목적 : 본 연구는 계혈등 약침액이 자궁경부암 세포주 SNU-17에서 세포 사멸 효과가 있는지 알아보고자 하였다. 방법 : 자궁경부암 세포주 SNU-17에서 세포 사멸의 변화를 관찰하기 위해서 MTT cytotoxicity assay, DAPI staining, TUNEL assay, RT-PCR analysis 방법을 이용하였다. 결과 : 세포독성 검사에서 계혈등 약침액은 자궁경부암 세포주 SNU-17에 농도 의존적으로 세포독성을 나타내었다. 이러한 계혈등 약침액의 세포독성이 세포사별로 인한 것인지 다른 기전에 의한 것인지 알아본 결과 계혈등 약침액에 의한 세포독성은 DAPI staining 과 TUNEL assay에서 세포사멸의 특정적인 소견들을 나타내었다. 계혈등 약침액이 Bax, Caspase-3의 발현에 미치는 영향을 RT-PCR로 관찰한 결과 계혈등 약침액은 Bax, Caspase-3의 발현을 증가시켰다. 결론 : 이상의 결과 계혈등 약침액이 자궁경부암 세포주 SNU-17에서 세포 사멸을 야기하여 자궁경부암의 치료에 유용할 것으로 사료된다.
본 연구에서는 계혈등 추출물에 의한 항산화 효과, in vitro MMP-1 효소 활성 저해 효과 및 사람섬유아세포에서 UVA에 의해 발현이 증가되는 MMP-1에 미치는 영향을 관찰하였다. 계혈등 추출물의 DPPH와 superoxide radical 소거효과는 처리농도가 증가함에 따라 농도 의존적으로 소거효과를 나타냈으며, $IC_{50}$은 각각 $45.81{\mu}g/ml$, $3.11{\mu}g/ml$로 DPPH와 superoxide radical을 소거하여 우수한 항산화 효과를 나타내었다. MMP-1 효소 활성 저해 효과도 $80{\mu}g/ml$에서 $97.33\%$를 저해하는 것으로 나타나 우수한 효과를 나타내었다. 사람섬유아세포에서 UVA에 의해 발현이 증가되는 MMP-1의 발현저해효과는 계혈등 추출물 $10{\mu}g/ml$에서 $74.66\%$로 단백질 수준에서 우수한 발현저해효과를 나타내었으며, mRNA수준에서도 계혈등 추출물은 모두 농도 의존적으로 발현 저해효과가 나타났다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 계혈등 추출물은 항산화 효과, MMP-1 효소 활성저해 효과와 UVA에 의한 MMP-1의 발현을 효과적으로 저해하는 것으로 보아 우수한 항노화 소재로써 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
약용식물 3종에 대한 항균활성 결과, 보골지와 오미자 분획층에서 계혈등 분획층보다 높게 나타났다. 계혈등과 보골지 n-hexane 분획층에서 그람 음성균보다 그람 양성균에 대한 항균활성이 유의적으로 높게 나타났으며(p<0.05), 항균활성은 농도가 증가함에 따라 증가하였다. 계혈등 n-hexane 분획층의 L. monocytogenes에 대한 MIC는 7.765 (mg/mL), 보골지 n-hexane 분획층의 B. cereus, L. monocytogenes, E. coli 균에 대한 MIC는 2.03 (mg/mL), 오미자 분획층의 (L. monocytogenes), E. coli 균에 대한 MIC는 8.5 (mg/mL)로 나타났으며, 오미자 n-hexane 분획층의 MIC가 모든 균주에서 가장 낮게 나타났다. 약용식물 추출물의 항균활성에 대한 열 안정성 실험결과, L. monocytogens에 대한 계혈등 n-hexane 분획층을 제외하고는 $100^{\circ}C$에서 10분간의 열처리에도 항균 활성의 변화가 없었다. 본 연구 결과 보골지와 오미자 n-hexane 분획층에서 비교적 높은 항균활성을 나타냈다. 이러한, 약용 식물은 다양한 생리활성 및 기능성 성분을 포함하고 있어 천연 항균제의 유용한 자원으로 이용 될 수 있으며, 식품산업 발달에 기여 할 수 있을 것으로 사료된다.
한방 생약재로부터 안전하면서도 신규의 항혈전제를 개발하기 위해, 현재 국내에서 유통되고 있는 국내 및 국외산 한방 생약재 33종을 대상으로 40종의 에탄올 추출물을 조제하고, 이들의 thrombin time (TT), prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (aPTT)을 평가하였다. 생약재중 중국산은 28종으로 대부분이 국외산이었으며, 부위별로는 종자 및 뿌리 부위가 19종을 차지하였다. 평균 수분함량은 $6.85{\pm}2.26%$, 평균 추출율은 $5.27{\pm}4.25%$를 나타내었다. 조제된 시료의 TT평가 결과, 사인(중국), 고본, 팔각향, 계지, 당삼, 계혈등, 행인, 오배자, 괄루근 및 포황에서 우수한 트롬빈 저해활성을 확인하였으며, 다양한 농도에서 평가 결과 계혈등, 행인, 팔각향, 계지, 오배자 추출물 순으로 트롬빈 저해능이 강력함을 확인하였다. PT 평가 결과 오배자, 계혈등, 행인에서, aPTT 평가결과 오배자 및 계혈등에서 우수한 항혈전능을 확인하였다. 한편 추출물의 인간적혈구 용혈활성을 평가한 결과, 계혈등, 팔각향, 계지, 오배자 추출물은 $500\;{\mu}g/ml$ 농도에서도 용혈활성이 없음을 확인하여 이들 4종을 최종 선정하였다. 본 연구결과는 이미 대량생산이 확립된 한방생약제로부터 우수한 항혈전제 개발이 가능함을 제시하고 있으며, 트롬빈 및 혈장 응고 인자에 대한 특이 저해제 개발이 가능함을 제시하고 있다.
The NAD(P)-linked $3{\alpha}-Hydroxysteroid$$dehydrogenase(3{\alpha}-HSD)$ of rat liver cytosol is powerfully inhibited by the non-steroidal anti-inflammatory drugs in rank-order of their therapeutic potency, and this observation has now been developed into a rapid screen for predicting the potency of products that show anti-inflammatory effect. Five-plants were screened by using this method. Among them, BuOH-fraction of Mucuna birdwoodiana showed strong inhibitory effect on $3{\alpha}-HSD$, and three isoflavone compounds were isolated. Inhibitory activates of isolated compounds were compared.
Objectives : This study was done to investigate the effect of Gamigehyuldeung-tang on hypertension. Methods : After administering Gamigehyuldeung-tang extract to SHR(Spontaneous Hypertensive Rats) for 5 weeks, changes in blood pressure, pulse rate, aldosterone and catecholamine levels in plasma were examined, and immunohistochemical changes and scanning electron microscopic changes were observed. Results : The following results were obtained; blood presure decreased significantly as well as levels of aldosterone, dopamine and epinephrine in SHR. But levels of norepinephrine were unaffected. No capillary vessel dilation was observed. A decrease in cell damage was seen in microscope investigation. Conclusions : These results support a role for Gamigehyuldeung-tang might be usefully applied in treatment of hypertension.
계혈등으로부터 6종의 항균활성물질을 분리 정제하여 화학구조를 결정하였다. 계혈등 시료를 음건하여 80% aq. MeOH로 추출하고 감압 농축한 후 n-hexane, EtOAc, n-BuOH, 그리고 $H_2O$ 층으로 분획하였다. 각 분획을 이용하여 벼 도열별, 벼 잎집무늬마름병, 토마토 잿빛곰팡이병, 토마토 역병, 밀 붉은녹병, 보리 흰가루병 등 6가지 식물병에 대하여 식물병 방제효과를 검정한 결과, EtOAc 층이 가장 강한 활성을 보였으며, 벼 도열병, 토마토 잿빛 곰팡이병, 토마토 역병 및 보리 흰가루병에 대하여 80% 이상의 활성을 보였다. EtOAc층을 대상으로 silica gel chromatography 및 preparative TLC, HPLC 등을 이용하여 6종의 화합물을 분리, 정제하고 $^1H$-NMR, $^{13}C$-NMR, ESI-MS/MS, HMQC, $^1H-^1H$ COSY의 기기분석을 통해 ethanone, hydroxytyrosol, epicatechin, procyanidin B-2, dimethoxy daizein과 formononetin 으로 구조를 동정하였다. Epicatechin을 제외한 나머지 화합물들은 계혈등에서 처음으로 분리되었다. 분리한 물질들의 in vitro 및 in vivo 항균활성에 대한 연구를 진행하고 있다.
감초외 48종의 천연 생약재로 부터 열수 및 알콜 추출액을 제작하여 19 균주 어병 세균을 대상으로 항균력을 조사한 결과, 알콜 추출액은 22종, 열수 추출액은 16종이 어병 세균에 대하여 항균력을 나타내며 이 중 13종의 생약재는 알콜 및 열수 추출액 모두 8 mm이상의 저지대를 나타내어 항균력이 있는 것으로 나타났다. 열수 추출물에서 항균력을 나타내는 약재 중 그람 음성균에 감수성이 양호한 약재는 저지대 8 mm 이상을 나타내는 애엽, 개옻나무, 연교, 지유, 파엽, 대황 및 황금이었으며, 그람 양성균에 항균력이 양호한 약재는 삼지구엽초, 육계 및 보골지 등 이었다. 그리고 오매, 황련, 계혈등, 상백피, 오배자 및 오미자는 저지대가 8mm 이상으로 그람 음성, 양성균 모두에 항균력이 있었다. 알콜 추출물중에서 그람 음성균에 항균력을 나타내는 것은 백작약, 오매, 선모 및 황금 등으로 저지대가 8mm 이상으로 측정되었으며, 그람 양성균에 항균력을 나타내는 것은 감초, 계혈등, 단삼, 상백피, 육계 및 보골지 등으로 저지대가 8mm이상이었다. 또한 그람 음성, 양성균에 모두 8mm 이상의 저지대를 나타내는 것은 애엽, 개옻나무, 황련, 지유, 오배자 및 오미자 등이었다. 그러나 이 중에서 오배자 열수 추출물의 어병 세균에 대한 발육 저지대가 32 mm로 그람 음성, 양성균 모두에 가장 뛰어난 항균력을 나타내어 다른 생약재와는 다른 광범위 생약재인 것으로 나타났다. 애엽, 황금, 지유, 오매, 황련 및 오배자 열수․알콜 추출물은 tetracycline(30$\mu{g}$)에 내성을 나타내는 균주에 감수성을 나타내었다.
Spatholobus Suberectus dunn. has been applied to blood stasis in oriental medicine. We selected one potent ethyl acetate subfraction-2 from Spatholobus Suberectus Dunn.(SSD) from anti-metastasis screening. It exerted the cytotoxicity against HT1080 and B16BL6 with the IC50 of 60 ug/ml and also significantly inhibited tumor cell induced platelet aggregation (TCIPA). It effectively didn't inhibit cell adhesion of HT1080 to matrigel coated wells, while it inhibited the cell invasion of HT1080 at the doses of 10, 20, 40 μg/ml by Boyden chamber assay. It effectively suppressed lung metastasis by B16BL6 melanoma in C57BL6 mice. These results indicate that the EtOAc subfraction-2 of Spatholobus Suberectus Dunn. can be applied to caner treatment with anti-metastatic activity.
Objective : Spatholobus Suberectus Dunn stems, Chinese vine plants, have been used for the relief of menstrual disorders and rheumatic arthralgia. In this study, we investigated the antitumor effect of Spatholobus Suberectus Dunn on cervical cancer in vitro. Methods : HeLA cervical cancer cell lines were used as targets. We examined the effect of water extract from Spatholobus Suberectus Dunn on cell proliferation, cell cycle regulation and cell cycle-regulating gene expression. Further, we investigated the apoptotic effects of Spatholobus Suberectus Dunn on cervical cancer cell lines. Results : Spatholobus Suberectus Dunn significantly inhibited the proliferation of cervical cancer cell lines in a dose-dependent and time dependent manner. Fluorescence activated cell sorter (FACS) analysis indicated that Spatholobus Suberectus Dunn induced G1 cell cycle arrest. Spatholobus Suberectus Dunn enhanced the expression of $p21^{waf1}$ and $p27^{kip1}$ with cell cycle arrest. Further, Spatholobus Suberectus Dunn stimulated apoptosis via caspase3 pathway. Conclusions : These findings suggest that Spatholobus Suberectus Dunn is a candidate agent for the treatment of cervical cancer. p21waf1 and $p21^{waf1}$ and $p27^{kip1}$ may play an important role in Spatholobus Suberectus Dunn-induced cell cycle arrest and cell growth inhibition.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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