For the purpose of developing a microbial insecticide utilizing Bacillus thuringiensis Berliner, research was done and the following results were obtained. 1) As the freeze-dried matter of the cocoon-cooked water discarded from the filature contains much crude protein(51.825%) and a lot of inorganic salts, it can make a good nutrition source for the culture cf B. thuringiensis Berliner. 2) Based on the suspensibility, formula F-5 turned out to be the most suitable for insecticidal use. Its composition includes 0.2 g of the cell-spore-crystal mixture, 25 g of 200-mesh kaolin, 2.5 g of New Kalgen-NX-150, and 2.5 g of glycerine admixed with 8 ml of distilled water and granulated in 80-mesh size. 3) All the components of F-5, F-6 and F-7 are identical except that the amounts of cell-spore-crystal mixture of F-5, F-6, and F-7 are 0.2 g, 0.4 g, and 0.6 g, respectively. Accordingly, their physical properties are almost all the same. 4) Formulas F-5, F-6, and F-7 exhibited an excellent toxicity to Anomis mesogona Walker, Dendrolimus spectabilis Butler, and Margaronia perspectalis Walker at the concentration of 5%. 5) Formulas F-8 and F-9 which contain $NaHCO_3$ as one of their components showed a remarkably reduced toxicity to Anomis mesogona Walker and Dendrolimus spectabilis Butler than F-6 which does not contain $NaHCO_3$. 6) A maximum of $2.97{\times}10^9$ spores per ml was obtained by incubating B. thuringiensis in M-3 which has a pH of 7.05 and comprises 0.2% of ammonium sulphate and 0.8% of glucose dissolved in the cocoon-cooked water, with aeration for 96 hours. 7) Formula F-6 exhibited a somewhat reduced toxicity to Anomis mesogona Walker and Dendrolimus spectabilis Butler, when stored at room temperature for 70 days after formulation and it is desirable to keep it in a dark and cold place. 8) In held applications, formula F-6 showed a good activity in controlling Monema flavescens Walker. Margaronia perspectalis Walker, and Macrosiphum ibarae Matsumura.
Microbial insecticide formulations were prepared by liquid and semi-solid fermentations using Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, HL-106 (BTK-HL106), B. thuringiensis subsp. israelensis HL-63 (BTI-HL63) and B. sphaericus 1593 (BS-1593) strains. The liquid fermentation medium contained molasses 2%, dextrose 1.5%, peptone 2%, D-xylose 0.025%, CaCl$_2$ 0.1%, K$_2$HPO$_4$ 0.1%, KH$_2$PO$_4$ 0.1%, MgSO$_4$$.$7H$_2$O 0.03%, FeSO$_4$$.$7H$_2$O 0.002%, ZnSO$_4$$.$7H$_2$O 0.02%. The composition of the semi-solid fermentation medium was rice bran 45.2%, zeolite 31%, yeast powder 0.02%, corn powder 5%, dextrose 3%, lime 0.3%, NaCl 0.06%, CaCl$_2$ 0.02%, and H$_2$O 15.42%. Insecticide formulations produced in the liquid fermentation named BTK-HL106, BTI-HL63 and BS-1593 pesticides and those in the semi-solid fermentation were designated as BTK-HL106-1, BTI-HL63-1 and BS-1593-1 pesticides, respectively. The number of spore (endotoxin crystals) was 2.65${\times}$10$\^$9/ spores per $m\ell$ in the BTK-HL106 and 3.5${\times}$10$\^$10/ in the BTK-HL106-1 3.8${\times}$10$\^$9/ spores in the BTI-HL63 and 7.0${\times}$10$\^$10/ in the BTI-HL63-1, and 7.5${\times}$10$\^$9/ in the BS-1593 and 1.4${\times}$10$\^$10/ in the BS-1593-1. The spores in the BS-1593 formulation was produced two times more than the other formulations. The spores in the BTI-HL63-1 were contained twice than those in the BTK-HL106-1, and five times than those in the BS-1593-1. The results indicated that spore (endotoxin crystals) productions in the semi-solid fermentation increased about ten times than those in the liquid fermentations. $LC_{50}$s of the BTI-HL63 and BS-1593 were 4.5 $\mu\textrm{g}$, and those of the BTI-HL63-1 and BS-1593-1 were 1.5 $\mu\textrm{g}$. $LC_{50}$ of the BTK-HL106 was 1.5 mg and that of the BTK-HL106-1 was 0.9 mg. The $LC_{50}$s of the formulations in the semi-solid fermentations showed about two to three times higher than those in the liquid fermentations.
Cypermethrin, a commonly used domestic and agricultural pyrethroid pesticide, is widely considered detrimental to the environment and to many organisms because of its residual property and toxicity. Cellulophaga lytica DAU203, isolated from coastal sediment, was chosen because it degrade cypermethrin. Cellulophaga lytica DAU203 effectively degraded cypermethrin, as the utilized carbon source and substrate, in a mineral salt medium. Effective factors, such as carbon source, nitrogen source, initial pH, and temperature, for cypermethtin biological degradation by Cellulophaga lytica DAU203 were analyzed by one factor at a time method. Temperature ($22{\sim}42^{\circ}C$), initial pH (5~9), and yeast extract concentration (0.1~2.5%[w/v]) were selected as the three most important factors. There were optimized at $33.4^{\circ}C$, pH 7.7, and 2.4%(w/v) by response surface methodology, respectively. The Box- Behnken design consisting of 46 experimental runs with three replicates was used to optimize the independent variables which significantly influenced the cypermethrin biological degradation. This model for cypermethrin degradation by Cellulophaga lytica DAU203 is highly significant (p<0.05). Under the optimized condition, Cellulophaga lytica DAU203 degraded approximately 83.7 % of the cypermethrin within 5 days. These results suggest that Cellulophaga lytica DAU203 may be useful for the biological degradation of cypermethrin in cypermethrin-contaminated environments.
Bacillus thuringiensis (Bt) is a bacterial biopesticide against insect pests, mainly lepidopterans. Spodoptera exigua and Plutella xylostella exhibit significant decreases in Bt susceptibility in late larval instars. To enhance Bt pathogenicity, we used a mixture treatment of Bt and other bacterial metabolites which possessed significant immunosuppressive activities. Mixtures of Bt with culture broths of Xenorhabdus nematophila (Xn) or Photorhabdus temperata ssp. temperata (Ptt) significantly enhanced the Bt pathogenicity against late larval instars. Different ratios of Bt to bacterial culture broth had significant pathogenicities against last instar P. xylostella and S. exigua. Five compounds identified from the bacterial culture broth also enhanced Bt pathogenicity. After determining the optimal ratios, the mixture was applied to cabbage infested by late instar P. xylostella or S. exigua in greenhouse conditions. A mixture of Bt and Xn culture broth killed 100% of both insect pests when it was sprayed twice, while Bt alone killed less than 80% or 60% of P. xylostella and S. exigua, respectively. Other Bt mixtures, including Ptt culture broth or bacterial metabolites, also significantly increased pathogenicity in the semi-field assays. These results demonstrated that the Bt mixtures collectively names "Bt-Plus" can be developed into potent biopesticides to increase the efficacy of Bt.
Seo, Sam-Yeol;Ahn, Haet-Nim;Eom, Seong-Hyeon;Im, Eun-Yeong;Park, Ji-Young;Kim, Yong-Gyun
Korean journal of applied entomology
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v.51
no.1
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pp.39-45
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2012
The entomopathogenic bacterium, $Xenorhabdus$ sp., was isolated from an entomopathogenic nematode, $Steinernema$$monticolum$. When these bacteria were injected into the hemocoel of the diamondback moth, $Plutella$$xylostella$, they caused significant mortality. However, the bacterium was not pathogenic when it was administered orally. This study showed that $Xenorhabdus$ sp. significantly enhanced oral pathogenicity of $Bacillus$$thuringiensis$ (Bt) against the last instar larvae of $P.$$xylostella$. Different ratios of culture broth of $Xenorhabdus$ sp. and Bt showed significantly different pathogenicities against $P.$$xylostella$. In field tests, the optimal bacterial mixture significantly enhanced control efficacy against $P.$$xylostella$ compared to Bt treatment alone. These results demonstrated that $Xenorhabdus$ sp. culture broth can be developed as a potent biopesticide by enhancing the insecticidal efficacy of Bt.
The influences of applications of organochlorine insecticide (HCH: Hexachlorocyclohexane, 10 ppm), fungicide (TPN: Tetrachloroisophthalonitrile, 40 ppm) and manure ($3Kg/m^2$) each or together on changes in soil microflora for consecutive years were investigated in the experimental field plots. The insecticide had a little effect on soil microbial numbers. In particular, the number of total bacteria, Gram-negative bacteria and fungi were gradually increased at the latter stage of the consecutive application, but the number of sporeforming bacteria reduced. The fungicide reduced the counts of sporeforming bacteria, actinomycetes and fungi respectively, whereas increased prominently the counts of total bacteria and Gram-negative bacteria. TPN-resistant bacteria, particulary TPN-resistant Gram-negative bacteria were gradually accumulated by the long-term application of TPN, and further the number of TPN-resistant total bacteria and the of TPN-resistant Gram-negative bacteria correlated fairly well during all the period. The influences of combined applications of both HCH and TPN on the number of soil microorganisms were equal to the respective sums of the effects of single application of each pesticide. The combined application of manure and these pesticides elevated the increasing extents of microbial numbers, while weakened the detrimental efforts of these pesticides on microbial numbers. These data suggest that the long-term application of these materials have resulted in the remarkable changes of composition of soil microflora.
Biological control against mushroom fly, Lycoriella mali, was performed by using Bacillus thuringiensis subsp. israelensis Bti-D and Bti-U, isolated from dead mushroom fly in oyster mushroom houses. Control values of the bacterial strains Bti-D and Bti-U against L. mali in bottle culture of oyster mushroom were 74.4% and 64.2%, respectively, and the value in small tray culture were 75.8% and 56.8%, respectively. In the experiment to develop the mass, cheap media for Bti-D and Bti-U isolates, the Biji broth (bean curd residue, called Biji in Korean language) was selected as a culture medium for an inexpensive and mass cultivation by the measurement of optical density of the two bacteria grown in the different media tested. Insecticidal effect of the formulation contained different ingredients that were prepared by using the Bti-D strain cultured in the Biji broth was tested in tray and bottle culture of oyster mushroom. The WCS formulation that contained corn starch as bio-gel (86.4%) was more effective to control the mushroom fly than living cells (69.1%) in bottle culture of oyster mushroom. Moreover, insecticidal effect of the WCS formulation was improved when water of pH 8 was used for dilution of the formulation. Effect of the WCS formulation using water of pH 8 and chemicals, Zuron (dimillin) W.P. on the control of mushroom fly and the productivity of oyster mushroom was investigated in tray culture of oyster mushroom. The Zuron W.P. was more effective to control the mushroom fly than the WCS formulation. However, compared with no treatment, the productivity of the mushroom treated with the WCS formulation was improved than that of the mushroom with Zuron W.P.
The productions of beta-exotoxin from sixteen Bacillus thuringiensis strains were examined by Micrococus flava primarily, and then measured by spectrophotometer during culturing in Conner and Hansen mineral salts medium at 28$^{\circ}C$. Also the toxic effects of the toxin to mice were checked. The growth of Bacillus thuringiensis K2 and BTK2-T1, -T13, -T33 and -T40 got into stationary phase at 6 hour culture and then maintained it up to 48 hours without severe fluctuation. The production of beta-exotoxin from the strains, BTK2, BTK2-T1, -T13, -T17 and -T33 appeared at 6 hour culture and the amounts of the toxin were about 40 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ at 6 hour culture, approximately 70 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ at 12 hours, approximately 85$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ from 24 hours to 48 hours. At 48 hour-culture, BTK2 produced 80 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ of beta-exotoxin (5.5$\times$10$^{8}$ cells/$m\ell$, BTK2-T13 produced 84 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ (4.3$\times$10$^{8}$ cells/$m\ell$), BTK2-T17 produced 87$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ (1.4$\times$10$^{8}$ cells/$m\ell$), and BTK2-T33 produced 84 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ (4.9$\times$10$^{8}$ cells/$m\ell$). All other serotypes also produced beta-exotoxin. At 48 hour culture, BTK-37 produced 88$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ (6.1$\times$10$^{8}$ cells/$m\ell$), BTK-35 produced 81 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$), and the rest of them produced less than 70 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$. To check the toxicity of beta-exotoxin and B. thuringiensis, the cultured media with microorganisms were inoculated to mice by per os, intraperiloneal, subcutaneous and intracerebral injection, and nasal cavity inoculation for 30 days. However, the toxin did not kill all of the treated mice.
The washed fresh ginsengs packed with air, vaccum and nitrogen gas were irradiated at the levels of 1,2 and 3kGy gamma radiation and then stored at $4{\sim}5^{\circ}C$ for 90days to investigate the effects of gamma radiation on microbial inactivation, eelworm disinfestation and physicochemical changes. After a 90 day storage, $2{\sim}3kGy$ irradiated groups showed 20% of weight loss and 10% of rot while non-irradiated group 100% and 20% or more, respectively. Also the irradiated groups showed somewhat lower values of specific gravity, color density and hardness immediately after irradiation, thereafter higher value of them with storage time than those of non-irradiated group. The irradiation increased the yields of ginseng extract and crude saponins but no effects on the proximate composition and TLC and HPLC patterns of saponin. The food-borne microorganisms decreased in viable cell counts by $2{\sim}3$ log cycles with $2{\sim}3kGy$ radiation and the eelworms were completely disinfested with 1 kGy radiation.
Good Agricultural Practices (GAP) is the world's leading quality certification for food safety. Since its introduction in Korea in 2006, its importance has been increasing every year. In particular, food safety issues are becoming increasingly important in society, and food safety is directly linked to health. The core of GAP certification is the traceability of the production, distribution, and consumption of hazardous materials, including pesticide residues, heavy metals, and microbes. In the present study, pesticides and heavy metals in button mushroom (Agaricus bisporus) and associated cultivation materials were analyzed. Tricyclozole (0.0144 ppm), flubendiamide (0.147 ppm), and trifloxystrobin (0.0340 ppm) were detected in rice straw and wheat straw, and carbendazim (0.0142 ppm) was detected in mixed wheat straw and rice straw medium. Lead and cadmium were detected at levels higher than the standard level in rice straw and mixed medium. However, lead and cadmium were not detected in mushrooms, and levels of arsenic and mercury were below the safety limit. Therefore, it was confirmed that the residual pesticides and heavy metals are safely managed in the investigated mushroom species. The results of the present study suggest that if these materials are adequately managed in the surroundings during cultivation, all hazardous materials can be managed during mushroom production.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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