용하였고, 대조군은 빈 튜브만을 적용하였다. 3시간, 6시간, 9시간, 24시간 후 total RNA를 추출하고 oligonucleotide microarray 방법을 통하여 유전자 발현 양상을 분석하였다. 위의 결과를 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase polymerase chain reaction)으로 재확인하였다. 결과: wMTA를 적용한 실험군에서 24,546개의 유전자 중 43개 유전자의 발현이 2배 이상 증가하였으며(예. BMP2, FOSB, THBS1, EDN1, IL11, COL10A1, TUFT1, HMOX1) 25개 유전자의 발현이 50% 이하로 감소하였다(예. SMAD6, TIMP2, DCN, SOCS2, CEBPD, KIAA1199). Dycal을 적용한 실험군에서 239개 유전자의 발현이 2배 이상 증가하였으며(예. BMP2, BMP6, SMAD6, IL11, FOS, VEGFA, PlGF, HMOX1, SOCS2, CEBPD, KIAA1199) 358개 유전자의 발현이 50% 이하로 감소하였다(예. EDN1, FGF). 결론: wMTA를 적용한 치수세포에서는 분화와 증식 그리고 석회화에 관여하는 유전자들의 변화가 관찰되었다. Dycal을 적용한 치수세포에서는 분화와 증식 그리고 신생혈관형성에 관여하는 유전자들의 변화가 관찰되었다. 또 Dycal이 염증에 관여하는 유전자들을 더 많이 발현시키는 양상을 보였다.

• 한국임상수의학회지
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• 제26권6호
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• pp.582-585
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• 2009

소 바이러스성 설사병 바이러스는 전세계 축산업에서 경제적 파급력이 큰 질병이다. 콧물을 이용한 역전사 중합효소연쇄반응을 이용하여 한우송아지에서 소 바이러스성 설사병 바이러스의 발생이 진단 되었다. 가검물을 채취한 21 마리 소 가운데 12마리가 소 바이러스성 설사병 바이러스에 양성반응을 보여 지속감염우로 분류되었다. 이 동물들은 설사와 폐렴 같은 증상을 나타내었다. 지속감염우는 일발적으로 지속감염 송아지에서 발견된다. 5'-UTR을 이용한 염기서열 및 계통발생 분석에서 본 증례는 BDVD-2a에 속했다. 이들 결과는 콧물을 이용하여 지속감염우를 진단할 수 있다는 것과, 한우 송아지에서 BVDV 근절 대책이 필요하다는 것을 말해 주고 있다.

• Nuclear Medicine and Molecular Imaging
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• 제41권3호
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• pp.226-233
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• 2007

목적: 광학과 핵의학 및 자기공명 분자영상 기술은 생체내에서 리포터 유전자의 발현을 비침습적으로 평가할 수 있다. 한가지 이상의 유전자 발현을 영상화 할 수 있는 복합분자영상은 유전자의 발현과 유전자 치료 후 효능의 평가를 다양한 방법으로 반복하여 평가할 수 있다는 장점이 있다. 본 연구에서는 핵의학 영상이 가능한 NIS와 광학 영상이 가능한 EGFP 두가지 유전자를 동시에 발현하는 HepG2-Retro-PNRGW (PGKp-NIS-RSVp-EGFP-WPRE) plasmid를 이용한 간암 세포주(HepG2-NE)를 구축하고, NIS와 EGFP 리포터 유전자의 기능 발현을 체내에서 광학영상과 핵의학 영상으로 확인하고자 하였다. 재료 및 방법: pcDNA-NIS로 부터 NIS 유전자를 분리하여 pRetro-PN vector를 만든 후, pLNRGW (LTR-NeoR-RSV-EGFP-WPRE)로부터 RSV-EGFP-WPRE 조각을 분리하여 최종적으로 NIS와 EGFP 유전자가 동시에 발현할 수 있는 pRetro-PNRGW vector를 구축하였다. 구축된 vector를 이용하여 Retro-PNRGW retrovirus를 생산하였으며, 이를 HepG2 세포에 감염시켜 HepG2-NE 세포주를 만들었다. 이 세포주의 NIS 유전자의 발현은 역전사효소 중합효소 연쇄반응으로 mRNA 발현을 확인하였고, EGFP 유전자의 발현은 형광현미경을 통하여 EGFP 단백질이 발현하는 녹색형광을 관찰함으로써 확인하였다. 이중 리포터 유전자 중 NIS 유전자의 기능은 세포에서 방사능 옥소의 섭취량과 유출량의 측정을 통해서 확인하였다. 이렇게 만들어진 세포를 누드마우스에 이식하여 형광 영상, I-123을 이용한 감마카메라 영상과 I-124를 이용한 소동물용 PET 영상을 획득하였다. 결과: NIS와 EGFP의 이중 리포터 유전자를 가지고 있는 HepG2 세포주가 성공적으로 만들어졌다. 세포의 약 50% 정도가 형광 현미경 아래에서 관찰되었다. NIS 유전자의 발현은 역전사효소 중합효소 연쇄반응 실험을 통해서 확인하였고, NIS가 발현된 세포의 방사능옥소 섭취량은 대조군에 비하여 약 9배 정도 높게 나타났다. 방사능옥소 유출량 실험에서는 약 9분에 반 정도의 옥소가 유출되는 것이 확인되었다. 구축된 세포주를 이식한 후 획득한 형광 영상, 감마카메라과 소동물용 PET 영상에서는 반대쪽의 대조군 세포를 이식한 것에 비하여 뚜렷한 형광신호가 보였고, 더 높은 방사능옥소 섭취가 확인되었다. 결론: NIS와 EGFP의 이중 리포터 유전자를 가지는 간암 세포주가 성공적으로 구축되었고, 소동물에서 두 유전자를 각각 치료용 리포터 유전자와 영상 리포터 유전자로의 사용이 가능할 것이라고 생각된다.

• Pediatric Gastroenterology, Hepatology & Nutrition
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• 제7권2호
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• pp.143-152
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• 2004

목적: 급성 설사로 입원한 소아의 대변 검체에서 rotavirus, adenovirus, astrovirus, calicivirus 및 enterovirus의 바이러스 항원을 검출하고 임상 증상과의 연관성을 알기 위해 본 연구를 시도하였다. 방법: 이화여자대학교 의과대학 목동병원 소아과에 1996년 3월부터 1999년 12월 사이에 입원하였던 소아 74명의 대변을 채취하였는데, 53개는 급성 설사 환자에서 채취하여 이를 설사군으로, 21개는 동일시기에 설사가 없는 타질환으로 입원한 소아에서 무작위로 채취하여 이는 대조군으로 분류하였다. 대변 검체는 영하 $20^{\circ}C$에서 냉동 보관 후 단클론 항체를 이용한 간접 효소 면역측정법으로 바이러스 항원 검출을 하였고 각 바이러스 검출과 임상 증상을 비교하였다. 결과: 바이러스 항원은 설사군에서 46례와 대조군에서 14례 검출되었다. 이 중 enterovirus 47례, rotavirus 26례, adenovirus 16례, astrovirus 11례, 그리고 calicivirus가 11례 검출되었다. 시기적으로 바이러스 항원은 봄(3>5월)에 많이 검출되었다(63%). 하나의 바이러스 항원이 검출된 경우는 설사군 22례, 대조군 6례로 모두 28례이었다. 바이러스 항원이 동시 검출된 경우는 30례이며, Salmonella group B와 enterovirus의 동시 감염 2례 있었다. 여러 항원이 검출된 30례를 세분하면, 두 종류의 바이러스가 검출된 경우가 15례, 세 종류의 바이러스가 검출된 경우가 11례, 네 종류의 바이러스가 검출된 경우가 2례, 다섯 종류의 바이러스가 모두 검출된 경우도 2례 있었다. 대변에서 바이러스 항원이 동시 검출된 다중성이나 종류에 따른 임상 증상의 차이는 없었다. 결론: 본 연구에서는 대변 내 바이러스 항원에 대한 단클론 항체를 이용한 간접 효소 면역측정법으로 검사하였으며, 각 바이러스 항원과 임상 증상과의 연관성은 없었다. 앞으로 더 많은 소아를 대상으로 역전사 중합효소 연쇄반응, 바이러스 배양 검사 등으로 다양하게 검사하여 소아 설사의 바이러스성 원인과 역학이 연구되어야 할 것이다.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제49권9호
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• pp.977-982
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• 2006

목 적 : M. pneumoniae는 기도 점막의 상피세포에서 증식하면서 호흡기 질환을 일으키며 기관지 천식의 발생이나 악화와 관계된다고 알려져 있다. IL-6은 급성 염증을 유도하는 사이토카인으로 B 세포의 분화에 관여하며 Th2 염증반응을 촉진시키며, IL-8은 기도에서 염증부위로의 세포이동을 매개하는 케모카인으로 알레르기 염증 반응에 밀접한 관련을 가진다. 기도 상피세포에서 생성되는 NO는 기도 염증과 기도과민성의 조절에 중요하다. VEGF는 천식에서 기도개형에 주된 역할을 담당한다. 본 연구에서는 기관지 상피세포에 M. pneumoniae를 감염시켰을 때 IL-6, IL-8, NO 및 VEGF의 발현을 살펴보았다. 방 법 : M. pneumoniae를 기관지 상피 세포주인 A549 세포에 감염시킨 후 여러 시간 간격으로 배양하여 세포와 배양 상층액을 수거하였다. 면역 형광 염색과 M. pneumoniae 16S ribosomal RNA gene의 oligonucleotide primers를 이용한 중합효소 연쇄반응을 시행하여 감염을 확인하였다. IL-6, IL-8, VEGF 단백질 생성은 ELISA kit를 이용하여 정량하였고, NO는 Griess 반응을 이용하여 측정하였다. 역전사 중합효소 연쇄반응을 이용하여 IL-6, IL-8, VEGF의 mRNA 발현을 관찰하였다. 결 과 : 기관지 상피세포에 M. pneumoniae를 감염시킨 후 시간이 지남에 따라 IL-6, IL-8, NO, VEGF의 생성이 증가하였고, IL-6, IL-8, VEGF mRNA 발현이 증가됨을 관찰하였다. 결 론 : M. pneumoniae 감염은 IL-6, IL-8, NO, VEGF 등의 매개물질의 발현을 증가시켜 기관지 천식의 알레르기 염증반응에 관여할 것으로 사료된다.