2012년 5월에서 11월 사이에 우리나라 넙치, 조피볼락, 무지개송어, 뱀장어, 흰다리새우, 전복 양식장에서 발생하는 폐사피해를 표본조사를 통해 모니터링하였다. 조사의 방식은 해당 양식장과 거래하고 있거나 관계를 맺고 있는 전국의 수산질병관리사 조사요원의 직접 현장 방문을 통한 면접과 표준 매뉴얼을 통한 진단을 통하여 실시하였다. 조사기간 중 넙치 양식장에서는 총 27.9%의 누적 피해율을 보여주었고, 이중 스쿠티카병, 연쇄구균병, VHS, 비감염성 원인에 의한 폐사, 비브리오병, 활주세균병의 순으로 폐사피해가 높은 것으로 나타났다. 조피볼락 양식장에서는 13.6%의 누적 피해율을 보여주었고, 아가미 흡충병, 연쇄구균병, 비브리오병, 활주세균병, 비감염성 원인에 의한 폐사 순의 폐사피해가 나타났다. 무지개송어의 경우 총 17.1%의 피해율을 기록하였고, 비감염성 원인에 의한 폐사와 백점병이 주된 폐사 원인으로 집계되었다. 뱀장어의 경우 비교적 낮은 0.6%의 피해율을 기록하였으며, 에드워드병, 백점병, 아가미흡충병이 주된 피해요인이었다. 흰다리새우는 71.2%의 피해율을 보였으며, 대부분 비감염성 원인에 의한 폐사으로 집계되었고, 바이러스성 흰반점병도 12.5%의 피해를 준 것으로 나타났다. 전복의 경우 10.7%의 피해율 모두가 비감염성 원인에 의한 폐사 피해인 것으로 조사되었다.
본 실험의 목적은 Gram 양성균 뿐만 아니라 Gram음성세균에 대한 넓은 항균활성 및 내산성 그리고 항생제 내성을 갖고 있는 유용한 probiotic 후보균주를 선발하여 어류의 세균성 질병 예방 흑은 치료를 함으로써 양식산업의 효율성을 증대시키고자 한다. 20균주의 유산균을 김치, 양식 넙치의 장 그리고 각종 젓갈류 중에서 분리하여 어류 병원성 세균에 대한 항균능을 MRS agar상에서 agar spotted method에 의해 조사하여 Vibrio anguillarum, Edwardsiella tarda 그리고 streptococcus sp.에 대해 항균활성 이 있는 7균주를 1차 선발 하고 이들중 항균스펙트럼 이 넓은 BK19를 최종선발하여 동정한 결과 Lactobacillus sakei BKl9로 나타났다. L. sakei BK19의 cell free supernatant를 pH 중화 및 catalase 처리한 후 어병세균에 대하여 항균활성을 확인하였다. L. sakei BK19 supernatant의 V.anguillarum 및 V.alginolyticus에 대한 항균성 기작은 주사전자현미경 관찰을 통하여 확인하였고 세포벽을 붕괴 시킴으로써 성장을 저해하고 사멸시키는 것으로 확인되었다.
We investigated the effect of dietary supplementation with probiotics on growth performance, feed utilization, innate immunity and disease resistance against Streptococcus iniae in juvenile olive flounder Paralichthys olivaceus. Four experimental diets were made by supplementation with three Bacillus sp. probiotics (B. subtilis, B. pumilus and B. licheniformis) into a basal diet (control) at 0.5% each. Three-hundred fish (average BW, 20 g) were randomly distributed (25 per tank) into twelve 150 L capacity polyvinyl circular tanks with three replicates per dietary treatment. Triplicate groups of fish were fed the experimental diets to apparent satiation (twice per day, 09:00 and 17:00 h) for nine weeks. After the feeding trial, a challenge test was directly conducted against S. iniae. The results indicated that dietary supplementation with the probiotic, Bacillus sp, seemed to improve growth performance of olive flounder. Hematological parameters and innate immunity as determined by nitroblue tetrazolium, myeloperoxidase or superoxide dismutase activities were not significantly affected by the probiotic supplementation. The result from the challenge test suggested that dietary supplementation with probiotics Bacillus sp. can improve the disease resistance of olive flounder against S. iniae.
최근 육상의 넙치 양식장에서는 두 가지의 서로 다른 특성을 가지는 세균성질병이 같이 감염되는 혼합감염증이 빈번하게 발생하고 있는데, 혼합감염증은 서로 다른 원인균의 특성 때문에 단일 종류의 약제만으로는 치료효과를 거두기가 어려운 실정이다. 그러므로 본 연구는 약제의 병용 투여에 의해 이들의 상승작용을 이용함으로써 합병증에 대한 치료효과를 높이기 위한 기초자료를 얻고자 실시하였다. 어류 세균성질병의 원인세균인 Vibrio anguillarum, Edwardsiella tarda, Streptococcus sp., Staphylococcus epidermidis을 선정하여 병용 항균제의 시험관내 활성을 평가하는 대표적 방법인 Checkerboard법을 적용하여 fractional inhibitory concentration (FIC)지수를 구하여 상승효과를 나타내는 병용 항균제를 찾아내었다. (OTC+LM), (TC+FF), (OTC+FF)의 병용 항균제는 V. anguillarum에 대하여, (SNF+FF), (TC+FF), (SNF+OXA), (OTC+FF)의 병용 항균제는 E. tarda에 대하여, (CFX+OL), (OTC+OL), (TC+OL), (OTC+LM), (OTC+SPM), (OTC+EM), (DOXY+OL), (TC+SPM)의 병용 항균제는 Streptococcus sp.에 대하여, (CFX+EM), (FF+EM), (DOXY+OL), (CFX+OL)의 병용 항균제는 S. epidermidis에 대하여 시험관내 상승적 상호작용을 나타내었다.
Infectious pancreatic necrosis virus (IPNV)는 치어에 감염되어 치명적인 질병을 유발하는, 양식산업에 있어 중요한 어류 병원체이다. 본 연구에서는 IPNV를 신속, 정확하게 진단하는 방법을 개발하고자 IPNV의 항원성 단백질인 VP2 유전자 부분에서 선택한 primers를 이용하여 역전사-중합효소연쇄반응법(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)을 실시하였다. RT-PCR 증폭법으로 순수분리도니 IPNV dsRNA 40 ng 정도의 적은 양도 확인 할 수 있었으며, IHNV와 같은 다른 어류 병원체의 게놈을 RT-PCR templates로 사용하였을 경우는 어떠한 PCR 산물도 검출되지 않는 특이성을 보였다. 특히 유전자의 분리없이 조직 그 자체를 대상으로 RT-PCR을 행하는 in situ RT-PCR 방법으로 IPNV가 감염된 넙치 (Paralichthy olivaceus) 치어의 조직에서 IPNV 감염을 신속하게 확인할 수 있었다. 따라서 RT-PCR 및 in situ RT-PCR 방법은 IPNV를 신속, 정확하게 진단하는데 활용될 수 있을 것으로 생각된다.
해수 환경 중의 VHSV 분포 조사를 위하여, 2003년 2월에서 5월까지 동해 및 남해안 인근 해역에 서식하는 자연산 해수 어류를 채집하였다. 바이러스 분리용 시료는 9종의 해수 어류로서 42개의 시료를 분석하였다. 각 시료의 조직여과액을 Epithelioma papulosum cyprini (EPC) cells에 접종한 결과, 고등어 Scomber japonicus와 숭어 Mugil cephalus에서 바이러스가 분리되었으며 이들 바이러스는 RT-PCR법을 이용하여 VHSV로 동정할 수 있었다. 고등어에서 VHSV가 검출되었다는 기보고는 있지만, 숭어에 대해서는 본 연구에서 처음으로 VHSV를 분리하였다. 자연산 어류에서 유래된 세 개의 VHSV isolates에 대한 glycoprotein gene을 분석한 결과, 이들 바이러스는 양식 넙치에서 질병을 유발하는 VHSV isolates와 유사하며 모두 genogroup I (American type)에 속하는 것으로 밝혀졌다.
Viral Hemorrhagic Septicemia Virus (VHSV)는 유럽과 북미지역의 담수 무지개송어에 심각한 바이러스성 질병을 야기하는 원인체였으나 담수어류 뿐만 아니라 해산어류에서도 심각한 질병을 유발하며 최근 일본과 우리나라 양식 넙치에서 VHSV에 의한 대량 폐사 발생이 보고되고 있다. 본 연구는 VHS에 대한 예방학적 접근의 일환으로서 자연산 어류로부터의 VHSV 검출 및 지리적 분포, 보균 어종에 대한 유전학적인 조사를 목적으로 2003년과, 2005년도에 동중국해역 3지점, 서해안 5지점 그리고 남해안 5지점에서 어류를 채집하였다. RT-PCR을 이용한 연구결과 자연산 해산어류 160마리 중 12종 17마리에서 VHSV가 검출되어 검출율 10.6%를 보였으며 조사된 12종의 어류 중 특히 상어목에서 가장 높은 검출율을 보였다. VHSV G gene을 이용한 계통분류학적 분석결과 염기서열 분석에서 양식산어류의 분리주 (KVHS01-1)와 98.4%~99%, 아미노산 분석에서 97~99% 유사성을 나타내어 본 연구에서 조사되어진 자연산 어류에서 분리된 VHSV는 GenogroupⅠ에 속하였다.
본 연구에서는 2002년에서 2004년간 우리 나라 해수 어류 양식장에서 분리되는 세균 중 비브리오 속에 속하는 세균의 종 조성을 조사하였다. 질병의 증상을 보이는 어류로부터 166개의 비브리오속 세균 균주를 수집하였으며, 이들 균주는 넙치 (133 균주), 조피볼락 (8 균주), 참돔 (6 균주), 대하 (5 균주), 감성돔 (4 균주), 전복 (3 균주) 및 기타 해수 어류 (7 균주) 등에서 분리한 균주를 대상으로 하였다. 모든 분리 균주에 대하여 각종 생화학적 성상을 조사하고 그 특성에 따라 분리 균주를 구분하였다. 각 생화화적 성상 group에서 대표 균주를 선정하여 16S rRNA 및 16S-23S rRNA 유전자 서열을 분석하고 이들 결과를 종합하여 분리 균주을 동정하였다. 그 결과 14종 이상의 비브리오 종으로 동정할 수 있었으며, 그 종 조성은 V. ichthyoenteri (45 strains), V. alginolyticus (34 strains), V. harveyi (32 strains), Ph. damselae subsp. damselae (Formerly V. damsela, 10 strains), V. campbellii (6 strains), V. costicola-like (6 strains), V. fisheri (5 stains), V. fluvialis (4 strains) 및 Vibrio spp. (24 strains) 등이었다.
여러 다른 S. aureus strains및 토끼항체를 사용하여 항체감작을 시킬 때 나타나는 S. aureus의 자체응집을 방지키 위한 분석과 함께 cogglutination의 최적 조건을 확립하였다. 적정화된 coagglutination기법을 실험실과 현장에서의 edwardsiellosis의 진단에 응용하였을 때 약 $10\;{\mu}g/m1$의 E. tarda까지 검출 할 수 있었다. 더구나 이 방법은 E. tarda의 FKC, EDTA또는 열탕추출 항원에 대해서 까지 좋은 진단결과를 보여주었다. 현장에서 edwardsiellosis에 감염된 어류로부터 직접 분리된 E. tarda 균주들은 토끼 항체생성을 위해 사용된 E. tarda 219와 응집항체법및 cogglutination법에서 모두 교차반응을 보여 주었다. 이러한 교차반응의 정도는 현장에서 나타나는 여러다른 E. tarda 균주에 감염 될 수 있는 어류의 질병진단에 사용하기에 충분한 정도로 나타났으며 감염어의 조직마쇄물을 1000배 이상 희석하여도 토끼 항 E. tarde 항체로 감작시킨 S. aureus와 coagglutination 될수 있는 양의 E. tarda를 함유하고 있었다. 자연감염 또는 인위감염된 넙치, 틸라피아의 조직마쇄물, 열탕추출항원에 대한 이 방법의 적용 결과는 본방법이 특별한 장비없이 현장에서 질병진단 기법으로 사용할 수 있다는 것을 보여 준다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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