사과 저장중에 발생하는 푸른곰팡이병원균에 대한 길항미생물을 찾기 위하여 자연계로부터 유용미생물을 분리하여 Penicillum expansum에 대한 길항력 검정과 동정하였다. 자연계로부터 얻은 3,000여종의 미생물중에서 푸른곰팡이병원균에 대하여 길항력이 우수한 미생물을 1차적으로 11종 선발하였으며, 이중에서 가장 길항력이 뛰어난 미생물을 치종적으로 KB22를 선발하였다. 길항력이 우수한 KB22의 형태적 성질, 배양적 특성 및 생리 생화학적 성질 등을 조사하여 비교 검토한 결과 Bacillus subtilis와 유사한 균으로 동정되었다. 분리한 길항균 Baillus subtilis KB22는 푸른곰팡이병에 대한 55.9%의 높은 생장억제력을 보였으며, 한천배지에서 Penicillum expansum 접종 후 길항균처리와 열처리한 길항균배양액을 처리하였을 때 각각90%와 15%이상 길항력을 보여주었다.
자낭균인 Taphrina wiesneri는 한국의 공원과 가로수에 주로 식재되는 왕벚나무에 빗자루병을 일으키는 병원균이다. 한국과 일본에서 분리한 13개의 병원균에 대해 18S rDNA 염기서열 분석을 통한 계통학적 분석과 rDNA-IGS 영역에 대한 RFLP 분석을 실시하였다. 18S rDNA 염기서열 분석을 통한 계통도 분석결과 병원균은 2그룹으로 분류되었다. Hha I 제한효소를 이용한 rDNA-IGS 영역에 대한 RFLP 분석결과 B, C, D, G 4개의 패턴으로 나타났으며, 그중 G 패턴은 새로운 패턴이었다.
벼 잎집무늬마름병균(Rhizoctonia solani)의 균핵에서 분리한 길항세균 SJ-2를 대치 배양 방법에 의해 벼도열병균(Pyricularia oryzae)외 6종의 식물 병원균에 대한 억제 효과를 조사하였다. 형태 및 생리적 특성을 조사한 결과, 이 균은 Bacillus subtilis로 동정되었다. 이 균은 AM 1(antibiotic medium 1)액체 배지에서 항균 물질을 분비하였으며, 배양 2일째 가장 항균 활성이 높았다. Butyl alcohol로 배양액에서 항균 물질을 조추출하여 100$\mu\textrm{g}$/ml의 농도로 조제한 감자 한천 배지에서 P. oryzae의 15개균에 대한 생육을 조사한 결과 P. oryzae, R. solani, Cochliobolus sativus에 대해서는 100% 생장을 억제하였으며, C. miyabeanus, Alternaria alternata, Botrytis cinerea, Cladosporium fulvum, Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium moniliforme, F. oxysporum에는 80% 이상의 억제 효과를 보인 반면 난균강에 속하는 병원균에 대한 효과는 낮게 나타났다. 활성물질을 분리 정제하여 동정한 결과 B. subtilis가 분비하는 항균 물질로 알려진 polypeptides계의 iturins로 밝혀졌다. 이러한 항균 물질은 벼 도열병균(P. oryzae)의 포자 발아 및 발아관의 팽대(swelling)를 야기했으며, 벼 잎집무늬마름병균(R. solani)에는 균사의 용균(lysis)현상을 일으켰다.
겨울철 과채류 시설 재배 단지에서는 저온 다습하여 균핵병 발생이 많아 피해가 심각하기 때문에, 미생물을 이용한 생물학적 방제법으로 균핵병을 방제하고자 길항균을 분리하였다. 시설 재배 토양으로부터 길항세균 55종을 분리하였으며, 분리한 길항세균 중에 가장 활성이 뛰어난 균주를 AB02 균주로 명명하고 이를 이용하여 식물병원균 5종에 대한 항균 스펙트럼을 조사하였다. 그 결과 잿빛곰팡이병원균인 Botrytis cinerea와 균핵병원균인 Sclerotinia sclerotiorum에 항균효과가 뛰어났다. AB02 균주의 균핵병에 대한 생물학적 방제실험은을 위해 들깨 pot 실험으로 병발생 억제효과와 병 방제효과를 조사했다. 그 결과 균핵병 발생 억제효과는 40%로 나타났고, 병 방제효과는 62%로 아주 높게 나타났다. AB02 균주의 식물 생육 촉진 효과는 전장이 120%, 생체중량이 141% 증가되었으며, 엽수와 엽면적은 각각 121%와 185%의 생육 촉진 효과를 보였다. 그리고 뿌리 생육조사에서는 생체 중량이 무처리 보다 327% 증가하였다. 항균활성과 식물 생육 촉진 활성을 갖는 AB02 균주를 동정한 결과, Bacillus sp.로 확인되었다.
시설내 토양으로부터 식물병원균에 활성을 갖는 길항균을 탐색하는 과정에서 주요 식물 병원균인 Phytophthora capsici, Botrytis cinerea, Rhizoctonia solani, Pythium ultimum 및 Fusarium oxysporum에 활성을 갖는 4종류의 길항균(AF1, AE2, AE3, AF4)을 분리하였다. 이들 중 가장 높은 활성을 나타낸 AE2균을 동정한 결과, 생육한 균은 짙은 오렌지색과 황갈색을 띄었으며, 현미경의 morphology는 column형의 conidial head와 foot cell로 부터 곧게 뻗은 분생자와 2중층의 포자낭병을 형성했다. 그리고 MY20 agar 배지에서 투명한 둥근세포의 형성등이 Aspergillus terreus의 형태와 일치 하였다. Pot에서 병원균과 A. terreus를 동시에 처리하여 오이의 생육을 조사한 결과, 토양중량당 A. terreus의 균체를 1% 처리에 40%, 5% 처리에 57%, 10% 처리에는 75% 병발생율을 억제시켰다. 그리고 A. terreus의 배양여액으로부터 activity-guided fractionation을 실시하여 항진균성 물질인 화합물 I 을 얻었다. $^1H$, $^{13}C\;NMR$, DEPT, $^1H-^1H\;COSY$, HMQC, HMBC 및 질량스텍트럼을 분석한 결과 화합물 I 은 butyrolactone I (${\alpha}$-oxo-${\beta}$-(p-hydroxyphenyl)-${\gamma}$-(p-hydroxy-m-3,3-dimethyl-allylbenzyl)-${\gamma}$-methoxycarbonyl-${\gamma}$-butyrolactone, $C_{24}H_{24}O_7$, M.W. = 424)로 동정되었다.
118 종 국내산 식물체의 에탄올 추출물을 대상으로 기주식물상의 온실실험조건에서 6 종의 주요 식물병원균에 대해 방제효과를 조사한 결과 살균효과는 식물의 종류 및 채집부위에 따라 커다란 차이를 보였다. 118 종 207 샘플을 2,000ppm 농도로 처리하였을 때 두 종 이상의 병원균에 90% 이상의 방제효과를 나타 낸 식물체는 측백나무 잎, 육계나무 잎, 비목나무 수피 및 잎, 잣나무 목부, 헛개나무 목부, 모감주나무 수피, 때죽나무 목부, 동백나무 잎, 그리고 빗죽이나무 잎이었다. 특히 헛개나무 목부 추출물은 여러 식물병원 균에 대하여 강함 살균효과를 나타내어 방제에 크게 이용할 수 있을 것으로 기대되었다.
식물성장 촉진 기능을 가지는 PGPR (plant growth-promoting rhizobacteria)균은 특수한 토양시료를 사용하여 내열성을 가지는 400개의 균주를 분리하였다. 이들 분리균주에서 선발한 공시균주 Bacillus sp. YK-5는 항진균성 물질을 생산하였으며, 시험균주 Asp. flavus를 대상으로 생산조건을 검토한 결과, 공시균주의 생육배지는 생육촉진효과와 식물병원균에 대한 방제를 위해 1% peptone 및 yeast extract, 5% black sugar가 함유된 modified LB배지를 사용하였다. 식물병원균에 대한 공시균주의 길항효과는 시험균주인 식물병원균 Fusarium oxysporum KACC 40052균에 대해 배양 7일째까지 강한 생육저해를 보였다. 공시균의 식물성장촉진능은 궁중무 및 벼를 대상으로 pot 실험한 결과, 궁중무의 경우 경엽수, 줄기의 길이 및 뿌리의 길이가 무처리구에 비해 약 60%이상 우수한 성장촉진효과를 나타내었으며, 벼의 경우 이식 후 시비 8일째 시판제품 처리구에 비해 공시균주 처리구는 잎의 길이와 흰 세근의 발달이 우수하여 뿌리의 발육에 현저한 생육촉진 효과를 나타내었다. 공시균주의 동정은 분자계통분류학적 분석 (형태, 배양, 생리, 화학적 및 분자생태학적 측면)에 의해 B. subtilis YK-5로 명명하였다.
Bipolaris cynodontis의 배양 추출물로부터 이탈리안 라이그라스 뿌리의 생육저해 활성을 나타내는 물질을 분리 정제한 다음에 2차원 NMR을 포함한 각종 기기분석을 이용하여 구조를 결정하였다. 이 화합물의 분자식은 $C_{24}H_{30}O_5$ 이었으며 세스퀴테르펜류 화합물로 이탈리안 라이그라스 및 벼와 같은 벼과식물에 대해서 100ppm에서 100%의 활성을 나타내는 것으로 보아 병원균의 병징 발현에 관여하는 것으로 보여진다.
토양에서 분리한 방선균류(actinomycetes) GT103 균주의 배양여액 및 균체추출물은 담배의 주요 병원균인 담배 줄기속마름병균(Erwinia carotovora subsp. carotovora), 담배 탄저병균(Colletotrichum tabacum), 담배역병균(Phytophthora nicotianae var. nicotianae)등에 강한 항균활성을 보였다. 항균활성물질은 용매 추출, silica gel chromatography, HPLC 등을 실시하여 분리.정제하였으며 UV, IR, FAB-MS, \ulcornerH-NMR, \ulcornerC-NMR 분석결과 actinomycin group의 펩타이드계 항생 물질인 actinomycin C\ulcorner로 동정되었다. 이 활성물질의 담배 탄저병에 대한 방제효과는 50$\mu\textrm{g}$/ml 농도에서 100%, 10$\mu\textrm{g}$/ml 농도에서 90%의 방제효과를 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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