천연배지를 이용하여 담자균을 배양시킨 후 간단한 가공 공정을 거처 식이 가능한 기능성 음료를 개발하고자 대추추출액을 이용하여 균사체 배양조건을 확립하였다. Ganoderma lucidum의 경우 대추 추출액을 이용한 액체 배지의 최적 배양 당도와 pH는 5 Brix, pH 4이었으며, 균사체가 생장하는 데에 있어서 최적배양기간은 균사체 건물량, 색도의 변화를 조사한 결과 배양 10일째로 나타났다. Coriolus versicolor의 경우 최적 배양 당도와 pH는 5 Brix, pH 5이었으며, 최적배양기간은 10일이었다. Phellinus igniarius의 경우 최적 배양 당도와 pH는 5 Brix, pH 5이었으며, 최적 배양기간은 18일이었다. 항암 실험을 실시한 결과, Phellinus igniarius와 Ganoderma lucidum 배양액이 대추 추출액에 비하여 위암세포(Human stomach adenocarcinoma cell lines) 억제효과가 4배나 되었으며 백혈병 세포(Leukemic cell lines)억제 효과는 2배가 되었다.
Ganoderma lucidum이 생산하는 polygalacturonase의 유용활용 방안을 위한 효소의 특성을 연구하기 위하여 버섯배양물로부터 효소를 생산하고 정제하여 그 특성을 검토한 결과는 다음과 같다. Endo-polygalacturonase는 배양여액으로부터 ammonium sulfate 침전, Biogel P-100, DEAE-cellulose, Sehpadex G-150 column chromatography에 의하여 순차적으로 정제되었고, Sehpadex G-150 column chromatography에서 re-gel filtration까지 실시한 결과 specific activity가 892unit/mg protein로 배양여액보다도 약 56배의 정제도를 나타냈으며, exo-polygalacturonase는 ammonium sulfate침전, Biogel P-100, DEAE-cellulose column chromatography까지 부분정제한 결과 9.2배의 정제도를 나타냈다. SDS polyacrylamide gel에서 전기영동을 실시한 결과 단일 band를 나타냈으며, 분자량은 54,000 dalton이었다. Endo-polygalacturonase와 exo-polygalacturonase는 citrus pectin이나 pectic acid보다 apple pectin에 친화도가 높았으며, Lineweaver-Burk plot로부터 계산된 apple pectin에 대한 Km 치는 각각 1.44와 10.6 mg/ml이었다. 이 두 효소의 작용 최적 pH는 4.0이었으나 pH 안정성에서는 endo-polygalacturonase는 $pH\;4.0{\sim}6.0$에서, exo-polygalacturonase는 $pH\;3.5{\sim}5.5$ 범위에서 안정하였다. 효소반응 최적 온도는 endo-polygalacturonase는 $40^{\circ}C$ 이었으나 exo-polygalacturonase는 $60^{\circ}C$에서 최대의 활성을 나타냈고 열안정성도 exo-polygalacturonase가 endo-polygalacturonase보다 더 높은 온도에서도 안정하였다. 또한 endo-polygalacturonase는 $Ca^{++}$ 과 $Mn^{++}\;ion$에, exo-polygalacturonase에는 $Ca^{++}\;ion$에 의해 효소반응이 촉진되었다.
본 연구는 영지버섯(Ganoderma lucidum)의 영양학적 특성과 생리활성을 조사하였다. 탄수화물 함량은 원형 영지버섯이 높았고 조회분, 조지방, 조단백질 및 무기질 함량은 녹각 영지버섯이 높았다. 주요 아미노산, 지방산, 무기질 및 수용성 비타민은 valine(원형: 11.90 mg/g 및 녹각: 17.18 mg/g), linoleic acid(원형: 47.56% 및 녹각: 75.68%), 칼륨(원형: 116.50 mg/100 g 및 녹각: 184.36 mg/100 g) 및 비타민 $B_3$(원형: 1.78 mg/100 g 및 녹각: 1.81 mg/100 g) 있었다. 한편 ${\beta}$-glucan 함량은 각각 34.15 g/100 g(원형)과 30.07 g/100 g(녹각)로 검출되었다. 추출조건 중 $40^{\circ}C-70%$ 에탄올 추출물에서 가장 우수한 라디칼 소거활성과 탄수화물 및 지방분해 효소 저해활성을 나타내었다. 특히, $40^{\circ}C-70%$ 에탄올로 추출한 원형영지버섯의 1 mg/mL 처리 시 DPPH, ABTS 및 hydroxyl 라디칼 소거활성과 ${\alpha}$-glucosidase, ${\alpha}$-amylase 및 pancreatic lipase 저해활성은 각각 92.85, 99.74, 58.09, 89.68, 44.68, 67.56%로 나타났다.
Ganoderma속균은 약효가 인정되어 많이 인공 재배되어 이용되고 있으나 본 속균에 대한 기초적인 연구가 미흡한 실정이므로 본 연구에서는 영지 속균을 채집하여 분리 동정하였으며, 또한 배양적 특성과 형태적인 특징을 조사하였다. 영지속균은 경기도와 강원도 11개 장소의 참나무, 아카시나무, 오리나무 등에서와 6재배농가에서 채집되었다. 대부분의 영지는 하나의 버섯이 그루터기에서 형성되나 오리나무에서는 다수가 형성되었다. 영지속균의 균사 생장적온은 G. applanatum, G.lucidum, G. neo-japonicum에서는 $28{\sim}30^{\circ}C$이었고, G. tsugae에서는 $26^{\circ}C$이었으나 $32^{\circ}C$에서는 천천히 생장하였다. Hamda배지를 pH 6.2로 조정하였을 때 균사생장이 가창 좋았다. 6종의 공시균주에 대한 균사의 형태적인 특정으로 G. applanatum, G. lucidum, G. neo-japonicum은 staghorn를 형성하였으나 G.oregonens, G. ualeosiacum은 포도형의 가지를 가진 staghorn균사를 형성하였다. Clamp connection은 G. applanatum, G. lucidum, G. oregonense, G. valeosiacum균의 균사에서 관찰되었으나 node형을 가진 G. neo-japonioum에서는 형성되지 않았다. 후막포자는 G. applanatum, G. neo-japonicum에서 형성되었으며, cuticular cell는 G. lucidum, G. neo-japonicum, G. oregonense, G. tsugae의 균사에서 형성되었다.
영지버섯 Ganoderma lucidum과 잔나비걸상버섯 Ganoderna applanatum의 원형질체 융합균주 5개에 대하여 항암실험을 실시하여 그 중에서 다른 것에 비해 항암력이 높은 융합균주 F-2를 선발하였다. 그 항암성분을 조사하기 위하여 융합체의 균사를 액내 배양하고 열수추출물로부터 얻은 단백 다당체를 DEAE cellulose ion exchange column chromatography와 Sepharose CL-4B gel filtration을 이용하여 5가지 분획(Fr. I-V)으로 분리, 정제하여 모균주들과의 차이점을 비교, 분석하였다. 모균주와 분리한 각 성분들을 20mg/kg/day 용량으로 마우스의 복강에 투여하였을 때 sarcoma 180 고형암에 대하여 균주보다 융합체 성분(Fr. ll)의 종양억제율이 최고 1.5배로 증가되었다. 그리고 마우스의 면역에 영향을 미치는 항암성분을 연구한 결과, 대조군에 비해 활성화된 대식세포에서 분비되는 superoxide anion의 양을 1.2배, 비장세포중의 용혈반 형성 세포수를 4.3배로 증가시켰다. 화학분석에 의하면 이 성분은 glucose, galactose, mannose, fucose와 xylose로 구성된 다당류가 85.2%이며 15종의 아미노산으로 구성된 단백질이 0.39%이었고, hexosamine이 0.39%로 구성되었으며 분자량은 $5.6{\times}10^4$ dalton이었다.
영지의 수용성추출물이 alcohol발효에 미치는 영향을 검토하기 위해 영지추출물을 0, 0.01, 0.1, 0.5, 1.0% 되게 첨가한 맥아즙에 S. cerevisiae를 접종하고 120시간 발효 ($15^{\circ}C$)과정중 S. cerevisiae의 생육도, pH의 변화 및 당 소비량, alcohol생성 등을 조사하였다. 영지추출물 첨가량이 증가 할수록 균체 증식은 현저하였고, 발효 120시간에서 0.1%, 0.5%, 1.0%구는 대조구보다 각각 1.2배, 1.5배, 1.9배 증가하였다. 발효액(120시간)의 당함량은 영지추출물 첨가량 순으로 낮았으나 pH 는 높았다. 발효 과정 중 총 alcohol 생성량은 영지추출물 첨가구가 모두 대조구보다 많았고 특히 고급 alcohol의 생성량은 120시간 발효후 1.0%구가 대조구에 비하여 약 1.8배 증가 하였다.
영지(Ganoderma lucidum) 열수추출물이 지질생성효모(Rhodotorula glutinis)의 증식과 지질함량 및 지방산 조성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 영지추출물을 각각 0 ($S_0$), 0.1 ($S_1$), 0.01 ($S_2$) 및 1.0% ($S_3$)되게 첨가한 기본배지에 R. glutinis를 접종하여 $30^{\circ}C$에서 8일간 진탕배양하면서 그 효모의 생육도, 당 소비량의 변화, 지질함량 및 지방산 조성을 조사하였다. 영지추출물의 첨가량이 증가할수록 균체증식은 증가하였으며, 배양 8일에는 $S_1,\;S_2$ 및 $S_3$구가 $S_0$구보다 각각 1.5배, 1.6배, 및 2.1배로 증가하였으며 8일 후 당 소비율은 감소하는 경향이 있었다. 균체지질함량은 영지추출물의 농도가 증가함에 따라 40% ($S_0$)에서 41.5% ($S_1$), 43.7%($S_2$) 및 46.7% ($S_3$)로 증가하였고 균체 지방산은 myristic, palmitic, stearic, oleic, linoleic acid 등이였으며 불포화지방산의 함량(38.6 mg/g)이 포화지방산의 함량(22.3 mg/g)보다 많았다. 영지추출물의 농도가 증가함에 따라 각 처리구의 균체 지방산함량은 myristic acid를 제외한 모든 산이 증가하였는데, 그 중 $S_2$에서 가장 많았으며, $S_3$구에서는 $S_1$구보다도 감소한 반면, myristic acid는 $S_3$에서 가장 높게 나타났다.
Ponciri fructus, the unripe fruits of Poncirus trifoliata, are widely used in oriental traditional medicine as a remedy for inflammation, gastritis, emesis, digestive ulcers, allergy, and dysentery. To study the anti-wrinkle effects of Ponciri fructus extract (PFE) containing flavanone glycosides, PFE was fermented with Ganoderma lucidum mycelia and its biological activities were investigated. In Ponciri fructus extracts fermented with G. lucidum (G-PFE), polyphenol content was $1,021.00{\pm}0.50{\mu}g/mL$ and flavonoid content was $589.41{\pm}0.21{\mu}g/mL$. G-PFE was found to scavenge 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radicals and superoxide anion radical by a dose dependent manner, respectively. G-PFE showed higher antioxidant activity than that of PFE. In addition, the photoprotective properties of G-PFE was tested in human dermal fibroblasts (HDF) exposed to UVA radiation. G-PFE inhibited the activity of matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) and showed a dose dependent decrease in the expression level of MMP-1. G-PFE also increased collagen biosynthesis in HDF. These results demonstrate that G-PFE could be useful as a potential cosmetic ingredient for anti-wrinkle.
Wan-Mohtar, Wan Abd Al Qadr Imad;Young, Louise;Abbott, Grainne M.;Clements, Carol;Harvey, Linda M.;McNeil, Brian
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제26권6호
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pp.999-1010
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2016
Ganoderma lucidum BCCM 31549 has a long established role for its therapeutic activities. In this context, much interest has focused on the possible functions of the (1,3)-β-D-glucan (G) produced by these cultures in a stirred-tank bioreactor and extracted from their underutilized mycelium. In the existing study, we report on the systematic production of G, and its sulfated derivative (GS). The aim of this study was to investigate G and its GS from G. lucidum in terms of their antibacterial properties and cytotoxicity spectrum against human prostate cells (PN2TA) and human caucasian histiocytic lymphoma cells (U937). 1H NMR for both G and GS compounds showed β-glycosidic linkages and structural similarities when compared with two standards (laminarin and fucoidan). The existence of characteristic absorptions at 1,170 and 867 cm-1 in the FTIR (Fourier Transform Infrared Spectroscopy) for GS demonstrated the successful sulfation of G. Only GS exhibited antimicrobial activity against a varied range of test bacteria of relevance to foodstuffs and human health. Moreover, both G and GS did not show any cytotoxic effects on PN2TA cells, thus helping demonstrate the safety of these polymers. Moreover, GS showed 40% antiproliferation against cancerous U937 cells at the low concentration (60 μg/ ml) applied in this study compared with G (10%). Together, this demonstrates that sulfation clearly improved the solubility and therapeutic activities of G. The water-soluble GS demonstrates the potential multifunctional effects of these materials in foodstuffs.
For the screening and the development of the new bio-material, cultural conditions for the exo-biopolymer (EBP) production throught the submerged cultivation of Ganoderma lucidum mycelium were investigated. Also, the fractionations and the purifications of the exo-biopolymer were carried out and the chemical compositions of the exo-biopolymer were examined. The optimal culture conditions for the exo-biopolymer production were pH 5.0, 30$^{\circ}C$ and 100 rpm of agitation speed in the medium containing of 5% (w/v) glucose, 0.5%(w/v) yeast extract, 0.1% (w/v) ($(NH_4)_2HPO_4$, and 0.05% (w/v) $KH_2PO_4$. In the flask cultivation for 7 days under these conditions, the concentration of the maximum exo-biopolymer and the cell mass were 15.4g/l and 18.8g/l, respectively. The specific growth rate was 0.039 $hr^{-1}$. In addition, the substrate consumption rate, and the exo-biopolymer production rate were 0.043$gg^{-1}$$hr^{-1}$ and 0.025$gg^{-1}$$hr^{-1}$, respectively. The exo-biopolymer was fractionated into BWS (water soluble exo-biopolymer) and BWI (water insoluble exo-biopolymer) by the water extraction, and the sugar contents of two fractions were higher than 97% (based on dry basis). The components sugar of BWS and BWI fractions were glucose, galactose, mannose, xylose, and fucose. Their molar ratios were 3.6:1.5:2.1:0.5: trace and 2.9:3.1:2.0:1.6:0.3, respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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