대장균 K99 섬모의 생합성은 8개로 구성된 K99의 특이 유전자의 발현과 숙주유래 인자에 의해 조절되는 다른 유전자들의 발현에 의존된다. 본 연구에서는 K99섬모 유전자군중 제 3지역 발현에 유전조절자의 관련성 여부를 연구하였다. Gel retardation 분석 방법올 통하여 제3지역의 발현에 관련된 유전조절단위를 함유한 fanF 지역의 단백질 인자가 부착됨을 암시하였다. 이 분석방법을 이용한 결과는 또한 이 단백질 인자가 K99 유전자에서 유래되지 않고 대장균 염색체에서 유래됨을 지적하였다. 이를 보다 더 조사하기 위하여 대장균 염색체에 Tn10 transposon 유전자 변이 실험을 수행하였다. K99 유전자군으로부터 제 1지역과 제2지역의 유전자를 제거시키고, 제 3지역의 유전자인 fanG에 transposon TnlacZ를 삽입한 pTL65-1 plasmid을 제작하였다. 이 pTL65-1는 다시 Tn10으로 염색체가 변이된 대장균에 주입하였다. 3개의 pTL65-1 주입된 Tn10 대장균 변이체 내에서 fanG의 발현이 증가되었다. 이들 변이대장균으로부터 Tn10이 어떤 염색체 유전자 부위를 변이 시켰는지 확인하기 위해서 변이부위 유전자를 cloning하여 염기서열을 분석하였다. 이중 2개의 clone이 동일하였으며 지금까지 알려지지 않은 유전자였다. 이들 2개의 변이체 내에서 fanG의 발현은 대조군과 비교해 약 4.2배 증가 되였다. 결론적으로 이들 2개의 clone으로부터 유래된 인자는 지금까지 알려지지 않은 제 3지역의 억제 조절자임을 나타내었다.
The disinfection effects of trichloroisocyanuric acid (TICA), calcium hypochlorite (CH), and Bromochlorodimethylhydantoin (BCDMH) on various bacteria in aqueous suspension were comparatively characterized at various concentrations and exposure times of each disinfectant. When various bacteria cells ($10^8\;CFU/ml$) including Escherichia coli, Pseudomonas aeroginosa, Enterococcus faecalis, Bacillus cereus, Legionella pneumophila, and Staphylococcus aureus were exposed with a solution containing 8 ppm each of TICA, a 99% of the initial cells were killed in 60 sec, 368 sec, 372 sec, 506 sec, 812 sec, and 909 sec, respectively. In addition, the minimum exposure time required to kill 99% of E. coli ($10^8\;CFU/ml$) with 8 ppm of each TICA, BCDMH and CH was measured at 60 sec, 114 sec, and 7,100 sec, respectively. These comparative studies demonstrate that disinfection efficacy is highly variable depending on microbial species as well as disinfectant type, concentration, and exposure time.
Edwardsiella tarda, a gram (-) pathogen causing edwardsiellosis in farmed fish, was transformed via electroporation with a plasmid expression vector driving the PhiX174 E-lysis gene under the transcriptional control by lambda PR regulatory sequence. The persistent maintenance of the plasmid vector in recombinant E. tarda was found in numerous subculture procedures over up to 6 months without any adverse effect on the original copy number of plasmids. Comparative examination based on semi-quantitative RT-PCR analysis on transcriptional efficiency of E-lysis gene between recombinant E. coli and E. tarda indicated that promoter strength and induction capacity of bacterial ghosts would be retarded in E. tarda as compared to the E. coli. However, the completeness of induction for bacterial ghosts in E. tarda was the same with E. coli, in which at least 99.99% of induction rate was possible and further the viability of recombinant bacteria was completely eliminated by a post-induction procedure including washing and freeze drying lyophilization.
Water disinfection using UV-LED(Light emitting diode) has many advantages, such as smaller footprint and power consumption as well as relatively longer lifespan than those of conventional mercury-UV lamps. Moreover, UV-LED disinfection is considered an environmentally benign process due to its mercury-free nature. In this study, disinfection using an LED module emitting 275nm UV was carried out. 384 UV-LEDs were put into a cylinder tube with a capacity of 1.7 liters. The UV intensity of the UV-LED module was controlled from 1.7 to 8.4 mW/cm2. The disinfection efficiency for the model microorganism solutions(E. coli ) was monitored. As the UV intensity(I) and contact time(t) varied, inactivation of the microorganisms from 2 to 4-log-removals(i.e., 99 to 99.99% of disinfection efficiency) was achieved. Disinfection using UV-LED was followed to 1st order reaction and the reaction rate constant, k was determined. In addition, the relationship between UV intensity(I) and contact time(t) in order to obtain 99.99% of disinfection efficiency was modeled: I1.2·t= 460, which indicates that the product of UV intensity and contact time requiring 4-log-removals is always constant.
Kim, Jong-man;Yoon, Young-dhuk;Park, Jeung-moon;Kim, Bong-hwan
Korean Journal of Veterinary Research
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v.26
no.1
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pp.97-102
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1986
The prevalence of diarrhea caused by enterotoxigenic Escherichia coli was surveyed on 445 calves in 6 farms which were located in the central part of Korea. The incidence of enterotoxigenic Escherichia coli in calves with diarrhea was investigated by detecting the K99 and F41 antigens from the isolated strains of Escherichia coli The incidence of colibacillosis in calves was 23.3%. Of 238 strains of Escherichia coli isolated from calves with diarrhea, 73 strains(30.6%) were proved possessing the K99 antigen by mannose-resistant hemagglutination(MRHA) using horse red blood cells and 79(33.1%) possessing F41 antigens by MRHA using guinea-pig red blood cells. The minca medium, nutrient broth, tryptic soy broth and brain heart infusion were tested for yield of K99 and F41 pili. The production of pili was greatest in minea medium. The best detachment method of the K99 and F41 pili from the cells was heat treatment for 20 minutes at $60^{\circ}C$ and concentration by precipitation with ammonium sulfate. The purified antigens of K99 and F41 were polypeptides with molecular weights of 18,500 and 29,500, respectively by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis.
Kim, Won-Il;Cho, Yong-Il;Kang, Seog-Jin;Hur, Tai-Young;Jung, Young-Hun;Kim, Nam-Soo
Journal of Veterinary Clinics
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v.29
no.5
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pp.377-383
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2012
Bovine diarrhea is a major economical burden to the bovine industry in Korea. Since multiple infectious agents can be involved in bovine diarrhea, differential diagnosis is essential for effective treatment. Therefore, a panel of two multiplex real-time PCR assays which can simultaneously detect six major bovine enteric pathogens [i.e., bovine viral diarrhea virus (BVDV), bovine coronavirus (BCoV), group A bovine rotavirus (BRV), Salmonella spp., Escherichia coli (E. coli) $K99^+$, and Cryptosporidium parvum] was developed and applied to test 97 fecal samples collected from cattle farms in Korea. In addition, microscopic examination was also preformed on the samples to detect Coccidium oocyst. The estimated sensitivity of the multiplex PCR was 0.1 $TCID_{50}$ for BVDV, BCoV and group A BRV, 5 and 0.5 CFU for E. coli $K99^+$ and Salmonella, respectively, and 50 oocysts for Cryptosporidium. The amplification efficiency of the multiplex PCR ranged between 0.97 and 0.99 for each pathogen. Among 97 samples, 36 samples were positive for at least one of the 6 major pathogens and 6 samples were simultaneously positive for 2 pathogens by the multiplex PCR assay. Coccidium oocysts were also detected in 48 samples, which were all collected from over 1 month old calves. In conclusion, the multiplex real-time PCR panel can be a useful tool for fast and accurate diagnosis of calf diarrhea associated with BVDV, BCoV, group A BRV, E. coli $K99^+$, Salmonella, and/or Cryptosporidium and Coccidium may be an important target which needs to be included in the multiplex PCR panel in the future.
A bacterial strain MPL-01 was isolated from the large intestine of a wild boar. The strain was shown to have morphological, physiological and biochemical characteristics, fatty acids composition typical of Bacillus. The 16S rRNA gene sequence showed that the isolate formed distinct phyletic line that was most closely related to this of Bacillus atrophaeus (99.99%). It was proposed that the strain is classified as B. atrophaeus MPL-01. The strain MPL-01 exhibited the strongest antifungal activity against Colletotrichum acutatum, the pathogen of anthracnose of chili peppers. The ethyl acetate extract of culture filtrate possessed not only the antifungal activity but also the bio-surfactant activity. Therefore, the strain MPL-01 could be a useful bacterium in the development of bio-control process against the pathogenic fungi.
The purpose of this study was the examination for presence of K99 antigen (K99), enterotoxigenicity, 0-groups, colicin and antibiotic susceptibility among E. coil isolated from calves and cows. A total of 49(18.7%) among 262 strains, isolated from 30(26.5%) out of 113 calves and cows, possesed K99, and thirty three of 49 $K99^+$ strains produced ST. Of the strains of diarrheal calf origin which less than 15 days old, a high correlation was observed between enterotoxigenic ability and K99: 92.3% of the $K99^+$ strains produced heat stable enterotoxin(ST). In O group typing of 33 $ST^+$ strains, they belonged to O20(48.4%), O8(9.1%), O9(6.1%), O139(6.1%), O149(6.1%), O101(3.0%), O115(3.0%), except six which were untypable or autoagglutinable. Of 262 E. coil isolates, 30 strains(13.3%) produced colicin and K99 were detected in 6 strains. One hundred eighty eight strains(71.8%) of 262 E. coil isolates were resistance to ampicillin, chloramphenicol, gentamicin, kanamycin, streptomycin, tetracycline, alone or in combination thereof. One hundred and fourteen(60.6%) out of 188 drug resistance strains carried R factor($R^+$) which were transferable to the recipients by conjugation. Sixty five $R^+$ strains(57.0%) carried thermo-sensitive R plasmid.
Park, Kee-Jai;Jung, Sung-Won;Park, Byoung-In;Kim, Young-Ho;Jeong, Jin-Woong
Korean Journal of Food Science and Technology
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v.28
no.6
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pp.1104-1110
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1996
To lessen the initial level of microorganism in kimchi, the preparation method of seasoning mixture was modified and electrolyzed acid-water was substitute for washing water and brine water. Changes in the microbial counts of the red pepper powder-garlic mixture prepared with red pepper powder, garlic and 4.8% (w/w) water (tap water and electrolyzed acid-water) of manufactured kimchi showed that coliform count and E. coli count were reduced to 93% and 98%, of the initial level in the tap water added red pepper powder-garlic mixture and 97% and 99% in the electrolzed acid-water added mixture after 6 hours of mix. After 24 hours of mix, no E. coli was recovered in borth mixtures. Microbial levels were revealed as $2.4{\times}10^5\;CFU/g$ for total count, $2.3{\times}10^5\;CFU/g$ for Lactobacillus count. $1.0{\times}10^2{\;}CFU/g$ of coliform count and $10^1\;CFU/g$ of E. coli count in the seasoning mixture prepared by the general method, and $4.2{\times}10^5\;CFU/g$ of total count, $4.0{\times}10^5CFU/g$ of Lactobacillus count, $1.0{\times}10^3\;CFU/g$ of coliorm count and $4.0{\times}10^2\;CFU/g$ of E. coli count in the mixture propared by the modified method. During fermentation at $10^{\circ}C$, the levels of total and Lactobacillus counts in kimchi prepared by the modified method were significantly lower than those of kimchi were recovered in kimchi prepared by the modified method, whereas there were at the level of $10^1\;CFU/g$ in kimchi prepared by the general method. The pH and acidity of kimchi prepared by the modified method were 4.66 and 0.54%, respectively, whereas those in kimchi prepared b the general method were 4.51 and 0.70%, respectively. But after 14 days of fermentation significant differences were not observed in the changes of microbial, pH and acidity for both kimchi.
The oil emulsion and alhydrogel vaccines were prepared from a strain of enterotoxigenic Escherichia coli isolated from calves with diarrhea and their protective efficacy and immunogenicity were tested in Guinea-pigs. Enterotoxigenic Escherichia coli, isolated from calves with diarrhea, has K99 and F4l antigen as 46.2% and 50.9% with 48 and 53 strains respectively out of 104 strains. The protective efficacy of the gel and oil vaccines were 60% and 80% respectively. Agglutinin titers to sera of Guinea-pigs vaccinated with experimental gel and oil vaccines peaked at 5 and 6 weeks after vaccination.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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