• 한국식품과학회지
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• 제27권5호
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• pp.762-767
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• 1995

한국산 두류 중의 ${\alpha}-Amylase$ 저해물질의 이화학적 특성에 관한 기초자료를 얻기 위하여 검정콩으로부터 ${\alpha}-Amylase$ 저해물질을 분리, 정제하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 검정콩 ${\alpha}-Amylase$ 저해물질도 SDS-PAGE상에서 단일밴드를 확인하였고, capillary electrophoresis에서 순도를 확인하였으며, 정제된 저해물질의 비활성도는 544.0 units/mg, 정제도는 약 18배였으며, SDS-PAGE 상에서 분자량은 25 KD이였다. 검정콩 ${\alpha}-Amylase$ 저해물질의 주요 아미노산은 glutamic acid, aspartic acid 및 lysine 순이었다. 정색반응 결과 검정콩 ${\alpha}-Amylase$ 저해물질은 당단백질로 추정되었으며, 탄수화물 함량은 3.2%로 나타났다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제6권3호
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• pp.127-131
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• 1991

보리와 밀 맥아의 ${\alpha}-amylase$와${\beta}-amylase$의 대한 찹쌀과 멥쌀 전분에 대한 반응속도론적 연구를 수행하였다. 보리와 밀의 발아 과정에서 ATP 함량은 발아 2일 후에 급격하게 증가하여 5일 후에는 감소하였으며, 건조 중량은 3일 후부터 감소하였다. 보리맥아와 밀 맥아의 ${\alpha}-amylase$와$\;{\beta}-amylase$ 모두 6일째에 최대의 활성을 나타내었다. ${\alpha}-amylase$의 경우, 보리맥아에 존재하는 ${\alpha}-amylase$가 멥쌀 전분에서 친화력이 크게 나타났으며, $V_{max}$값은 보리 맥아의 경우 멥쌀 전분에서 밀 맥아의 경우 멥쌀과 찹쌀 전분에서 높게 나타났다. ${\beta}-amylase$의 경우는 보리 맥아의 효소가 찹쌀 전분에 대해 친화력이 크게 나타났으며, $V_{max}$값은 밀 맥아의 효소가 찹쌀 전분에서 높게 나타났다. 또한 기질 효율성은 보리 맥아에서 추출한 ${\beta}-amylase$가 멥쌀 전분에서 가장 우수하였다.

• Journal of Plant Biology
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• 제34권2호
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• pp.159-163
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• 1991

합성 식물생장조절제인 dimethipin의 작용기작을 밝히고자 보리 무배부 종자 시스템에서 gibberellic acid(GA3)에 의해 유도되는 ${\alpha}-amylase$ 활성에 미치는 dimethipin의 영향을 조사하였다. Dimethipin은 mRNA와 단백질 함량 및 GA3에 의해 유도되는 ${\alpha}-amylase$ 활성을 뚜렷하게 억제하였다. 그러나 억제효과는 GA3 처리 후 dimethipin 첨가시간 간격이 커질수록 점점 감소하였다. Dimethipin을 GA3 처리후 18시간 이내에 첨가하였을 때 mRNA 함량증가를 억제하였다: 그러나 GA3 처리 18시간 경과 후에 첨가하였을 경우에도 수용성 단백질 함량 및 ${\alpha}-amylase$ 활성 증가를 억제하였다. 이러한 결과로 미루어보아 dimethipin은 mRNA 합성과 ${\alpha}-amylase$ 단백질 합성을 공히 억제하는 것으로 사료된다.

• 미생물학회지
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• 제32권4호
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• pp.271-279
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• 1994

${\alpha}$-Amylase와 glucoamylase를 동시에 안정하게 분비하여 전분을 일단계로 직접 에탄올로 발효시킬수 있는 효모 균주를 개발하기 위하여 glucoamylase를 분비하는 Saccharomyces diastaticus hybrid 균주에 쥐의 침샘 유래의 ${\alpha}$-amylase cDNA 유전자를 plasmid vector를 이용하여 도입하였다. 이 균주로부터 효소생산에 필요한 유전자를 잃어버림이 없이 안정하게 분비할 수 있도록 하기 위하여 $\alpha$-amylase 유전자를 효모의 염색체에 삽입시키기 위한 integrating plasmid vector인 YIpMS$\Delta$R(LEU2)를 제작하였다. 이 vector의 효모형질전환에 있어 원형(circular)상태와 제한 효소 XbaI으로 처리된 직선화된(linearized) 상태의 두가지 형태를 비교한 결과 형질전환 효율에서나 형질전환체내의 $\alpha$-amylase 유전자 보유정도가 모두 직선화된 형태의 경우가 원형상태의 경우보다 높았다. Linearized vecotr를 가진 효모 형질전환체에서의 유전자 발현 안정도는 세포분열을 거듭할수록 episomal vecotr에 의한 효모 형질전환체에서의 발현 안정도보다 우수하게 나타났다. 또한 이 linearized vector를 가진 형질전환체는 $\alpha$-amylase와 glucoamylase를 동시에 분비하여 glucoamylase만 분비하는 원균주보다 2배 이상의 전분분해력을 보였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제2권3호
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• pp.166-173
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• 1992

The expression of Bacillus subtilis $\alpha$-amylase from the phoA-amyE fusion gene in recombinant E. coli was investigated under various environmental conditions. The overexpression of cloned $\alpha$-amylase caused retardations in cell growth and synthesis of alkaline phosphatase (AP) from the chromosomal phoA gene. The change of culture temperature from $37^\circ{C}$ to $30^\circ{C}$ increased the specific activities of both $\alpha$-amylase and $\beta$-lactamase by six and two times, respectively, whereas the AP activity remained unchanged. The experiments with chlorampenicol (a translation inhibitor) suggested the enhancement of $\alpha$-amylase activity at $30^\circ{C}$, and this was partly due to the stability of $\alpha$-amylase itself. The further decrease of the temperature to $25^\circ{C}$ slowed down both the cell growth and cloned-gene expression rate. The $\alpha$-amylase activity showed a maximum at pH of 7.4 while alkaline phosphatase was most effectively produced at pH of 8.3.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제20권3호
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• pp.563-568
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• 2010

The Val289 residue in the $\alpha$-amylase of Bacillus amyloliquefaciens, which is equivalent to the Ala289 and Val286 residues in the $\alpha$-amylases of B. stearothermophilus and B. licheniformis, respectively, was studied by site-directed mutagenesis. This residue was substituted with 10 different amino acids by random substitution of the Val codon. In these mutant $\alpha$-amylases, Val289 was substituted with Ile, Tyr, Phe, Leu, Gly, Pro, Ser, Arg, Glu, and Asp. Compared with the wild-type $\alpha$-amylase, the mutant $\alpha$-amylase Val289Ile showed 20% more hydrolytic activity, whereas Val289Phe and Val289Leu showed 50% lesser activity. On the other hand, the mutant $\alpha$-amylases Val289Gly, Val289Tyr, Val289Ser, and Val289Pro showed less than 15% activity. The substitution of Val289 with Arg, Asp, or Glu resulted in complete loss of the $\alpha$-amylase activity. Interestingly, the mutant $\alpha$-amylase Val289Tyr had acquired a transglycosylation activity, which resulted in the change of product profile of the reaction, giving a longer oligosaccharide.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권4호
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• pp.338-343
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• 1990

Streptomyces sp. DMCJ-49 균주의 배양액으로부터 분리된 $\alpha$-amylase 저해물질 MB4-03은 구조상 질소원자와 methyl기를 포함하는 일종의 직선형 Alpha(1-4) 결합으로 연결된 glucose의 변형된 oligomer 형태로서 구성 단당류는 12 정도로 추정된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권2호
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• pp.155-160
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• 1986

E. coli-Yeast shuttle vector YEp 13에 B. amyloliquefaciens의 $\alpha$-amylase gene을 cloning하여 얻은 hybrid plasnidlasmid를 E. coli를 숙주세포로 하여 형질을 발현시켰다. 형질전환주의 $\alpha$-amylase 활성 측정 결과, B. amyloliquefaciens에 대해 20-30%의 상대 활성도를 나타내었다. 형질전환주의 경우 생성된 $\alpha$-amylase의 60-65%가 periplasm에 축적되었으며 세포 외부로의 분비는 없었다. Hybrid DNA를 agarose-gel 전기영동으로 조사한 결과 그 크기가 다른 다수의 hybrid DNA가 확인되었으며 pHA28의 plasmid (a)(Fig.3)에서만 $\alpha$-amylase 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다 pHA28의 plasmid(a)의 크기가 YEp 13 plasmid DNA보다 작은 것은 YEp13 plasmid에서 yeast gene부분이 deletion된 결과로 추측되었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제31권4호
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• pp.351-355
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• 1988

이조대맥(Hordeum distichum L. emend Lamark)에 적색광을 조사하여 발아일수에 따른 ${\alpha}-amylase$의 활성 및 isozymes에 미치는 적색광의 영향을 조사하였다. ${\alpha}-amylase$는 암소에서 비활성도가 발아 3일과 5일에 각각 355.0, 523.7 $units/mg{\cdot}protein$로 발아일수가 경과함에 따라 증가하였으며, 적색광조사에 의해서 비활성도가 발아 3일과 5일에 각각 암소에 비하여 48%, 15% 정도 증가하였다. CM-cellulose와 Sephacryl S-200에 의해 2종의 isozyme이 분리되었고 그 중 ${\alpha}-amylase$ I이 주 효소였다. ${\alpha}-amylase$ I, II의 활성비율은 암소에서 발아 3일과 5일에 다 같이 95 : 5 정도였으나 적색광조사구에서는 각각 60 : 40, 90 : 10으로 현저한 차이가 있었다. 특히 적색광조사에 의해서발아 3일에 ${\alpha}-amylase$ II의 활성비율이 현저히 높았다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권5호
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• pp.369-373
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• 1988

Bacillus licheniformis ATCC 27811의 염색체 DNA를 분리하며 제한효소인 EcoRI으로 부분절단하고, 동일 효소로 절단한 plasmid pBR322에 ligation 시킨 뒤 E. coli HB 101에 형질전환시켜 alpha-amylase 형질을 보여주는 균주를 선별하였다. 선별된 형질전환체로부터 alpha-amylase를 분리하며, 원 균주인 Bac. licheniformis가 생산하는 alpha-amylase와 pH 및 온도특성을 비교하며 모균주와 같은 성질을 가졌음을 확인하였다. 재조합체 DNA로부터 얻은 Insert는 대략 3.1kb 정도였고, HindIII, ClaI, PstI, SalI Site를 한개씩 가지고 있었다.