야생형(野生型)인 만가닥버섯(Lyophyllum ulmarium ASI 8007)의 원형질체(原形質體)로부터 분리(分離)한 염색체(染色體)를 영양요구주(營養要求株)인 잔나비걸상버섯(Ganoderma applanatum ASI 7-18; cys met)의 원형질체내(原形質體內)에 $PEG+CaCl_2$로 섭입(攝入)하였다. 형질전환주(形質轉煥株)는 microtransgenome과 macrotransgenome type으로 전자(前者)는 느리고 불안정성(不安定性)인 균사생장(菌絲生長), 후자(後者)는 아주 빠른 안정성(安定性)인 균사생장(菌絲生長)이 있으며, 균사(菌絲)가 양친(兩親)보다 굵었으며 GCM+benomyl에서 균총분리(菌叢分離)가 일어났다. 이들을 전기영동으로 esterase 동위효소(同位酵素) 패턴을 조사한 결과 양친에 비하여 위치가 다르게 나타났다.
젖산탈수소효소(EC 1.1.1.27, lactate dehydrogenase, LDH) inhibitor는 햄스터와 소 골격근 미토콘드리아에서 분리하였다. 햄스터 골격근조직의 LDH inhibitor는 175 mM NaCl과 초음파로 분리하였다. 소 골격근조직의 미토콘드리아에서 분리된 inhibitor는 열에 강한 특성을 보였고, $A_4$ 동위효소에 대한 저해정도가 높았으며, 분자량은 22,000 kDa으로 나타났다. Inhibitor는 심장조직을 제외한 골격근, 신장 및 간 조직의 미토콘드리아에서 LDH 결합 시 중요하게 관여하고 있었다.
Changes of peroxidase activity, polyamine content and ethylene production during somatic embryogenesis in suspension-cultured carrot (Daucus carota L.) cells were investigated. As compared with nonembyrogenic cells and their medium, embryogenic cells and their medium were characterized by higher levels of peroxidase at all times of culture period. Peroxidase in embryogenic cells showed higher oxidation activity of IAA than in nonembryogenic cells at the torpedo stage, but the IAA oxidation activity of peroxidase released into embryogenic medium was lower than that of peroxidase released into nonembryogenic medium. Peroxidase patterns of embryogenic and nonembryogenic cells showed three cathodic bands, and one anodic band, while peroxidase patterns released into embryogenic and nonembryogenic media did not show any anodic bands and the isoelectric points of cathodic peroxidase were pH 7.7, 7.5 and 6.6. Compared with nonembryogenic cells, polyamine content in embryogenic cells was increased by 15% at the torpedo stage, but polyamine ratio was constant, and ethylene production was extremely low at all times of culture period. Therefore, it is suggested that the peroxidase in embryogenic cells is correlated with embryogenesis by regulating hormone ratios through IAA oxidation, while the peroxidase isozyme patterns may be used as a biochemical marker of embryogenesis. The increase of polyamine content and the decrease of ethylene production suggest an interaction between polyamine and ethlyene during embryogenesis.
야생형(野生形)인 만가닥버섯 Lyophyllum ulmarium(=Hypsizigus marmoreus) ASI 8007에서 분리한 분열자(分裂子)와 잔나비걸상버섯 영양요구주 Ganoderma applanatum ASI 7-18 (cys met)의 원형질체(原形質體)를 polyethylene glycol로 융합(融合)하여 융합주를 얻었다. 융합주는 GCM(Ganoderma complete modium)에서 양친균총이 혼합된 형태였으나 3회 계대 배양되면서 만가닥버섯 균총으로 변하여 균사에는 클램프연결체와 분열자를 지녔고, 만가닥과 거의 유사한 자실체를 형성하였다. 균사체로 esterase 동위효소(同位酵素)를 분석하였는데 만가닥이 1개 밴드, 잔나비걸상이 2개의 밴드를 가진데 비하여 융합주는 양친의 3개와 새로운 2개의 밴드를 나타내었다. 이들 융합주 상호간에는 균총형태, 생장속도, esterase 동위효소, 자실체 특성에 있어서 거의 차이가 없어 아주 안정되게 양친의 유전물질을 보유하였다.
한국산 부산입술대고둥의 지역 집단간에 있어 유전적 변이, 종내 유연관계를 밝히기 위하여 애월, 세화, 삼척, 통도사, 거문도 및 여수 지역에서 채집한 총 180개체를 대상으로 전기영동을 실시하였고 여기서 나타난 16개의 유전자를 분석하였다. 각 집단의 유전전 변이 정도를 조사한 결과 전 집단의 평균 대립인자 수 (A)는 1.528이고, 평균 다형형의 빈도(P)는 45.5%이며, 평균이형접합자(H$_{D}$)는 0.205로 나타났다. 이중 삼척집단의 대립인자 수는 1.46으로 가장 낮고, 애월집단의 다형형의 빈도는 28.58%, 통도사의집단은 57.14%로 가장 낮은 빈도를 나타냈다. 각 집단간 유전적 유연관계를 분석한 결과 6개 집단간의 평균 유전적 근연치는 S=0.716이었고, 애월과 삼척집단은 0.903으로 가장 가까운 유전적 유연관계를 4보여주고 있다. 여수집단과 삼척집단의 유전적 유연관계는 0.562로 가장 낮은 값을 나타냈다. Nei의 공식에 따라 각 집단의 유전적 차이치(D)를 계산한 결과 평균D값은 0.267이며, 이중 애월과 삼척집단이 0.067로 가장 가깝게 나타났고 이는 Roger에 의한 유전적 근연관계와 유사한 양상을 보였다.
Misidentification of cultured cell lines results in the generation of erroneous scientific data. Hence, it is very important to identify and eliminate cell lines with a different origin from that being claimed. Various methods, such as karyotyping and isozyme analysis, can be used to detect inter-species misidentification. However, these methods have proved of little value for identifying intra-species misidentification, and it will only be through the development and application of molecular biological approaches that this will become practical. Recently, the profiling of microsatellite variants has been validated as a means of detecting gene polymorphisms and has proved to be a simple and reliable method for identifying individual cell lines. Currently, the human cell lines provided by cell banks around the world are routinely authenticated by microsatellite polymorphism profiling. Unfortunately, this practice has not been widely adopted for mouse cells lines. Here we show that the profiling of microsatellite variants can be also applied to distinguish the commonly used mouse inbred strains and to determine the strain of origin of cultured cell lines. We found that approximately 4.2% of mouse cell lines have been misidentified; this is a similar rate of misidentification as detected in human cell lines. Although this approach cannot detect intra-strain misidentification, the profiling of microsatellite variants should be routinely carried out for all mouse cell lines to eliminate inter-strain misidentification.
Two human liver UDP-glucuronosyltransferase cDNA clones, HLUG25 and UDPGTh2 were previously shown to encode isozymes active in the glucuronidation of hyodeoxycholic acid (HDCA) and certain estrogen derivatives (e.g., estriol and 3,4-catechol estrogens), respectively. in this study we have found that the UDPGTh2-encoded isoform (UDPGTh2) and HLUG25-encoded isoform (UDPGThl) have parallel aglycone specificities. When expressed in COS 1 cells, each isoform metabolized three types of dihydroxy- or trihydroxy-substituted ring structures, including the 3,4-catechol estrogen (4-hydroxyestrone), estriol, 17-epiestriol, and HDCA, but the UDPGTh2 isozyme was 100-fold more efficient than UDPGTh1. UDPGTh1 and UDPGTh2 were 86% identical overall (76 differences out of 528 amino acids), including 55 differences in the first 300 amino acids of the amino terminus, a domain which conferred the substrate specificity. The data indicated that a high level of conservation in the amino terminus was not required for the preservation of substrate selectivity. Analysis of glucuronidation activity encoded by UDPGTh1/UDPGTh2 chimeric cDNA constructed at their common restriction sites, Sac I (codon 297), Nco I (codon 385), and Hha I (codon 469), showed that nine amino acids between residues 385 and 469 were important for catalytic efficiency, suggesting that this region represented a domain which was critical for the catalysis but distinct from that responsible for aglycone-selection. These data indicate that UDPGTh2 is a primary isoform responsible for the detoxification of the bile salt intermediate as well as the active estrogen intermediates.
Rhizoctonia solani의 균사융합군(AG) 중에서 생장속도가 빠른 AG-1과 AG-4는 가장 많은 원형질체를 형성하였으며 속도가 느린 AG-3은 저조하였고 중간인 AG-2와 AG-5는 또한 중간이었다. 균핵의 형성은 AG에 따라 차이가 있었다. Cellulase "onozuka" R-l0, macerozyme R-10, ${\beta}-glucuronidase$의 효소 복합액에서 가장 많은 원형질체를 형성하였다. 5개 융합군은 30시간 배양한 3g의 균사를 0.6 M mannitol이 첨가된 효소 복합액에 $32^{\circ}C$에서 3-4시간 처리하면 가장 많은 원형질체를 형성하였다. 균핵을 형성하는 AG-1을 열처리로 불활성화시킨 후 균핵을 형성하지 않는 AG-5의 원형질체를 PEG와 ${Ca}^{2+}$로 융합시켰다. 재생배지상에서의 균총의 특징과 균핵의 형성에 의해 7 개의 원형질 융합체를 선발하고 esterase 동위효소의 zymogram 및 AG-1 과 융합체인 F150l 사이에서 일어나는 killing reaction으로 확인하였다.
This research was conducted to get the basic materials necessary to obtain the somatic hybrid plant between Solanum sisymbriifolium and other Solanum species (S. integrifolium and S. toxicarium). Regarding the formation of colony from the protoplast in S. sisymbriifolium, S. integrifolium and the fused protoplast mixture; for the S. sisymbriifolium, a colony was observed in F medium(Kao medium containing $5.0mg{\cdot}L^{-1}\;NAA,\;1.0mg{\cdot}L^{-1}$ 2,4-D and $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ BA); and for the S. integrifolium, in G medium (a half strength MS medium containing 0.03 M sucrose, 0.4 M mannitol, $1.0mg{\cdot}L^{-1}\;NAA,\;1.0mg{\cdot}L^{-1}$ kinetin) respectively. In mixed cultured protoplast after electriofusion treatment, the cell division and colony formation were observed in both media F and G. For the shoot and root formation rate, there was no difference between the parent of each breed and mixed protoplast regardless of the medium. In the fused protoplast mixture of S. sisymbriifolium and S. toxicarium, a colony formation was also observed in both media F and H(a half strength MS medium containing 0.03 M sucrose, 0.4 M mannitol, $1.0mg{\cdot}L^{-1}\;NAA,\;1.0mg{\cdot}L^{-1}$ kinetin); and there was no difference in the shoot and root formation rate between the parent and the mixed protoplast.
한국산 초파리(Drosophila melanogaster)의 starch gel 영동상을 조사하기 위하여 춘천, 진주, 신촌(서울), 대전의 초파리 4계통을 starch gel media를 사용하여 벤드의 분포, 염색강도 및 이동도를 비교 검토한 결과는 다음과 같다. 1) 춘천, 진주, 신촌(서울)의 3계통은 벤드의 수와 분포, 염색강도, 이동도가 다 같이 심한 변이를 나타내고 있는데 반하여 대전계통은 변이가 거의 없다. 2) 이러한 전기영동상의 차이는 대전 계통의 초파리 집단이 ADH구성에 관하여 동질적(homogeneous)이고 다른 3계통의 집단은 이질적(heterogeneous)이라는 것을 암시하고 있다. 3) 전기영동상이 4계통의 초파리에서 다 같이 암$\\cdot$수에 따라 차이를 보이고 있는데 이것은 설명하기 매우 어려운 문제로서 장차 분석 검토할 필요가 있다고 본다. 4) Starch gel media가 cellulose acetate media보다 해상력이 월등하다는 것이 재확인 되고 있다. 5) Agar gel이나 acrylamide gel 같은 다른 영동 media를 써서 ADH의 전기영동 실험을 하여 starch gel media를 사용한 본 실험의 결과와 비교하는 것과 ADH에 관한 유전적 분석이 시급히 요구되는 앞으로의 과제이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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