This study was conducted to examine the effects of hormone and sodium pyruvate on in vitro maturation of canine oocytes. Canine oocytes were collected from the ovaries of dogs and cultured in NCSU-37 medium with hormones and sodium pyruvate for 72 hr. Oocytes matured to the metaphase II (MII) stage were observed only from estradiol $17{\beta}\;(E_2)$, and the presence of gonadotropin did not improve the nuclear maturation. No oocytes were developed to the MII stage when $E_2$ was added to medium during the first 6 and 24 hrs of culture period. The presence of $E_2$ during the whole culture period enhanced the nuclear maturation to the MII stage (6.0%, P<0.05). High concentration of sodium pyruvate (2.5 mM) slightly enhanced the nuclear maturation to the metapahse I (HMI) stage, but not the MII stage. the result of the present study shows that the presence of $ E_2$ during the whole culture period of 72 hr enhances the maturation of canine oocytes to the M stage, but sodium pyruvate does not affect the nuclear maturation of the canine oocytes.
여포액이 여포안에서는 난자의 성숙을 억제하지만 여포액을 일단 여포 밖으로 내어 배양액을 섞거나 혹은 여포액만으로 난자를 배양할 때 난자는 성숙분열을 일으키는 것을 보아 왔다. 저자들은 소의 여포액 내의 성분중 어떤 것 들이 난자 성숙에 유효한 가를 밝히기 위하여 본 실험을 행하였다. 그 결과는 다음과 같다. 첫째, 여포액을 투석하여 얻은 dialysable fraction을 이용하여 난자를 배양하였을 때 높은 성숙율을 얻었다. 반대로 non-dialysable fraction를 포함하는 기본배양액 내에서는 난자의 성숙율은 극히 낮았으며 퇴화하는 경향이 있었다. 둘째, paper chromatography 의 방법으로 dialysable fraction이 포함하는 free amino acid를 조사한 결과 8가지의 amino acid가 동정되었다. 이 amino acid를 기본배양액에 섞어 배양액으로 만들어 난자를 배양했을 때 난자성숙율이 90%이상이었고 제 2차 중기까지 도달한 난자는 30시간 이내에 10% 정도였다. 셋째, 상기의 amino acid가 들어있는 배양액에 다시 biotin를 첨가하여 배양하면 48시간내에 제 2차 분열 중기까지 도달하는 난자가 60%에 이르렀다. 위 결과로 보아 여포액은 in vitro인 경우 난자의 성숙을 유발하며 성숙을 유발하는 주요 성분은 여포액내에 포함되어 있는 몇가지 amino acid와 biotin과 같은 vitamine B가 될 것이라는 결론을 얻었다.
In order to induce the diploid gamete(ovum) under suppression of meiosis in oogenesis for production of polyploid chicken. this experiment checked meiosis time. through regular ovulation and response of inhibitor (Tri-ethylen Melamine) to meiosis. The results obtained was follows; *Meiosis of oogenesis was 2-4 hours before ovulation. *Response of inhibitor to meiosis was effective at 0.3mg triethylen melamine per kg body weight. *Fertility was highly decreased by influence from inhibitor. *66% of fertilized eggs was triploid(3n) through fertilization induced diploid ovum (2n) with normal sperm(n).
The present study has been carried out to investigate the optimal condition on lymphocyte blastogenesis of rabbit lymphocytes, whole blood culture and microculture system in conjunction with a semiautomatic multiple sample harvester(SAMSH) was used to study the In vitro optimal condition of rabbit lymphocytes. Data were presented to show many variables that are involved in studying the phytohemagglutinin(PHA) and lipopolysaccharide(LPS) response of rabbit lymphocyte in a microculture system. Analysis indicated that the conditions for optimal PHA as measured by incorporation of $^3H$-TdR include: (1) use of RPMI-1640 as culture medium. (2) use of $6{\mu}g$ of PHA, per culture. (3) 48-hours culture period. Conditions for optimal stimulation with LPS mitogen were similar to those used for PHA.
본 연구는 DNA 상해유도기작을 규명하기 위하여 하등 진핵생물인 분열형 효모 Schizosaccharomyces Pombe로부터 subtraction hybridization방법을 이용하여 자외선 유도 유전자인 UVI-180을 분리하고 그 유전자 구조와 발현양상을 조사하였다. UVI-180유전자의 발현양상을 Northern hybridization 방법으로 살펴본 결과 자외선(ultraviolet-light)조사 1시간 후에 최대의 발현 증가를 나타내었다. 반면 알킬화제인 MMS(methyl methanesulfonate)처리에 의해서는 전혀 발현이 증가되지 않았다. 이 결과 UVI-180유전자는 DNA상해에 따라 각기 다른 발현양상을 나타냄을 알 수 있었다. 유전자의 기능을 알기 위하여 null-mutant세포 주를 제조하여 그 특성을 살펴본 결과 이 유전자는 세포의 성장에 필수적인 유전자임을 알 수 있었다.
Nicotine is one of the major components of cigarette smoking which causes various systemic and local diseases to human body. Mitogenic effects of nicotine to systemic disease are interesting factors in the results of cellular Proliferation especially to vascular and pulmonary tissue or cells. The study of local effects concerns with destruction of tissue and delayed healing rate after various surgical treatment. Platelet-Derived Growth factor(PDGF) and Insulin-like growth factor(IGF) are blown as major mitogens to human PDL cells. The purpose of this study was to investgate the mitogenic effects of nicotine to human PDL cells. We studied the expression of PDGF-$\alpha$ receptor, PDGF-$\beta$receptor, and IGF-l receptor mRNA from the nicotine treated human PDL cells by northern analysis. The experimental groups were divided into different serum($1\%,\;10\%$) and nicotine (100ng/m1,1000ng/m1) concentrations and each group was studied by time course. The results of this study showed upregulation of PDGF-${\alpha},\;{\beta}$ receptor and IGF-l receptor mRNA at 100ng/ml nicotine concentration and $10\%$ serum group to the time course. These results suggest that physiologically attainable nicotine concentrations may stimulate the mitogenic gene synthesis to human PDL cells in vitro.
The objective of this study was to identify the effect of zebularine, a DNA methylation inhibitor, on the chromosomal association between homoeologous chromosomes in the wheat genetic background. Zebularine at a final concentration of 10 µM was used to treat the spikes of the double monosomic wheat addition line (DMA) with one Leymus mollis chromosome and one Leymus racemosus chromosome, both of which were in a homoeologous relationship. In late prophase, zebularine led to chromosome breakage in the Leymus homoeologous chromosomes. Chromosome breakage caused an increase in the frequency of chromosomal associations between the Leymus homoeologous chromosomes. Ordinary DMA showed 65 cells (35.3%) with chromosomal associations and 119 cells (64.7%) with no association, whereas treated DMA showed 102 cells (60.0%) with chromosomal associations and 67 cells (39.4%) with no association. In diakinesis, the Leymus bivalent showed a chromosomal association in the whole euchromatic region. In metaphase, the Leymus bivalent showed association in the whole chromosomal region, unlike other Leymus bivalents with partial chromosomal association. Chromosomal association by chromosome breakage occurred not only between Leymus chromosomes but also between Leymus and wheat chromosomes. The frequency of other chromosomal association (such as fusion and insert) was increased. Chromosome breakage by zebularine treatment is a useful method at the chromosome level as the spores with others are hereditary stable, although the homologous index (h) was not significantly different between ordinary DMA and treated DMA. It is necessary to study how to control zebularine treatment with a more stable concentration for chromosome breakage during meiosis.
This experiment is to investigate the influence on business by varying the scouring condition of raw silk. The conditions of experiment are changed by temperature, time concentration and scouring reagent as well as the pH value of scouring solution, involving the repeat number of treatment in the same reagent solution. The results are as follows. 1) The shorter the scouring time, the more lousiness showed on law silk. The difference of lousiness quantity are especially remarkable between 30 min. and 60min, while the appearance of lousiness is slight between 50min. and 90min. 2) The lousiness shape was just like splited end and short wool fiber type during than 60 min. scouring, and splited end and long wool fiber type was appeared during 120 min. scouring. 3) The seperation of threads on silk panel was difficult with undissolved sericin in case of lower than 90$^{\circ}C$ of scouring temperature, so that it was almost impossible to inspect lousiness. 4) In case of repeating one after another scouring in the same solution, the more number of treatment, the less sho wed lousiness. Little difference were appeared in the quantity of lousiness from first to eighth repeated scouring, while large difference of quantity was appeared between 8th and 9th repeated scouring. 5) The quantity of lousiness was also increased until scouring reagent (Marseilles soap) is added to 0.75%, but rather decreased with more than 0.75% of soap. The most variety of lousiness quantity was occured when the concentration of soap is changed from 0.15% to 0.20%. 6) The peculiarities of lousiness shape by the concentration of scouring reagent were as followings; most of lousiness are splited end short wool fiber type with lower wool fiber type with higher than 0.75%, and the mixture of both the former and the latter with 0.5% concentration. 7) The quantity of lousiness by the kind of scouring reagent was the least with 5% of Na$_2$CO$_3$ solution, and the most with the mixture of 0.25% Marseilles soap and 0.25% Na$_2$CO$_3$. 8) The more increased pH value, the more lousiness showed. The peculiarities of lousiness shape was the splited end and short wool fiber type, and the end and long wool fiber type with higher value of pH 11 because of the decreased strength of threads and the cutting of brin. 9) With the discussions mentioned the above, the scouring conditions to decrease the lousiness quantity are summarized as follows. (1) It is better to take the possible long time of scouring. (2) Temperature should be kept higher than 95$^{\circ}C$ for complete scouring. (3) It was the best to use 0.5% of Marseiles soap as scouring reagent. (4) No good results were produced by using the mixture of scouring reagent. (5) The best pH range of scouring solution was 9.5 to 10.5.
The purpose of this paper to present morphological normal chick chromosomes and develope avian cytogenetic techniques including chromosome preparation and banding technique. The early chick embryos provide a consistent source of material with hish mitotic cells. Although chick embryo tissue gives excellent preparations, the 4-5 days embryo is somewhat incovenient materials, Most imp of ant for avian Chromosome analysis are the technical protocols to achieve adequate preservation, spreading, and staining of the full chromosome complement. To precise chromosome analysis, pro-metaphase states are required. Best results of banding will be obtained from air dried slides prepared from early chick embryos that have been aged at least 1 week. Good G-banding differentiation is achieved by adequate trypsin digestion fellowed by staining in Goe,sa dye. The results of C-banding is influenced by many factors including the conditions of Ba(OH)$_2$, HCl treatment, and state of rinsing. In addition to precisely interprets banding patterns, the densitometric analysis is recommended.
Kim, Byung-Ki;Kang, Sung-Ryoung;Yim, Cha-Ok;Han, Chang-Hee;Lee, Bok-Kyu;Lee, Kwang-Sun
Journal of Life Science
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v.13
no.5
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pp.732-739
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2003
The purpose of this study was to determine if the addition of spermatozoa into the culture medium could influence the nuclear maturation of denuded porcine germinal vesicle (GV) oocytes in vitro. Cumulus-oocyte complexes were collected from follicles of 3 to 5 mm in diameter, The cumulus and corona cells were removed from oocytes. Porcine denuded oocytes were cultured in tissue culture medium containing spermatozoa. After 48 h culture, oocytes were examined for the evidence of GV breakdown, metaphase I, anaphase-telophase I, and metaphase II (M II). The proportion of oocytes reaching M II stage was significantly (P<0.01) increased in the oocytes cultured in media containing spermatozoa compared to those in media without spermatozoa $(31.9\pm1.8%\; vs\; 14.9\pm1.0%)$.No differences in the rates of M II were observed among the different period of spermatozoa exposure nor among the spermatozoa from different species. The proportion of oocytes reaching M II stage was significantly different between high and low concentrations of spermatozoa. The present study suggests that mammalian spermatozoa contain a substance(s) that improves nuclear maturation in vitro of GV oocytes. Enhancing effect of spermatozoa for oocytes maturation in vitro is a highly dose-dependent.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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