해조 가수분해능이 우수할 것으로 추정되는 부식한 소나무에서 채취한 미생물군 시료에 대하여 다시마분말 첨가 고체배지를 이용하여 4차에 걸쳐 순수배양을 실시하였다. 그 결과 16균주를 분리하였으며, 이들 균주를 다시마분말 첨가 액체배지에서 3주간 배양하며, 1주 간격으로 전당과 환원당의 함량을 측정한 결과 배양 전 기간에 08A211, 08C221 및 08B121균주가 모든 균주 중에 대체로 높은 분해율을 보였다. 이렇게 하여 선택된 3균주, 즉 08A211, 08B121 및 08C221균주에 대하여 sodium alginate, 다시마 및 미역분말이 첨가된 액체배지에서 균체성장과 분해율은 측정한 결과 08B121균주가 가장 높은 균체 성장과 다시마 및 미역 분해율을 나타내었다. 따라서 본 균주에 해조의 다당 또는 다른 성분을 가수분해시키는 효소가 존재할 것으로 추측된다.
식품조리 및 가공은 만들어진 제품의 저장성을 전제로 해야 하기 때문에 식품의 변화 혹은 변질에 깊은 이해를 바탕으로 모든 처리와 가공 방법이 검토되어야 한다. 식품의 변질이나 부패는 미생물 작용에 의한 변질이 그대부분을 차지하고 있으며 미생물학적 변질을 방지하기 위해서 화학적 합성보존 제가 상업적으로 사용되고 있으나 최근 소비자의 건강 지향적 욕구가 증대됨에 따라 인공합성품의 기피현상이 두드러지고 있다. 따라서 천연 항균물질의 개발과 이용은 인공 합성보존제의 대처라는 의미와 소비자기피현상을 유발시키지 않으면서 각종 가공식품의 저장성 향상 및 저온 유통식품의 안정성확보라는 견지에서 그 중요성이 있다. 본 실험에서는 식품의 미생물작용에 의한 변질의 저해 효과가 뛰어난 식물성천연항균제품(Botanical antimicrobial agents-Citrus product : 이하 BAAC라 칭함)에 천연보조제(Ginseng extract, Aloe, 매실추출물)를 첨가하여 Paper disk법에 의한 항균성 검사를 실시한 결과 Ginseng extract를 첨가한 경우 생육저해환이 가장 크고 뚜렷하게 나타났다. 따라서 BAAC에 보조제 (Ginseng extract)를 첨가하여 제조 된 천연 항균복합제재(이하 BAAG라 칭함)를 가공 반찬류인 마늘종 무침과 돈육장조림에 첨가하여 처리한 후 꺼내어 상온에서 저장하면서 주사전자현미경 관찰, 대장균수, 총균수의 변화, 외관상의 변화에 미치는 영향을 무처리 대조구와 비교하면서 조사하였다. 주사전자현미경 촬영사진의 결과 분석을 통하여 BAAG를 처리한 균체 세포는 세포막 및 세포벽 기능이 파괴되어 세포내용물이 균체외부로 유출되어 균체의 생육이 억제되며 성장을 저해 또는 사멸시키는 것으로 나타났다. 대장균수는 모든 처리구에서 BAAG의 첨가에 의해 성장이 억제되었으며 농도가 증가시킬수록 균증식 억제 효과가 뚜렷하였으며, 총균수도 압도적으로 낮은 값을 보여주었다. 외관상의 변화와 상품 가치를 측정한 결과는 무늘 종 무침과 돈육장조림의 대조구에서는 4일 경과후 강한 부패취와 아울러, 표피의 갈변정도가 심하되어 관능적으로 부패상태를 인지할 수 있었으며 7일경과 후부터 점질성 갈변물질이 생성되어 상품가치가 크게 떨어진 상태였다. 이와 같은 결과로 볼 때, BAAG의 처리는 BAAC의 경우보다 가격은 저렴하면서도 항균력은 우수한 천연 항균복합제재로써 가공 반찬류의 저장성을 최대한 연장 할 수 있음을 확인 하였고, 반찬류뿐만 아니라 여러 식품군에 다양하게 적용가능 할 것으로 기대된다.
선발균의 효소생산성 향상을 위해 배양과정의 특징을 조사하였다. 효소생산을 위한 최적의 탄소원은 sucrose (35)이고, 질소원은 ammonium oxalate와 yeast extract를 함께 넣어 주었을 때이었다. 5l jar fermentor에서 선발균의 배양형태를 조사한 결과 2-3일 배양기간에는 pH가 4 이하로 현저하게 감소하는 것을 관찰하였고 4일 이후 다시 pH가 5-6 사이로 증가하였다. 균의 성장은 4일까지 증가하였다. 균체내 효소의 생성은 2일까지는 현저한 증가를 보이고 3-4일 정도 큰 변화를 나타내지 않으며 5일 이후 감소하였다. 균체외 효소는 5-6 일까지 계속 증가하는 형태를 나타내었다. Glucose로 24시간 동안 미리 배양한 후 surcose를 첨가하여 배양했을 때 균체내 효소의 생산이 현저히 증가하는 것을 알 수 있었다.
공생 박테리아 Photorhabdus sp. strain TF 균체량이 증가함에 따라서 병원성 선충 Heterorhabditis bacteriophora의 Infective Juveniles의 생산이 증가되었다. 이 공생 박테리아의 성장 최적 조건은 각각 배양 온도 3$0^{\circ}C$ 그리고 초기 배지 pH 5.5부터 7.3 사이에서 얻어졌다. 통기 상태에서 박테리아 균체의 생산과 성장이 촉진됨이 밝혀졌다. Photorhabdus sp. strain TF 박테리아의 성장 중 생산된 색소와 배양액의 pH의 변화는 박테리아의 성장 정도 나타내어 액체배양에서 병원성 선충 Heterorhabditis bacteriophora의 접종시기로 표시로서 이용할 수 있을 것이다.
전분으로부터 효모균체를 직접 생산하기 위하여 분리, 동정된 전분이용성 효모, Sporobolomyces holsaticus FRI Y-5의 배양중 전분자화특성에 대하여 검토하였다. 유기영양원인 yeast extract 첨가실험에서 균체량이 최고에 이르며 전분이용율도 높은 최적첨가량은 2.5g/l였다. 발효조배양실험에서 Sp. holsaticus의 비성장 속도는 $0.14\;hr^{-1}$였으며 최대균체량은 13.4g/l였다. 배양 80시간후 relative blue value는 45.1%가 감소되었고 전분은 45.96%가 소모되었으며 이때 균체수율은 0.425였다. 환원당은 전체적으로 증가하다 감소하는 경향을 보였으며 배양중 pH는 pH7.0을 중심으로 거의 변화가 없었다. Sp. holsaticus amylase의 최적온도 및 작용 pH는 각각 $40^{\circ}C$, pH7.5였다. Tapioca 전분농도별 배양실험에서 Tapioca전분의 초기농도가 41.46g/l일 때 균체량이 18.17g/l로 최대였으며 이때 소모된 Tapioca전분량도 25.53g/l로 최대였다. 그러나 균체수율은 Tapioca농도가 증가함에 따라 증가하였다. 이때 Tapioca전분의 최적초기농도는 가용성전분에 비하여 낮았다. Sp. holsaticus FRI Y-5의 침강속도는 IFO 1032 균주에 비하여 매우 느렸으며 균체점도는 높은 편이었다.
Synechocystis sp. PCC6803의 type II Isopentenyl diphosphate isomerase gene(sll1556, Syidi2)의 특성을 살펴보기 위하여 ${\Delta}idi$인 E. coli $DH5{\alpha}$를 제작하고, 이 균주에서 cloning하고 발현시켰다. 라이코펜 합성 유전자들(crtE, crtB, and crtI)과 mevalonate pathway 유전자들(MvK1, MvK2, Mvd)를 함유한 ${\Delta}idi$ E. coli $DH5{\alpha}$ 균주를 mevalonate가 함유된 LB 배지에서 배양하면 mevalonate pathway 유전자들을 함유한 E. coli $DH5{\alpha}$균주는 mevalonate에 의해 생성된 isopentenyl diphosphate의 독성에 의해 매우 느린 성장을 보였다. 라이코펜 합성유전자들과 mevalonate 합성유전자들을 함유한 ${\Delta}idi$ E. coli $DH5{\alpha}$ 균주에 Syidi2를 도입한 결과, mevalonate가 함유된 LB배지에서 균체의 성장이 완전히 회복되었으며, 라이코펜이 합성되었음을 나타내는 붉은 균락이 형성되었다. 이에 따라, SyIdi1과 ECidi를 도입하여 비교한 결과, 라이코펜 합성 유전자들과 mevalonate pathway 유전자들을 함유한 ${\Delta}idi$ E. coli $DH5{\alpha}$ 균주 자체와 SyIdi1을 도입한 라이코펜 합성 유전자들과 mevalonate pathway 유전자들을 함유한 ${\Delta}idi$ E. coli $DH5{\alpha}$ 균주는 IPP의 독성에 의해 성장이 매우 느렸으나, SyIdi2, RSidi, HPidi, 및 ECidi를 함유하고 있는 ${\Delta}idi$ E. coli $DH5{\alpha}$ 균주는 균체의 성장과 라이코펜의 합성을 완전히 회복하였으며, 그중 가장 우수한 라이코펜 생합성 결과를 나타낸 것은 pSUP-LYCSyIdi2로서 균체당 라이코펜 생성량이 control 대비 2.8배이었다.
판형 배양조를 이용하여 온도와 빛 강도를 변화시키면서 Spirulina platensis의 성장과 이에 따른 균체내 지질축적량 및 지방산의 조성을 분석하였다. 균체량으로부터 빛 강도에 대해서 고찰해본다면 $2695{\mu}E/m^3/sec$의 낮은 빛 강도는 적절한 배양 빛 강도가 아니었고, 온도에 따라 다소의 차이는 있지만 $4235{\mu}E/m^3/sec$와 $6391{\mu}E/m^3/sec$ 사이의 빛 강도가 적절였다. 온도의 경우 $40^{\circ}C$에서는 빛 강도에 관계없이 균체 성장이 억제되고 결국에는 사멸이 일어나는 것으로 판단되었고, $25^{\circ}C$의 낮은 온도에서는 성장이 지연되었다. $30^{\circ}C$와 $35^{\circ}C$가 적절한 온도였는데, 빛 강도에 따라 온도의 선택이 달라져야 한다는 것을 알 수 있었다. 지질 함량은 $30\~35{\circ}C$ 온도와 $4235-6391{\mu}E/m^3/sec$ 사이의 빛 강도에서 최대를 보여주고 있으며, 지질조성은 배양 조건에 관계없이 C16 : 0가 가장 높은 비율을 차지하였고, C210 : 0, C18 : 2의 순이었고, 특정 지질성분의 생산이라는 측면에서 기대했던 C18 : 3의 함량은 몇몇 조건에서만 극히 소량으로 검출되었다.
배지성분으로 첨가된 glutamate의 농도가 균의성장고 tylosin 생합성에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과 oxaloacetate를 공동기질로 사용하는 효소의 활성에 의하여 균의 성장과 tylosin의 생합성이 조절됨을 알았다. 즉, citrate synthase와 aspartate aminotransferase의 활성은 균의 성장에 아주 긴요하며 methylmalonyl-CoA carboxytransferase의 활성은 tylosin 생합성에 아주 중요한 효소임을 알았다. Glutamate의 농도는 우의 효소의 활성에 직접적으로 영향을 주고 있음을 알았다.
본 연구는 주변에서 흔히 구할 수 있는 여뀌를 이용하며 유용한 미생물을 대량생산 할 수 있는 값싼 배지를 개발하는데 있다. 길항미생물 B. lentimorbus G-74를 이 배지를 이용하여 최적화한 결과, 30% 여뀌즙액 배지. $35^{\circ}C$. pH 5.0의 조건에서 가장 높은 균체성장을 보였다.
물리적 요인이 발암물질 (aflatoxin) 감소 및 파괴에 미치는 영향의 일환으로 자연의 태양광선이 곰팡이 균체 및 aflatoxin을 감소시키는 바를 시험하였다. A. parasiticus ATCC 15517을 yeast-extract sucrose (YES)배지 및 potato-dextrose agar (PDA)에 접종하여 균체를 성장시키고 aflatoxin을 생성시켰다. 이를 태양광선에 노출시키고 168시간동안 경시적으로 관찰하였다. 곰팡이의 균체량은 8시간후에 23.2% 감소되었으며 168시간 후에는 33.3% 감소되었다 (p<0.05). 총 aflatoxin은 8시간 후에는 YES배지 및 PDA에서 모두 50%이하로 감소되었으며 (p<0.05), 168시간 후에는 YES배지에서는 9.6%로 그리고 PDA에서는 22.8%로 감소되었다 (p<0.01). 이로부터 태양광선에 의한 곰팡이 균체의 감소 정도는 미약하나 aflatoxin의 분해 정도는 그 효과를 기대할 수 있는 수준인 것으로 평가된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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