Human lactoferrin is an iron-binding glycoprotein with many biological activities, including the protection against microbial and virus infection and stimulation of the immune system. We introduced a human lactoferrin (hLf) cDNA under the control of 35S promoter into sweet potato by particle bombardment. Transgenic plants were regenerated via somatic embryogenesis. Transgenic plants were produced typical tuberous roots in soil. PCR, Southern and northern analyses confirmed that the hLf cDNA was incorporated into the plant genome and was properly expressed in plants. Western blot analysis showed that the 80 kDa full length hLf protein was produced in transgenic tuberous roots. Overall results indicated that sweet potato would be an excellent host to produce human therapeutic proteins.
한국유가공기술과학회 2005년도 창립 30주년 기념 국제심포지움 - 웰빙시대의 우유.유제품의 새로운 발견
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pp.125-133
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2005
전세계 많은 나라들은 조제분유를 특수 영양식품으로 분류하여 관리에 각별히 신경을 쓰고 있으며, CODEX에서는 첨가되는 거의 모든 성분을 모유에 들어 있는 것이어야 하며, 또한 과학적으로 안전성이 입증된 것만을 넣을 수 있도록 규정하고 있다. 이 때문에 분유 메이커들은 제품 개발을 위해 많은 모유 및 우유 성분에 관한 연구를 바탕으로 하여 모유의 조성에 맞추는 노력을 하고 있다. 국내산 분유는 외국 제품에 비해 면역 기능 향상, 항-알레르기 능력 향상, 뇌와 소화기관의 발달 등을 돕는 성분이 강화되어 있다. 현재 생명과학기술의 진보와 각종 신기술의 도입으로 모유 및 우유속의 극미량 성분까지 분리 정제가 가능함에 따라 다양한 기능성을 갖는 성분들이 상품화되고 있으며, 이를 이용해 조제분유를 개발하고 있다. 두뇌 발달 성분인 DHA, 아라키돈산 등과 면역기능 강화 성분인 뉴클레오타이드, 락토페린 등의 첨가 및 정장기능을 보이는 올리고당 등의 성분강화에서 이제는 뼈 성장 ${\cdot}$ 발달인자, 아토피 및 알레르기의 감소를 위해 가수분해물의 이용 등의 기능을 보강한 다양한 제품이 개발되어지고 있는 중이다.
Two human lactoferrin expression vectors(pCChcLf and pCChcLf-1) were constructed using rat $\beta$-casein gene and human lactoferrin cDNA. The recombinant DNAs containing human lactoferrin cDNA were microinjected into the fertilized eggs of hybrid mice (BDF1 : C57BL$\times$DBA) and the DNA-injected eggs were treansferred into the oviducts of foster mothers. Genomic DNAs were isolated from the tails of mice born from the microinjected eggs and analyzed by Southern blot analysis. As a result, 5 and 9 transgenic mice with CChcLf and CChcLf-1 gene were produced, respectively. To determine tissue-specificity of transgene expression, Northern blot analysis was performed. Female transgenic mice were killed at day 10 of lactation and total RNAs from various tissues were isolated. Based on Northern blot analysis, it was shown that transgene was mainly expressed in the mammary glands of transgenic mice. In addition, the human lactoferrin in milk was detected by enzyme-linked immunosorbent assay. For this study, milk was obtained from the mammary glands of the transgenic mice at day 10 of lactation. In line #2 of CChcLf and line #7 of CChcLf-1 transgenic mice, human lactoferrin was secreted into the milk at concentration levels of 340ng/ml and 60ng/ml, respectively.
Lactoferrin was first identified 60 years ago as a "red protein" in bovine milk. Lactoferrin, one of the transferrin family proteins, is an iron-binding glycoprotein found in milk and various mucosal secretions; it is also released from activated neutrophils. Human lactoferrin has a molecular weight of 82.4 kDa and is composed of 702 or 692 amino acid residues. Bovine lactoferrin has a molecular weight of 83.1 kDa and is composed of 689 amino acid residues. Both lactoferrin and transferrin have the ability to bind two $Fe^{3+}$ ions, together with two ${CO_3}^{2-}$ ions with extremely high affinity; these proteins also have the ability to release this iron at low pH levels. The polypeptide chain in lactoferrin is folded into two globular lobes, representing the N-terminal and C-terminal halves. Both lobes have similar folding and 40% sequence identity. This protein is capable of multiple functions as described in various review papers, including antimicrobial, antiviral, antiinflammatory, anticancer, antioxidant, and cell growth-promoting activities. Lactoferrin also exhibits immunomodulating effects and plays an active role in the regulation of myelopoiesis and the inhibition of bacterial translocation.
It has long been known that lactoferrin prevents human beings from infection of virus. To prove this activity of lactoferrin, we evaluated the activities of different lactoferrins to an isolate human rotavirus K-21. Bovine lactoferrin inhibited infection of K-21 to MA-104 cell at the concentration of $25.9\;{\mu}M$ whereas bovine hydrolysed lactoferrin prevented rotavirus infection at $103.8\;{\mu}M$. However human lactoferrin prevented infection of K-21 at the concentration of $217.5\;{\mu}M$. These data suggested that lactoferrin activity may be unaffected by the intestinal digestive enzymes and bovine lactoferrin is more active than human lactoferrin with respect to prevention of rotavirus infection.
타액은 분비율과 그 구성성분으로 인해 구내환경을 조절하는데 있어 가장 중요한 요인으로 여겨진다. 타액 분비율과 성분에 관한 많은 연구가 이루어 졌지만, 증령이 타액과 그 성분에 미치는 영향에 대한 연구는 상반된 결과를 보고하고 있으며 현재까지도 논란의 여지가 많다. 또한 증령에 따른 lactoferrin과 전해질의 변화는 거의 보고되지 않은 실정이다. 이에 저자는 증령이 타액분비량과 타액성분에 미치는 영향을 연구하기 위하여 59명의 투약력이 없고 건강한 사람을 대상으로 연구를 시행하였다. 연구대상을 그들의 나이에 따라 A군, 10~15세 (남자7명, 여자7명); B군,20~30세 (남자8명, 여자7명 ); C군,40~50세 (남자7명, 여자7명 ); D군,60세 이상 (남자7명, 여자9명 ) 등의 4군으로 구분하여 각각의 비자극성 전타액을 표준화된 방법으로 채취한후 타액분비량과 immunoglobulin, lactoferin 및 전해질의 변화를 측정하였다. 이와 같은 실험을 통해 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 비자극성 타액분비량은 각 연령군간의 유의한 차이가 관찰되지 않았으며, 20-30세 군(B군)에서만 남성에 비해 여성에서 유의하게 낮았다. 2. 인체 전타액내 IgA와 lactoferin 농도는 연령이나 성별에 따른 뚜렷한 변화는 없었지만, 10-l5세 군(A군) 남성에서 유의하게 낮았다. 3. 인체 전타액내 IgG의 농도는 연령이나 성별에 따른 차이가 관찰되지 않았다. 4. 인체 전타액내 IgM의 농도는 60세이상 군(D군) 남성에서 유의하게 낮은 농도를 보였다. 5. 인체 전타액내 전해질(sodium, chloride, potassium, magnesium)의 농도는 증령에 따라 증가하는 경향을 보였다. magnesium과 chloride는 60세이상 군(D군)에서, sodium과 potassium은 40-50세 군(C관)에서 최대치를 보였다 성별간의 유의성 있는 차이는 발견되지 않았다.
Lactoferrin is a multifunctional protein that is found in milk, neutrophils, and other biological fluids, and its receptors have also been identified in the central nervous system. Recently, it was reported that bovine milk-derived lactoferrin (BLF) produced analgesia via a $\mu$-opioid receptor-mediated response in the spinal cord. However the precise mechanism of this analgesic effect is remains unclear. In Randall-Selitto paw pressure study, each single administration of morphine (10 mg/kg) and BLF (50, 100 and 200 mg/kg) induced analgesia, however, NMDA receptor antagonist MK-801 (0.1, 0.2 and 0.3 mg/kg), inhibited analgesia induced by BLF (100 mg/kg). Intracerebroventricular infusion (I.C.V.) of Nmethyl-D-aspartic acid (NMDA) ($0.3\;{\mu}g/8.0\;{\mu}l/hr/day$), as a NMDA receptor agonist, reversed inhibition of MK-801 (0.3 mg/kg) on analgesia induced by BLF (100 mg/kg). These results suggest that BLF have analgesic effect, through NMDA receptor activation.
전세계 많은 나라들은 조제분유를 특수 영양식품으로 분류하여 관리에 각별히 신경을 쓰고 있으며, CODEX에서는 첨가되는 거의 모든 성분을 모유에 들어 있는 것이어야 하며, 또한 과학적으로 안전성이 입증된 것만을 넣을 수 있도록 규정하고 있다. 이 때문에 분유 메이커들은 제품 개발을 위해 많은 모유 및 우유 성분에 관한 연구를 바탕으로 하여 모유의 조성에 맞추는 노력을 하고 있다. 국내산 분유는 외국 제품에 비해 면역기능 향상, 항-알레르기 능력 향상, 뇌와 소화기관의 발달 등을 돕는 성분이 강화되어 있다. 현재 생명과학기술의 진보와 각종 신기술의 도입으로 모유 및 우유속의 극미량 성분까지 분리정제가 가능함에 따라 다양한 기능성을 갖는 성분들이 상품화되고 있으며, 이를 이용해 조제분유를 개발하고 있다. 두뇌 발달 성분인 DHA, 아라키돈산 등과 면역기능 강화 성분인 뉴클레오타이드, 락토페린 등의 첨가 및 정장기능을 보이는 올리고당 등의 성분강화에서 이제는 뼈 성장 발달인자, 아토피 및 알레르기의 감소를 위해 가수분해물의 이용 등의 기능을 보강한 다양한 제품이 개발되어지고 있는 중이다.
젖소, 한우, 돼지, 그리고 산양의 초유 중 단백질의 변화를 초일부터 7일까지 조사하였다. 돼지의 초유를 제외한 젖소, 한우, 그리고 산양의 초유에서 면역글로불린, 락토페린, 락토퍼옥시데이스, 혈청 알부민, IgG heavy chain, 그리고 IgG light chain은 분만 후, 초일 함량이 현저히 높았고, 2일째부터 급격히 감소하는 것을 보여 주었다. 그리고 ${\alpha}_{S2}$-카세인, ${\alpha}_{S1}$-카세인, ${\beta}$-카세인, ${\kappa}$-카세인, ${\beta}$-락토글로불린 및 ${\alpha}$-락트알부민은 분만 직후부터 7일까지 현저한 함량의 차이는 나타나지 않았다. 한편, 돼지 초유의 경우는 모든 단백질이 분만 후, 초일부터 2일까지 높은 함량을 나타내었다.
조직특이적 프로모터 및 벡터를 연구하고 검증하기 위해서는 조직 및 종의 특이성을 유지하는 세포 시스템을 개발하는 것이 바람직하다. 이러한 시스템은 형질전환동물 모델에 대한 효과적인 대안이다. 우리는 베타 카제인 (CSN2)의 세포 형태와 mRNA 수준에 기초하여 일차 배양으로부터 돼지 유선 상피 세포 주 (PMECs)를 확립하였다. 선택된 PMECs는 cytokeratin 항체에 의해 염색되었으며, 유선 상피 세포에 존재한다고 생각되어지는 유즙 단백질 유전자 (CSN2, 락토페린 및 유청 단백질)를 발현하는 것으로 나타났다. 또한, 3D 배양에서 PMECs932-7의 acini 구조를 확인하기 위해 살아있는 세포를 핵산에 결합하는 SYTO-13으로 염색하였다. 우리는 마트리겔 (matrigel)에 있는 PMECs의 acini가 말초 세포의 응집에 의해 형성되고 공간의 lumen을 특징으로 한다는 것이 관찰하였다. 우리는 PMECs의 matrigel 사용법과 세포 밀도를 포함한 세포 배양 조건의 영향을 시험함으로서 시스템을 시연했다. 이러한 결과는 PMCEs의 유선 상피 세포는 유전적 또는 구조적 특징을 갖고 있음을 시사하고 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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