식품산업에서 박테리오파아지를 첫째, 동물 보건에서 항생제 대체품으로서, 둘째, 식품에서 바이오보존제(biopreservative)로서, 셋째, 식품 체인에서 병원성 세균을 검출하기위한 도구로서 다양하게 이용하고자 최근에 널리 인지하고 있다. 박테리오파아지는 바이러스로서 세균을 감염시키고 용해하는 특성이 있으며, 식품 안전과 관련하여, 1) 포유 동물세포에 무해하여 박테리오파아지를 안전하게 이용할 가능성, 2) 발효식품에 적절한 스타터 역할을 하거나 천연 미생물균총을 그대로 보존하는 박테리오파아지의 높은 숙주 선택성이라는 2가지 특징을 지니고 있다. 최근에는 식품첨가물로서 박테리오파아지를 '먹을 수 있는 바이러스'로 인정할 수 있을지 논의되고 있다. 식품유래 병원성 세균을 제어하기 위한 파아지의 이용가능성과 생물학 분야에서 관련되는 기초연구를 하고자 할 때 생기는 제한점 등에 대해서 고찰하고자 한다.
본 연구에서는 SE에 특이적인 박테리오파아지($CJ{\phi}07$)의 사료 및 음수 투여가 어린 병아리의 SE 감염에 따른 장내 균증식과 체외 균배출에 미치는 영향을 평가하고자 실시하였다. 박테리오파아지를 투여한 SPF 병아리에 SE균을 공격 접종 한 뒤, 공격 접종 10일 후 채취한 맹장 분변에 존재하는 SE균 수를 측정한 결과, 박테리오파아지를 투여한 병아리의 맹장 분변 내 SE균 수는 양성 대조군에 비하여 유의성 있게 감소하였다(P<0.05). 또한, 공격 접종 10일 후 사육 시설 표면의 SE균 오염도를 측정한 결과, 박테리오파아지를 투여한 그룹의 사육 시설에서 채취한 환경 시료의 SE균 오염율(50%)이 박테리오파아지를 투여하지 않은 그룹의 SE균 환경 오염율(100%)에 비하여 감소되는 것을 통해 박테리오파아지 $CJ{\phi}07$에 의한 장내 균 증식과 체외 균 배출 억제 효능이 확인되었다. 따라서 박테리오파아지 $CJ{\phi}07$는 항생제 대체 물질로서 가금에서의 SE 감염을 효과적으로 방어할 수 있을 것으로 판단된다.
P2의 sir 변이를 억제하는 변이체 박테리오파아지 P4를 얻기 위하여, P4 ash8 sid71 kmr intS를 박테리오파아지 P2 sir3 용원소에 plating하여 플라크를 형성하는 P4 ost2를 분리하였다. P4 ost2는 1단계 생장실험에서 P2의 sir 변이를 억제하는 P4 변이체로 나타났다. 제한효소 절단 반응으로 유전체 DNA의 재배열이 일어난 단편을 찾아 cloning과 sequencing을 거쳐 P4 ost2의 구조를 규명하였다. P4 ost2의 DNA는, 6.9 kb의 결실을 가진 P4 ash8 sid71 kmr intS의 불완전한 trimer로 2개의 cos-cleavage 부위를 가지는 28.8 kb의 유전체로 밝혀졌다. CsCl 부양균등밀도 편차실험으로 P4 ost2의 DNA 크기를 확인하였고 파아지 머리 안에 packaging된 DNA에 대한 기초적인 구조를 파악하였다. P4 ost2의 분리 동정을 통해, P4 유전체 상의 cos-cleavage 부위의 개수가 Sir-type 파아지 머리의 packaging 반응과는 관련이 없다고 추정할 수 있었다.
재조합 대장균에 의해 생합성된 PHB를 분리정제하기 위하여 박테리오파아지의 세포파괴작용을 이용하는 방법의 가능성에 대해 알아 보았다. 먼저, $cI_{857}$ 유전자를 지난 박테리오파아지 A를 대장균에 감염시킨 후 lysogen, XLl-Blue($\lambda$HL1)를 선별하고, 이 균주에 PHA 생합성 플라스미드를 도입시켜 원하는 균주인 XLI-Blue($\lambda$HL1, pSYLl05)를 만들였다. 숙주인 XLl-Blue, 열적유도에 의해 세포파괴가 가능한 XLl-Blue($\lambda$HL1), 그리고 세포파괴와 PHB 생합성이 모두 가능한 XLl-Blue(AHL1, pSYL105) 에 대하여 여러 가지 조건에서의 실험결과를 비교.검토하였다. XLI-Blue($\lambda$IL1, pSYLl05)의 경우 대수기에서는 열적유도만으로 세포파괴를 효과적으로 야기할 수 있었으나 PHB가 축적되는 정지기에서는 열척유도만으로 세포파괴를 일으킬 수 없었다. 세포 파괴를 보다 용이하게 하기 위하여 열적유도 빛 2% (v/v)의 chloroform을 사용하는 화학적용균을 병행 하였는데, 이 경우 세포파괴가 효과적으로 일어남을 관찰할 수 있었다.
바이러스 조립 과정 기작 연구를 위한 좋은 재료인 박테리오파아지 P2-P4 시스템의 packaging 기작 연구를 위해, 머리 크기 조절 유전자 변이체인 P4 ash8 sid7l의 파아지 입자가 함유하고 있는DNA의 형태를 분식하였다. 파아지 stock을 준비하고 이것의 CsCl부양균등 밀도 편차실험을 수행하여, 밀도가 다른 두개의 입자들로 분리하였다. 각 입자의 DNA를 분리한 후, 전기영동을 통해 함유된 DNA의 형태를 확인하였다. 예상과 달리, 각 입자들은 dimer, trimer 뿐 아니라 monomer도 함유하고 있다는 새로운 사실을 발견하였다.
Some of the physiological properties of Sp816 bacteriophage of Bacillus subtilis SNU816 were characterized. It could form plaques on either B. subtilis SNU816 or B. natto 8102, but not on any other bacillus strains investrgated. Its plaque morphology was circular with a diameter of less than 1.0mm and had a narrow halo surrounding the clear center. Its latent period was 34-36 min and had a burst size of 547. It was most stable at pH 6.0, and rapidly inactivated at $60^{\circ}C$ with a initial deaty rate of -0.216 $min^{-1}$. Host range, thermal inactivation rate at $60^{\circ}C$, pH stability, and UV sensitivity revealed that SP816 was quite different from any other phages investigated together but seemed to be rather related to B. natto phages.
A library of unlimited number of novel lectins with diverse specificities has been previously generated by randomly mutating the carbohydrate-recognition domain of Maackia amurensis hemagglutinin (MAH). To establish the experimental environment capable of selecting high affinity mutant lectins in E. coli, phage display system was adapted. Carbohydrate binding capacity of two phagemid vectors, pComb3 and pComb8 displaying wild-type MAH lectin was assessed. Specific bindings of pComb3 and pComb8 phages expressing w.t. MAH to affinity-purified polyclonal anti-MAH antibody and to glycophorin was demonstrated. Both phages also showed strong hemagglutinating activity to intact but not sialidase-treated human erythrocytes, which is consistent to the specificity of native MAH. Taken together, two different phage display vectors successfully allowed the expression of active MAH as a fusion protein on the surface of bacteriophage, which will lead to preparation of unique plant lectins with high affinity toward a variety of carbohydrate chains.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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