$estradiol-17\beta$${E_2}$에 노출된 미성숙 조피볼락의 혈장 내 vitellogenin (VTG), alkaline-labile protein phosphorus (ALPP), calcium (Ca), glutamate pyruvate transaminase (GPT) 및 hepatosomatic index (HSI)의 일시적인 변화가 조사되었다. 70% 에탄올에 녹여진 ${E_2}$ (5 mg/kg B.W.)를 조피볼락 치어의 복강에 주사한 후 0, 1, 3, 6, 9, 12 및 15일에 혈장이 수집되었다. 전기 영동상에서 주사 후, 3일째 약 170 kDa의 위치에 염색성을 나타내는 VTG 밴드가 검출되었다. 밴드의 염색성은 6일째 더욱 강하게 나타났지만, 시간의 경과와 더불어 흐려져 15일째에는 노출 전 처럼 VTG 밴드가 관찰되지 않았다. 혈장 내 ALPP와 Ca는 1일째부터 급격히 증가했으며 VTG 변동과 유사하게 6일째 가장 높은 농도를 나타낸 후, 시간의 경과와 더불어 점점 감소해 15일째는 노출 전과 유사한 값을 나타내었다. GPT는 투여 1일부터 급격히 증가해 3일에 최고치를 나타낸 이후 시간의 경과와 더불어 감소하는 경향을 나타냈으며 HSI의 경우도 1일째부터 증가해 3일째에 가장 높은 수치를 나타낸 후, 점점 감소해 ${E_2}$ 투여전과 유사한 수치를 나타내었다. 이들 결과로 E2에 노출 된 이후 조피볼락의 혈장 내 ALPP, Ca, GPT 및 HSI는 혈장 VTG와 유사한 증․감을 나타내는 것을 알 수 있었다. 따라서, ALPP, Ca, GPT 및 HSI는 VTG와 더불어 연안 생태계 내에서 외인성 ${E_2}$ 노출에 대한 생물학적 지표로서 사용 가능할 것으로 판단되어진다.
본 연구에서는 홍삼, 호로파, 민들레, 백수오, 남가새, 녹각상, 토복령, 호로파, 야관문 등의 8개 한약재의 에스트로겐 유사활성을 파악하고자 하였다. 이를 위하여 한약재의 열수- 및 에탄올-추출물을 제조하였고 in vitro 전사 활성 시험법을 이용하여 에스트로겐 유사활성을 검증하였다. 에탄올추출물에서는 홍삼, 백수오, 호로파, 야관문, 민들레가 에스트로겐 유사활성을 나타냈고, 열수출출물에서는 홍삼, 호로파, 백수오가 에스트로겐 유사활성을 나타냈다. 홍삼추출물은 $500{\mu}g/ml$의 농도에서의 활성은 열수추출물과 에탄올추출물 모두 $10^{-8}M$$17{\beta}$-estradiol의 활성보다 높은 활성을 보였고, 홍삼 에탄올추출물 $50{\mu}g/ml$과 백수오 에탄올추출물 $500{\mu}g/ml$에서의 활성은 $10^{-9}$와 $10^{-8}M$$17{\beta}$-estradiol에서의 활성 사이의 활성을 보였다. 이 연구를 통해 홍삼, 백수오, 호로파, 민들레 등을 이용한 식물성 여성호르몬 유사물질을 함유하는 기능성소재의 개발에도 기여할 수 있을 것이며 천연물 유래 여성호르몬 유사물질의 대량 탐색 등이 가능할 것이다.
범가자미의 인위적인 번식제어를 목적으로 생식소 활성에 따른 혈중 vitellogenin (난황단백전구체)과 성 스테로이드 호르몬의 계절적 농도 변화를 조사하였다. 암컷에 있어서 혈중 vitellogenin의 농도는 난황축적이 활발한 11 월에 연중 최고치를 나타내다가 산란이 시작되는 12월에 감소하기 시작하면서 estradiol의 농도는 이 시기에 연중 최고치를 나타내었다(2.7ng/ml). 산란이 활발히 진행중인 1월에 혈중 estradiol 농도는 급격히 감소하여 5월까지 연중 매우 낮은 농도(0.2ng/ml)로 유지되었다. Testosterone도 estradiol과 유사한 경향을 보였다. 17$\alpha$-hydroxyprogesterone은 난소가 활성화되어 성장되는 시기를 제외하고는 뚜렷한 경향을 보이지 않았다. 수컷의 경우 testosterone과 11-ketotestosterone의 혈중농도는 12월에 최고치를 나타내었으며, 이 시기에 정자변태가 가장 활발하게 이루어지고 있음을 관찰하였다. 이후 완숙 및 방정기 (1월)에 이르러 이들의 농도는 급격히 감소하였다.
Vitellogenin (VTG) and VTG mRNA induction by $estradiol-17\beta\;(E_2)$ were examined in the primary cultures of hepatocyte in the rainbow trout. Hepatocytes were precultured for 2 days, then $E_2$ was added and cultured for another 5 days. Media and hepatocytes were then analyzed by electrophoresis and Northern blotting for VTG and VTG mRNA, respectively. The hepatocytes were formed a few aggregates within 5 days without further spreading to a monolayer. Cell viability and high DNA content were maintained during the incubation. The hepatocyte culture with E2 induced a weak VTG band at a molecular weight of 175kDa on Day 2 after $E_2$ addition. The relative amount of VTG was expressed in percentage of total protein concentrations. VTG was gradually increased as $1.9\%$ on Day 2, $6.3\%$ on Day 4 and $7.3\%$ on Day 5. VTG mRNA band was detected at about 6.6 kb in the culture with $E_2$ at day 1 of culture. The level of VTG mRNA expression linearly increased with time until Day 5 (r=0.97).
Effects of pituitary and thyroid hormones on estradiol-induced vitellogenin (VTG) induction were electrophoretically examined in primary hepatocyte cultures of rainbow trout. Hepatocytes were precultured for 2 days and then estradiol-17 $\beta$$(E_2,\;2 \times 10^{-6}M)$>, triiodothyronine $(T_3,\;10^{-8}-10^{-6}M)$, bovine growth hormone (bGH, 10-100 ng/ml), ovine prolactin (oPRL, 100-500 ng/ml), and pituitary extract (PE) of rainbow trout (0.75PE/dish) were added to the incubation medium. The hepatocytes were cultured for 7 more days. The addition of oPRL to the incubation medium was not effective in increasing VTG production at any concentrations. The addition of PE to the incubation medium with $E_2$ was not effective in increasing VTG production. The addition of bGH to the incubation medium with $E_2$ was not effective in increasing the rate of VTG production at concentrations of 10-50 ng/ml. However, a higher concentration of bGH, 100 ng/ml, increased VTG production. The various concentrations of $T_3$ were ineffective in stimulating VTG production. These results suggest that GH could be one of stimulus factors for VTG production in rainbow trout.
Thin layer, paper and column chromatography were compared for the separation, detection and quantitation of three kinds of estrogen in urine of dairy cows. While thin layer chromatography utilizing silica gel was better for the detection of estrogens, column chromatography using celite 545 was preferable. Spectrophotometry was compared with fluorometry for determination of estrone, estradiol-17 ${\beta}$ and estriol eluted by paper chromatography and column chromatography. Optical density of three standard estrogens showed almost same curve at maximum absorption wave length of 230 and $282m{\mu}$. However, the former showed a higher peak. In fluorometry, the fluorescence intensity of estrone and estradiol-17 ${\beta}$ were rather strong, when the estrogens were dissolved in sulfuric acid, and showed higher sensitivity than that of the spectrophotometry. However, in the case of estriol was exceptional.
한국응용약물학회 2003년도 Annual Meeting of KSAP : International Symposium on Pharmaceutical and Biomedical Sciences on Obesity
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pp.114-114
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2003
Ginseng is a medicinal herb widely used in Asian countries, and its pharmacological effects has been demonstrated in various systems such as cardiovascular, central nervous, and endocrine systems. Its effects are mainly attributed to the ginsenosides. We hypothesize that a component of Panax ginseng, ginsenoside-Rbl, acts by binding to estrogen receptor. We have investigated the estrogenic activity of ginsenoside-Rbl in a transient transfection system using estrogen receptors ${\alpha}$ or ${\beta}$ with estrogen -responsive luciferase plasmids in COS monkey kidney cells. Ginsenoside-Rbl activated both estrogen receptors ${\alpha}$ and ${\beta}$ in a dose-dependent manner (0.5 -100 M ). Activation was inhibited by the specific estrogen receptor antagonist ICI 182,780, indicating that the estrogenic effect of ginsenoside-Rbl is estrogen receptor dependent. Next, we evaluated the ability of ginsenoside-Rbl to induce estrogen-responsive progesterone receptor gene by semi-quantitative RT-PCR assays. MCF-7 cells treated with l7${\beta}$-estradiol or ginsenoside- Rb1 exhibited an increased expression of progesterone receptor mRNA. However, ginsenoside-Rbl failed to displace the specific binding of [3H]17${\beta}$-estradiol to estrogen receptor in MCF-7 cells as examined by whole cell ligand binding assays, suggesting that there is no direct interaction of ginsenoside-Rbl with estrogen receptor. Our results indicate that estrogen-like activity of ginsenoside-Rbl is independent of direct estrogen receptor association.
This study aimed to investigate changes in the activity and mRNA expression of plasminogen activators (PAs) induced by $17{\beta}$-estradiol ($E_2$), human chorionic gonadotropin (hCG), and interleukin-$1{\beta}$ ($IL-1{\beta}$) in porcine endometrial cells. Endometrial cells were isolated from the epithelium and cultured to 80% confluence. They were then treated for 24 h with $E_2$ (0.2, 2, 20, and 200 ng/mL), $IL-1{\beta}$ (0.1, 1, 10, and 100 ng/mL), and hCG (0.5, 1, 1.5 and 2 IU/mL). mRNA expressions of urokinase-type (uPA) and tissue-type (tPA) PAs were analyzed using reverse transcription PCR, and activities were measured using a PA activity assay. mRNA expressions of uPA and tPA increased with $E_2$ treatment; however, this was not significant. Similarly, treatment with hCG did not influence the mRNA expressions of PAs. Interestingly, treatment with 0.1 ng/mL $IL-1{\beta}$ significantly reduced the mRNA expression of uPA, but did not affect that of tPA. Treatment with 2, 20, and 200 ng/mL $E_2$ increased PA activity compared with the control group; treatment with 0.1 and 1 ng/mL $IL-1{\beta}$ significantly increased PA activity compared with the other $IL-1{\beta}$ treatment groups, whereas treatment with 10 and 100 ng/mL $IL-1{\beta}$ decreased. Treatment with 2 IU/mL hCG increased PA activity compared with the other treatment groups, although there were no significant differences between the hCG and control groups. In conclusion, the activity and mRNA expression of PAs were differently regulated by the hormone/cytokine and its concentration in porcine endometrial cells. Therefore, understanding PA regulatory mechanisms may help to improve the reproductive potential of domestic animals.
본 연구에서는 해산어를 이용하여 bisphenol A(BPA)와 nonylphenol(NP)이 난모세포 성숙 과정에 어떤 영향을 미치는지 조사하기 위해 성숙단계에 있는 노래미(Hexagrammos agrammus) 난모세포(난경 약 1.88 mm)를 대상으로 in vitro에서 BPA와 NP 처리에 의한 난모세포의 성스테로이드 생성농도를 조사하였다. 난모세포에 BPA와 NP를 농도구별(0.1, 1, 10, 100, 1,000 ng/$m{\ell}$)로 첨가하고, 50 IU의 human chorionic gonadotropin(HCG)를 농도구별 BPA 또는 NP와 함께 첨가하거나 하지 않고 48시간 동안 배양하였다. 배양 후 배양액 내의 $17{\alpha},20{\beta}$-dihydroxy-4-pregnen-3-one($17{\alpha}20{\beta}OHP$), estradiol-$17{\beta}(E_2)$ 그리고 testosterone(T)의 농도를 방사면역측정법(RIA)을 통해 정량하였다. BPA 처리구에서는 100 ng/$m{\ell}$의 농도구에서 HCG 처리 유무에 상관없이 $E_2$ 생성이 촉진되었다. HCG 처리하에서 0.1 ng/㎖의 농도구에서 T 생성은 촉진 되었으나, HCG를 처리하지 않은 실험구의 모든 농도구에서 T 생성은 저해되었다. NP 처리구에서는 HCG를 처리하지 않은 실험구의 10 ng/$m{\ell}$의 농도구에서 $17{\alpha}20{\beta}OHP$와 T 생성이 촉진되었고, 1 ng/$m{\ell}$의 농도구에서는 $E_2$ 생성이 억제되었다. 이상의 결과를 종합하면, 노래미의 성숙단계의 난모세포에서 BPA는 약한 estrogen-agonistic 효과를, NP는 estrogenantagonistic 효과를 지니는 것으로 사료된다.
Morphological changes of the oviductal epithelium of the rat treated with hormones ($17{\beta}$-estradiol ${\mu}g$/day and progesterone 2.5mg/day) for ten days were observed transmission and scanning electron microscopically. The results obtained were as follows: 1. The cilia formation of ciliary cell(CC) was more accelerated by the treatment of estradiol than progesterone, but the balance of estrogen and progesterone was required for the maintenance of CC. The effect of hormone was different between the segments for the maintenance of CC. 2. The short secretory cell(SSC) was severely inhibited in the formation of secretory granules with single hormonal treatment but the activity of secretion was more inhibited by progesterone than by estradiol. 3. The long secretory cell(LSC) had not a great difference between estradiol and progesterone treatments as compared with the normal sexual cycle, but the formation of secretory granules was somewhat accelerated by progesterone treatment. 4. The formation of secretory granules of junctional cell (JC) was severely accelerated by estradiol treatment as compared with the normal sexual cycle. The formation of secretory granules during progesterone treatment, on the other hand, was inhibited completely, but the numbers of pinocytotic vesicles appeared at the cytoplasmic apical portion. 5. Three types of secretory cells, SSC, LSC and JC, on the rat oviductal epithelium could be suggested to have different cell tapes respectively from the morphological changes by hormone treatment.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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