연구배경 : 산소기가 여러 종류의 급성 폐손상에 중요한 역할을 한다는 것은 이미 잘 알려진 사실이다. 생체내에는 여러 항산화 방어기전이 존재하는데, SOD는 두 개의 superoxide radical이 과산화수소와 산소로 dismutation되는 과정을 $10^4$배 촉진시키는 효소로서 산소기에 대한 일차적인 방어기전으로 작용한다. Eukaryotic 세포내에는 두 가지 종류의 SOD가 존재하는데, 하나는 세포질에 위치하고 이중체(dimeric)의 구조를 가지며 구리와 아연을 포함하는 효소(CuZnSOD)이고, 또 하나는 미토콘드리아에 있고 사중체(tetrameric)의 구조를 갖는 망간을 포함하는 효소(MnSOD)이다. 내독소에 의한 백서의 급성 폐손상 모델에서 내독소 투여 후 시간 경과에 따른 백서 폐장의 MnSOD와 CuZnSOD의 유전자 발현을 관찰하여 이를 급성 폐손상의 양상과 비교하고자 본 연구를 시행하였다. 방법 : 백서에 E. coli의 내독소를 투여한 후 0, 1, 2, 4, 6, 12, 18, 그리고 24시간 후에 백서를 희생시켜 폐장을 얻은 후 폐장의 총 RNA를 single step phenol extraction 방법으로 추출하였다(n=3, respectively). 총 RNA를 formaldehyde를 함유한 1.2% agarose gel 에 전기영동하고, gel의 RNA를 nylon membrane으로 transfer시켰다. Nylon membrane을 $^{32}P$로 labeling시킨 MnSOD와 CuZnSOD를 probe로 하여 hybridization하고 autoradiography를 시행하였다. 결과 : 내독소률 투여하고 4시간후부터 MnSOD mRNA가 발현되기 시작하여 6시간에 최고치를 보였고, 약 12시간까지 지속되었으며, 24시간이 경과한 후에는 대조군의 수준으로 감소되었다. CuZnSOD 유전자는 내독소를 투여하고, 1 시간후부터 발현되기 시작하여 24시간까지 지속되었는데, 18시간에 최고치에 도달하였다. 결론 : 이상의 결과는 SOD가 백서에서 내독소에 의해 유발된 급성 폐손상에 대한 방어기전에 관여 할 가능성을 시사하는 것으로 생각된다.
Antioxidants and antioxidants with somatic cell co-culture, bovine oviduct epithelial cells(BOEC) and buffalo rat liver cells(BRLC), were studied as a mean of increasing the development and intracellular glutathione(GSH) concnetrations of bovine embryos derived from in vitro matured(IVM) and in vitro fertilized(IVF) oocytes. Cell numbers and intracellular GSH concentrations of blastocysts were also counted. The developmental rate beyond morula stages in CRlaa containing taurine(2.5mM), superoxide dismutase(SOD, 600U) and catalase(250U) were 1%, 75.0%, 64.8% and 62.3%, respectively. The developmental rate in antioxidant groups was significantly higher than in control(P<0.05). The intracellular GSH concentrations of blastocysts cultured in 0, 2.5mM taurine, 600U SOD and 250U catalase were 33.8pM, 39.3pM, 42.3pM and 54.8pM, respectively. This result indicated that the developmental rates and intracellular GSH concentrations of catalase group was significantly higher than any other groups(P<0.05). The developmental capacity in CRlaa plus various antioxidants co-cultured with BOEC were 55.3%(control), 74.1%(2.5mM taurine), 66.7%(600U SOD) and 70.7%(250U catalase) and in CRlaa plus various antioxidants co-cultured with BRLC in control, 2.5mM taurine, 600U SOD and 250U catalase were 63.8%, 75.5%, 71.0% and 73.5%, respectveily, the intracellular GSH concentrations of blastocyst embryos co-cultured with BOEC and BRLC in CRlaa with 0.25mM taurine, 600U SOD and 250U catalase were 73.4pM and 64.4pM, 79.9pM and 67.5pM, 82.3pM and 71.7pM, and 83.0pM and 80.0pM, respectively. Cell numbers of blastocysts were not difference in all experimental groups. These studies indicate that andtioxidants and antioxidant with somatic cell co-culture can increase the proportion of embryo that developed into morula and blastocysts, and the intracellular GSH concentrations of blastocyst embryos.
In vitro 항산화 활성이 확인된 참취가 생체 내에서도 활성을 나타내는 지를 확인하기 위해 대조군과 5%및 10% 참취 분말을 첨가한 식이를 4주간 횐쥐에 투여하면서 마지막 1주간 알콜로 산화적 스트레스를 유발한 후 희생시킨 흰쥐의 체중 증가량과 함께 체중에 대한 장기의 상대 중량, 간, 신장에서의 지질과산화, 항산화효소 활성, glutathione 및 혈청 알부민의 함량을 분석하였다. 4주간의 사육 후 체중 증가량은 대조군, 5% 참취첨가군 그리고 10% 참취첨가군의 순으로 높았으나 유의적인 차이는 없었으며 체중에 대한 상대적인 장기 중량 중에서 간, 비장은 대조군에 비해 참취 첨가군의 경우 더 낮은 비율을 나타내었다. 간에서 지질과산화로 생성되는 TBARS 함량은 대조군(66 $\mu\textrm{g}$)에 비해 5%(45 $\mu\textrm{g}$) 및 10% 참취 분말 식이군(35 $\mu\textrm{g}$)에서 참취 첨가량이 증가할수록 낮았다. Mn-SOD와 catalase활성은 참취 첨가군들에서 대조군보다 낮았으나 Cu, Zn-SOD와 glutathione peroxidase 활성 및 glutathione 함량은 실험군들간에 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 신장에서는 Mn-SOD와 glutathione peroxidase 활성이 대조군보다 참취 첨가군에서 유사하거나 낮은 경향을 나타내었으나 Cu, Zn-SOD와 catalase의 활성 및 TBARS, glutathione의 함량은 실험군들간에 유의적인 차이를 보이지 않았다. 한편, 혈청 알부민의 함량은 실험군들간에 큰 차이가 없었다. 이상과 같은 실험 결과를 종합할 때 참취는 에탄올에 의해 유발된 산화적인 스트레스를 적절하게 방어하여 특히 간장에서의 지질과산화 및 Mn-SOD활성의 감소를 가져왔으며 그 효과는 참취의 첨가량에 비례하는 경향을 나타내었으므로 생체 안에서 알코올과 같은 산화적 스트레스에 대한 항산화제로서의 역할을 효과적으로 수행할 수 있을 것으로 기대된다.
Kang, Kyu-Tae;Sullivan, Jennifer C.;Pollock, Jennifer S.
Toxicological Research
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제34권4호
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pp.363-370
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2018
Many studies reported reduced antioxidant capacity in the vasculature under hypertensive conditions. However, little is known about the effects of antihypertensive treatments on the regulation of vascular antioxidant enzymes. Thus, we hypothesized that antihypertensive treatments prevent the reduction of antioxidant enzyme activity and expression in the small vessels of angiotensin II-induced hypertensive rats (ANG). We observed the small mesenteric arteries and small renal vessels of normotensive rats (NORM), ANG, and ANG treated with a triple antihypertensive therapy of reserpine, hydrochlorothiazide, and hydralazine (ANG + TTx). Systolic blood pressure was increased in ANG, which was attenuated by 2 weeks of triple therapy (127, 191, and 143 mmHg for NORM, ANG, and ANG + TTx, respectively; p < 0.05). Total superoxide dismutase (SOD) activity in the small mesenteric arteries of ANG was lower than that of NORM. The protein expression of SOD1 was lower in ANG than in NORM, whereas SOD2 and SOD3 expression was not different between the groups. Reduced SOD activity and SOD1 expression in ANG was not restored in ANG + TTx. Both SOD activity and SOD isoform expression in the small renal vessels of ANG were not different from those of NORM. Interestingly, SOD activity in the small renal vessels was reduced by TTx. Between groups, there was no difference in catalase activity or expression in both the small mesenteric arteries and small renal vessels. In conclusion, SOD activity in the small mesenteric arteries decreased by angiotensin II administration, but not by hypertension, which is caused by decreased SOD1 expression.
$SO_2$에 대한 양버즘나무의 내성을 증대시키고자 uniconazole, sodium benzoate 또는 ascorbic acid를 단용 또는 복합처리한 후 $SO_2$에 의한 가시피해정도, 엽록소함량 및 유리기 제거제로 활성산소의 독성을 중화시킬 수 있는 superoxide dismutase(SOD) 및 peroxidase(POD)의 활성변화를 조사하였다. Uniconazole처리에 의한 $SO_2$ 피해경감 효과는 SOD불활성제인 diethyldithiocarbamate(DDTC)를 다시 처리하므로써 가시피해가 증가하였고 SOD와 POD의 활성도 감소하였다. 유리기 제거제인 sodium benzoate와 ascorbic acid처리는 SOD나 POD 활성에 영향을 주지않으면서 $SO_2$의 피해를 경감시키고, DDTC의 $SO_2$피해증가 효과를 ascorbic acid 처리로 감소시킬 수 있었다. 이상의 결과로 미루어 uniconazole은 식물체내에서 산화방지물질의 역할을 하는 SOD의 활성을 증대시켜 $SO_2$가스의 피해를 경감시키는 효과가 인정되며, ascorbic acid와 sodium benzoate의 내성 증대 효과는 식물체내의 SOD나 POD 활성 증진과는 관계가 없는 것으로 판단된다.
Background: Oxidative stress caused by the generation of reactive oxygen species plays an important role in human carcinogenesis. Manganese superoxide dismutase (MnSOD) Val-9Ala in the mitochondrial target sequence is the best known polymorphism of this enzyme. The purpose of the current research was to assess the association of MnSOD Val-9Ala genotypes with the risk of gastric cancer. Materials and Methods: This case-control study covered 54 gastric cancer patients compared to 100 cancer free subjects as controls. Extraction of DNA was performed on bioptic samples and genotypes were identified with a polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method. Results: The frequencies of MnSOD Ala/Ala, Ala/Val and Val/Val genotypes in healthy individuals were 24.3, 66.7 and 9%, respectively. However, in gastric cancer patients, Ala/Ala, Ala/Val and Val/Val were observed in 24.0, 48.0 and 28.0% (p=0.01). In patients the frequency of MnSOD Val allele was higher (52%) compared to that in controls (42%). Conclusions: The results of this study show a positive association between MnSOD Val-9Ala gene polymorphism and risk of gastric cancer disease in Iranian population.
The study was conducted to determine the optimal glucose, superoxide dimutase(SOD) and catalase levels during the in vitro culture of porcine oocytes matured and fertilized in vitro for morulae and blastocyst development. Oocytes were cultured for 0~8 days in TCM-199 medium supplemented with 20% FCS, different glucose, SOD and catalase levels. The results are summairzed as follows ; 1. The in vitro developmental rates of porcine oocytes cultured in TCM-199 medium containing 0.1, 0.3, 0.5, 1.0, 3.0 mM glucose levels 0~3 and 0~8 days after insemination were 22.8, 24.2, 21.9, 20.0, 12.1 and 21.9, 26.7, 25.0, 22.6, 16.7%, respectively. 2. The in vitro developmental rates of porcine oocytes cultured in TCM-199 medium containing 100, 200, 300, 500 $\mu\textrm{g}$/ml SOD levels 0~3 and 0~8 days after insemination were 16.7~23.3 and 16.7~25.0%, respectively. High levels of SOD(500 $\mu\textrm{g}$/ml) significantly reduced the rates of molurae and blastocysts stage(P<0.05). 3. The in vitro developmental rates porcine oocytes cultured in TCM-199 medium containing 100, 200, 300, 500 $\mu\textrm{g}$/ml catalase levels 0~3 and 0~8 days after insemination were 18.8~26.7 and 19.4~28.1%, respectively, and there was significant differences on the development to the molurae and blastocysts stage among the cumulus cells and glucose levels.
The nonenzymatic glycation of copper, zinc-superoxide dismutase (Cu,Zn-SOD) led to inactivation and fragmentation of the enzyme. The glycated Cu,zn-SOD was isolated by boronate affinity chromatography. The formation of 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine (8-OH-dG) in calf thymus DNA and the generation of strand breaks in pBhiescript plasmid DNA by a metal-catalyzed oxidation (MCO) system composed of $Fe^{3+}$, $O_2$, and glutathione (GSH) as an electron donor was enhanced more effectively by the glycated CU,Zn-SOD than by the nonglycated enzyme. The capacity of glycated Cu,Zn-SOD to enhance damage to DNA was inhibited by diethylenetriaminepentaacetic acid (DETAPAC), azide, mannitol, and catalase. These results indicated that incubation of glycated CU,Zn-SOD with GSH-MCO may result in a release of $Cu^{2+}$ from the enzyme. The released $Cu^{2+}$ then likely participated in a Fenton-type reaction to produce hydroxyl radicals, which may cause the enhancement of DNA damage.
본 연구에서는 Streptomyces subrutilus P5의 생장과 세포내 외 철 함유 superoxide dismutase 활성을 비교 분석하여 철함유 superoxide dismutase의 분비 시점을 확인하고 분자 수준에서 이 효소의 분비에 관여하는 유전정보를 확인하고자 하였다. Streptomyces subrutilus P5의 균체 생장은 건체 중량을 측정하여 결정하였다. Glucose는 log phase에서 급격히 소모되어 24시간 후에 이르러 완전히 고갈되었다. 세포내의 철 함유 superoxide dismutase는 배양 후 3시간에 나타나며 세포외 철 함유 superoxide dismutase는 배양 후 7.5시간부터 나타난다. 따라서 superoxide dismutase는 용균에 의해서가 아니라 능동적인 분비기작에 의해서 세포 외로 분비된 것으로 추측할 수 있다. Streptomyces subrutilus P5의 sodF에는 signal peptide 유전정보가 존재하지 않았다. 그러나 sodF의 상류지역에서 다른 세균의 type III 분비단백질 유전자와 유사한 type III 분비상자가 발견되었다. Streptomyces 균주에서 type III 분비단백질이 존재할 가능성이 있음을 처음으로 제시하였다.
A balance between production and degradation of reactive oxygen species (ROS) is critical for maintaining cellular homeostasis. Increased levels of ROS during oxidative stress are associated with disease conditions. Antioxidant enzymes, such as extracellular superoxide dismutase (EC-SOD), in the extracellular matrix (ECM) neutralize the toxicity of superoxide. Recent studies have emphasized the importance of EC-SOD in protecting the brain, lungs, and other tissues from oxidative stress. Therefore, EC-SOD would be an excellent therapeutic drug for treatment of diseases caused by oxidative stress. We cloned both the full length (residues 1-240) and truncated (residues 19-240) forms of human EC-SOD (hEC-SOD) into the donor plasmid pFastBacHTb. After transposition, the bacmid was transfected into the Sf9-baculovirus expression system and the expressed hEC-SOD purified using FLAG-tag. Western blot analysis revealed that hEC-SOD is present both as a monomer (33 kDa) and a dimer (66 kDa), as detected by the FLAG antibody. A water-soluble tetrazolium (WST-1) assay showed that both full length and truncated hEC-SOD proteins were enzymatically active. We showed that a potent superoxide dismutase inhibitor, diethyldithiocarbamate (DDC), inhibits hEC-SOD activity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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