In order to study the molecular mechanism of $\gamma$-aminobutyric acid (GABA) production in plants, we cloned and sequenced a partial glutamate decarboxylase (GAD) cDNA from the Arabidopsis thaliana cDNA library, using primers targeted at highly conserved sequences of the petunia GAD gene. The cDNA fragment was inserted into TA cloning vector with T7 promoter and the recombinant plasmid obtained was used to transform E. coli. The plasmid DNA purified from the transformed E. coli was digested with EcoRI and the presence of the insert was confirmed. Nucleotide sequence analysis showed that the fragment is a partial Arabidopsis thaliana GAD gene and that the sequence showed 98% and 78% identity to the region of the putative Arabidopsis thaliana GAD sequences deposited in GenBank, Accession nos: U46665 and U10034, respectively. The amino acid sequence deduced from the partial Arabidopsis thaliana GAD gene showed 99% and 91% identities to the GAD sequences deduced from the genes of the U46665 and U10034, respectively. The partial cDNA sequence determined may facilitate the study of the molecular mechanism of GABA metabolism in plants.
Two-photon microscopy (TPM) has been used in plant research as a high-resolution high-depth 3D imaging modality. However, TPM is known to induce photo-damage to the plant in case of long time exposure, and optimal excitation wavelength for plant imaging has not been investigated. Longer excitation wavelength may be appropriate for in vivo two-photon imaging of Arabidopsis thaliana leaves, and effects of longer excitation wavelength were investigated in terms of imaging depth, emission spectrum. Changes of emission spectrum as a function of exposure time at longer excitation wavelength were measured for in vivo longitudinal imaging. Imaging depth was not changed much probably because photon scattering at the cell wall was a limiting factor. Chloroplast emission spectrum showed its intensity peak shift by 20 nm with transition of excitation wavelength from 849 nm or below to 850 nm or higher. Emission spectrum showed different change patterns with excitation wavelengths in longitudinal imaging. Longer excitation wavelengths appeared to interact with chloroplasts differently in comparison with 780 nm excitation wavelength, and may be good for in vivo imaging.
This experiment was carried out to investigate the effects of plant growth regulators on the organogenesis from the tissue culture of Arabidopsis thaliana stem, and the origin of the callus development. When the stem segments were cultured on medium with 2mg/L IAA or NAA, adventitious roots and trichomes were differentiated after 11 days of culture. Callus vigorously formed on medium with 2/L2,4 after 7 days of culture, but adventitious roots and trichomes were not differentiated from callus after 10 days of culture. This results suggesting that picloram is very effective auxin for the callus formation and organogenesis. Callus weakly formed on 0.05mg/L kinetin, and formed on combination of auxins(2mg/L) with 0.05mg/L kinetin. But the effect of combination of auxins and kinetin the callus formation was less than 2,4-D or picloram alone. A histological examination of callus formed on picloram showed that phloram showed that phloem parenchyma cells were divided and enlarged after 2 days of culture. Cortex parenchyma cells were divided and meristematic nodules were developed from these cells after 4 days of culture. Finally, callus formed on outside of cortex and epidermis by division of meristematic nodules after 7 days of culture.
The Arabidopsis SHL1 (${\underline{Sh}}ort$${\underline{L}}ife$ 1) gene encodes a small nuclear protein that is critical for the proper expression of the developmental programs that are responsible for controlling plant stature, senescence, flowering and seed formation. The SHL1 contains a single PHD finger domain that works in conjunction with a bromo-adjacent homology (BAH) motif that is thought to function significantly in protein-protein interactions. The TCH4 gene of the Arabidopsis encodes a xylogluclan endotransglucosylase/hydrolase that is transcriptionally regulated by a variety of hormonal and environmental stimuli. We report here in this study that the SHL1 exhibits sequence specific DNA binding properties, recognizing a 14 bp region of the TCH4 promoter in vitro, spanning nucleotides -262 to -275 (GGAAAAAACTCCCA). Chiefly, the nuclear extracts of Arabidopsis contain a protein with similar binding properties as recombinant SHL1, which is absent in identified transgenic plants that are noted as expressing antisense SHL1 RNA. Interestingly, the SHL1 gene expression with a BL treatment in characteristically wild types of seedlings showed that the transcript level of SHL1 is significantly down regulated by the BL treatment. The SHL1 may play a subtle role in regulating the kinetics of induction of the TCH4 in response to several stimuli in vivo.
본 논문에서는 드노보 전사체 어셈블리의 수행시간을 단축하기 위해 RNA-seq 서열을 유전자계 정보를 활용하여 여러 노드로 분산이 가능한 방법을 제시한다. 제안하는 전사체 서열 데이터 분산기법의 성능을 측정하기 위해 애기장대의 리드를 4개의 데이터 셋(전체 비분류 리드, 완전 분류 리드, 모델 분류 리드, 무작위 분류 리드)으로 구성하여 실험을 수행하였다. 전체 비분류 데이터와 비교하여 생성된 유전자 콘티그(Contig)는 95% 일치하였고 동일한 리소스들을 사용하는 단일 노드에 비해 본 연구에서 제시하는 분산환경분산 환경 기반의 어셈블리 수행시간은 4.2배 단축되었다.
This experiment was carried out to investigate the effects of cadmium on the growth of Arabidopsis thaliana when they were treated with different concentrations of cadmium. The growth of stem was stimulated in the concentrations up to fifty times higher than the official standard concentration of cadmium of pollutant exhaust notified by the Ministry of Environment, but it decreased in the concentration one hundred fifty times or more higher in proportion to the degree of concentration. The growth of root was similar to that of stem, except that the decrease was gradual in the concentration fifty times or more higher. The growth of leaf was almost the same as that of stem, that is, it was stimulated the increase of leaf surface area in the concentration fifty times higher, but decreased in the concentration one hundred fifty times or more higher in proportion to the degree of concentration. The fresh weights of the plants were increased in accord with the degree of growth of the stem and leaf. Concentration of cadmium accumulated in the plants was increased in proportion to the concentration of cadmium. These results show that the growth of plants was stimulated in the soil polluted by cadmium up to fifty times higher than the official standard concentration, but it was decreased in proportion to the degree of concentration in the plants grown in the presence of cadmium more than one hundred fifty times.
This experiment was carried out to investigate the effects of heavy metals (copper, cadmium, lead and chrome) on the growth of plant and seed germination of Arabidopsis thaliana treated with various concentrations of heavy metals. Cadmium and chrome among the 4 heavy metals had no effect on the growth of stem even in the concentration fifty times higher than the official standard concentration of pollutant exhaust notified by the Ministry of Environment. The official standard concentration of cadmium, however, stimulated the growth of stem in general, increasing leaf size and surface area, although it had no effect on the length of stem. But the growth of stem was decreased about 18% in the official standard concentration of pollutant exhaust of lead and copper. There was no growth of root in the concentration of lead and copper ten times higher than the official standard concentration. Cadmium and chrome had no effect on the seed germination, but lead and copper decreased the rate of seed germination. Seeds were not germinated in the concentration of copper ten times higher than the official standard concentration and in the concentration of lead fifty times higher than the official standard concentration. From this research three peculiar results were obtained. Chrome in the soil did not have much effect on the plant growth and seed germination of Arabidopsis thaliana. Cadmium stimulated the stem growth in an optimum concentration. But lead and copper reduced the plant growth and seed germination even in a small concentration, especially copper had the worse effect.
프로브(probe) 디자인은 성공적인 DNA 마이크로어레이(DNA microarray) 실험을 위해서 필수적인 작업이다. 프로브가 만족시켜야 하는 조건은 마이크로어레이 실험의 목적이나 방법에 따라 다양하게 정의될 수 있는데, 대부분의 기존 연구에서는 각각의 조건에 대하여 각자 독립적으로 정해진 한계치(threshold) 값을 넘지 않는 프로브를 탐색하는 방법을 취하고 있다. 그러나, 본 연구에서는 프로브 디자인을 두가지 목적함수를 지닌 다중목적함수 최적화 문제(multiobjective optimization problem)로 정의하고, ${\epsilon}$-다중목적함수 진화 알고리즘(${\epsilon}$-multiobjective evolutionary algorithm)을 이용하여 해결하는 방법을 제시한다. 제시된 방법은 19종류의 고위험군 인유두종 바이러스(Human Papillomavirus) 유전자들에 대한 프로브 디자인과 52종류의 애기장대 칼모듈린 유전자군(Arabidopsis Calmodulin multigene family)에 대한 프로브 디자인에 각각 적용되었다. 제안한 방법론을 사용하여 기존의 공개 프로브 디자인 프로그램인 OligoArray 및 OligoWiz에 비해 목표유전사에 더 적합한 프로브를 찾을 수 있었다.
${\gamma}-Tocopherol$ methyltransferase(TMT)는 토코페롤 생합성 대사의 마지막 단계인 감마 토코페롤을 알파 토코페롤로 변환하는데 관여하는 효소이다. 들깨의 미성숙 종자 cDNA유전자 은행에서 TMT로 추정되는 유전자를 분리하였으며 이 유전자는 1369개의 염기와 367개의 아미노산으로 구성되었으며 분자량은 약 42kDa의 추정된다. 이 cDNA는 Genbank와 상동성 분석결과 애기장대의 TMT유전자와 아미노산 수준에서 60% 정도의 상동성을 가지고 있으며 methyltransferase domain과 S-adenosyl methionine binding domain을 가지고 있으므로 TMT 유전자로 추정했다. 이 유전자의 특성을 알기 위하여 완전한 크기를 가지는 TMT유전자를 대장균에서 발현하고 invitro에서 효소의 활성을 측정하였다.
원형질체는 현탁배양된 세포괴로부터 1% cellulase R-10, 0.25% pectolyase Y-23, 그리고 0.5% driselase가 포함된 CPD 효소용액에서 4시간의 진탕 (40 rpm)조건에서 쉽게 분리되었다. 분리된 원형질체는 1 mg/L 2,4-D, 0.5 mg/L kinetin , 200 rng/L spermidine 그리고 68 g/L glucose가 포함된 KM 액체배지에서 배양되었으며, 또한 현탁배양중인 동종의 feeder cell이 있는 CP배지 위에 액체배양배지를 1 mL균일하게 퍼트린 후,$25^{\circ}C$, 암조건으로 4주간 양육배양하였다. 원형질체 유래 SF 캘러스는 0.05 mg/L IAA, 7 mg/L 2lip와 30mg/L sucrose가 첨가된 MS 재분화 배지에서 광조건으로 4주동안 배양되었을 때, 60% 이상의 shoot를 형성하였다. 이후, 식물의생장조절물질이 첨가되지 않은 MS 배지로 옮겨 뿌리를 유도하였으며, 재분화된 식물체는 토양으로 옮겨 배양 8주후에 종자를 형성하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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