Jo, Sang-Rae;Choe, Seon-Ho;Kim, Hyeon-Jong;Choe, Chang-Yong;Jin, Hyeon-Ju;Jo, Chang-Yeon;Son, Dong-Su
Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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2007.05a
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pp.51-62
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2007
성판별을 위한 biopsy 후 수정란의 발달율 및 동결-융해 후의 생존율 조사는 다음과 같다. 한우 체내 및 체외 수정란의 성판별을 위해서 영양막 세포의 일부를 채취하기 위해서 수정란을 biopsy 하였다. biopsy된 수정란의 생존율 조사의 결과는 체내 수정란이 100% 그리고 체외수정란이 90.0%의 결과를 나타내어 체내수정란이 체외수정란보다 biopsy 후의 생존율이 높게 나타났음을 알 수 있었다. 수정란의 성판별 비율은 체내수정란에서는 암컷과 수컷의 비율이 46.3%와 53.7%로 각각 나타나 수컷의 비율이 암컷보다 다소 높은 경향을 보였으며, 체외수정란에 있어서는 암컷과 수컷의 비율은 40.0%와 60.0%로 수컷의 비율이 높게 나타났으나, 유의적인 차이는 보이지 않았다. 성 판별된 수정란의 동결-융해 후 생존성은 완만동결 방법에 의한 수정란의 생존율은 체내수정란에서 58.8%, 체외수정란에서는 41.7% 그리고 초자화 동결 방법에서는 체내수정란의 생존율이 77.8%, 체외수정란은 57.1%로의 결과를 보여 체내수정란을 이용한 초자화 동결 방법에서 상대적으로 더 높은 생존율을 보였다.
Journal of the korean veterinary medical association
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v.37
no.10
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pp.938-948
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2001
최근 대동물임상분야에서도 소의 번식장애뿐만 아니라 첨단번식기술에 대한 연구가 지속적으로 이뤄져오고 있으며, 관련분야에 종사하는 임상가, 연구자들에게도 수정란이식, 체세포복제수정란이식분야 등에 대한 연구가 시급하게 요구되고 있는 실정이다. 따라서 필자는 대동물임상가들과 관련연구자에게 도움이 되었으면 하는 바램을 피력하면서 지난 수의사회지 8월호에 이어<일본 북해도 삿뽀로시 에베츠에 소재하는 낙농학원대학(酪農學園大學:Rakuno Gakuen University)에서 지난 5월 26일(토) 오전 8시 50분부터 오후 6시까지 대동물임상수의사들을 대상으로 한 교육세미나>에서 발표된 자료중 소개를 하지 않은 부분을 다시금 시간의 여유를 내어 번역을 하여 소개하고자 한다. 지난 8월호에 이어 필자가 일본어로 된 자료를 번역하는 과정에서 우리말로 표현하는데 무리가 있는 부분은 알기쉽게 평이하게 정리하였음을 서두에 밝혀 둔다. 또한 우리 임상수의사들도 최근 관심이 증대되고 있는 수정란이식과 체세포복제수정란 등에 대한 전문지식과 연구정보를 입수, 습득하여 나가지 않으면 아니된다 하겠다.
본 연구는 체외배양 system에서 체외성숙시 경제적인 수정란 생산체계를 검토하고자 체외성숙 배양 용기와 체외수정란생산 계절에 따른 효율을 비교조사하였다. 우선 저가의 국산 Petri dish (35×12 ㎜; SPL, Korea)와 고가의 4-well dish (Nunc, Denmark)를 체외성숙 용기로 사용하였다. 4-well dish 처리구에는 well 당 500 ㎍ 체외성숙 배양액에 50개의 난자를 배양하였고, Petri dish 처리구에서는 3 ㎖의 체외성숙 배양액에 300개 정도의 oocytes를 넣어 24시간 체외성숙을 유도하였다. (중략)
The present study was conducted to investigate the effects of various co-culture systems and supplemented protein sources on the in vitro development of bovine IVF embryos. Bovine cumulus oocyte complexes (COCs) were matured and fertilized in vitro. Presumptive zygotes with cumulus cells were transferred to TCM-199 or CRlaa containing 10% FBS or 3mg/$m\ell$ BSA, and cultured for 36~40 hr. After primary culture, cleaved embryos were co-cultured with cumulus cells(CC), bovine oviduct epithelial cells(BOEC) or Buffalo rat liver cells (BRLC) in TCM-199 or CRlaa supplemented with FBS or BSA respectively, for further 6 days. Cleavage rate increased with BSA(P<0.01) in the both TCM-199(79%) or CRlaa(74%) When embryos were co-cultured with CC or BOEC in TCM-199, blastocyst development was enhanced with BSA(40% and 43%) compared to FBS (22% and 29%) , whereas in CRlaa no difference observed between BSA(40% and 39%) and FBS (40% and 42%). When embryos were co-cultured with BRLC monolayer, FBS enhanced the blastocyst development (P<0.05) compared to BSA in both TCM-199(41% vs 31%) and CRlaa (44% vs 37%). The result of the present study showed that the cleavage rate of bovine IVF embryos increased with BSA, The result also showed that BSA can enhance the development of IVF embryos in co-culture with CC or BOEC in TCM-199, suggesting the in vitro development is affected by the medium and supplemented protein sources in co-culture with somatic cells.
This study was conducted to examine the development of in vitro fertilized (IVF) and nuclear transfer (NT) embryos following vitrification IVF and NT embryos developed to the blastocyst stage were equilibrated by 3 steps, vitrified and thawed, and their survival and hatching rates were examined. In IVF embryos, higher survival (82.1%, 96/117) and hatching rates (64.1%, 75/117) were obtained respectively after thawing and culture in expanded blastocysts compared to blastocysts (p<0.05). High survival and hatching rates were also obtained by vitrification of NT blastocysts, especially in expanded and hatching blastocysts (81.1 and 78.3%, respectively). The result of this study shows that IVF and NT blastocysts, especially late stage blastocysts, are successfully cryopreserved by vitrification.
Suzuki, T.;Takagi, M.;Yamamoto, M.;Boediono, A.;Saha, S.;Sakakibara, H.;Oe, M.
Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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1997.05a
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pp.9-15
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1997
치밀 난구세포로 둘러싸인 소 난자를 $38^{circ}C$. 5% $CO_2$ 배양기에시 5% superovulated cow serum(SCS)이 첨가된 m-TCM 199 medium 으로 $20{\sim}22$ 시간 배양하였으며, 수정능이 획득된 정자와 체외수정하였다. 7일${\sim}$8일경의 수정란을 1.3M methyl cellosolve(MC), 1.1M diethylene glycol(DEG), 1.8M ethylene glycol(EG), 1.6M propylene glycol(PG) 및 1.1M 1,3-butylene glycol(BG) 용액에서 10분간 평형시킨 후 0.25 ml 스트로내에 장전하였다. 스트로를 $0^{\circ}C$의 alcohol bath freezer에 넣고 $-6^{\circ}C$까지 $-1^{\circ}C$/분 속도로 냉각, 식빙 후 10분간 정체시켰으며, $-0.3^{\circ}C$/분 또는 $-0.5^{\circ}C$/분으로 $-30^{\circ}C$까지 냉각 후 스트로를 액체질소에 침지하여 보관하였다. 수정란이 들어있는 스트로를 $30^{\circ}C$ 온수에서 융해하였으며, 수정란을 TCM 199 medium 으로 옮긴 후 5% SCS가 첨가된 TCM 199 medium 에서 48시간 배양하였다. 수정란이 양호한 형태를 유지하며 나중의 발육단계로 진행된 것을 생존한 것으로 간주하였다. 각 종류의 동해방지제에서 동결된 수정란의 일부는 융해 후 동해방지제를 제거하지 않고 직접 비외과적으로 이식하였다. 동결-융해 후 동해방지제의 종류에 따른 탈출배반포 발달율은 EG 50.0%, MC 53.6%, DEG 56.9%, PG 58.0% 그리고 BG 11.5%였다. $-0.3^{\circ}C$/분 또는 $-0.5^{\circ}C$/분 으로 냉각한 수정란의 생존율은 두 그룹간에 유의적인 차이가 없었으나 (P<0.05), 탈출배반포 발달율은 -0.5분 $^{\circ}C$/분(22.6%, 12/53)보다 $-0.3^{\circ}C$/분(64.6%, 31/48) 냉각시에 유의적으로 높았다(P<0.01). 동해방지제의 종류에 따른 수정란의 수태율은 MC 48%(10/21). DEG 30%(3/10), EG 74%(20/27) 및 PG 40%(4/10) 였다. 이러한 결과로 보아 MC, DEG, EG 그리고 PG는 소의 체외수정란의 동결을 위한 동해방지제로서 이용될 수 있음을 보여주었다.
Proceedings of the Korean Society of Developmental Biology Conference
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2003.10a
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pp.88-88
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2003
수정란 이식의 성공적 수행을 위해서는 양질의 수정란 생산, 영양상태가 양호한 수란우의 선발, 수정란과 수란우의 발정동기화, 황체발육이 양호한 수란우의 선발과 숙련자에 의한 수정란의 이식 등의 제반사항이 최적으로 이루어 졌을 때에 가능하다고 사료된다. 특히 수란우의 영양상태는 각양각색이라 판단하기가 어렵다. 따라서 본 연구에서 수란우의 사양관리 형태가 수란우 선발율과 수태율에 미치는 영향을 조사하여 수정란 이식의 효율증진을 도모하고자 실시하였다. 본 실험에 공시된 수란우는 경기도 일원에서 사육하고 있는 젖소 미경산우를 대상으로 하였으며, 건초와 농후사료 급여군(A군)과 볏짚과 농후사료 급여군(B군)으로 나누어 조사하였다. 실험에 공시한 수정란은 능력이 우수한 5∼7산의 한우 경산우에 과배란처리 후 비외과적 방법을 이용하여 회수한 수정란을 이용하였다. 또한 수란우는 발정동기화 처리 후 황체상태가 양호한 개체만을 시험에 공시하였다. (중략)
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[게시일 2004년 10월 1일]
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