Bifidobacterium과 기타 장내 세균을 두유에 배양하여 배양특성을 살펴보았다. 균주들은 다음과 같이 Bifidobacterium longum, Lactobacillus acidophilus, Bacteroides fragilis, Eubacterium limosum, Clostridium perfringens, E. coli.를 사용하였다. 이들중 B. longum만이 높은 활성의 ${\alpha}-galactosidase$를 생산해 두유의 주요 당인 raffinose와 stachyose를 이용하였고 가장 높은 산 생성을 보여주었다. 16시간 배양후에 B. longum은 $1.5{\times}10^{8}\;CFU$에 이르렀다. 또한 B. longum은 ${\alpha}-galactosidase$이외에 ${\alpha}-galactosidase$와 ${\beta}-galactosidase$의 활성도 다른 균주에 비하여 가장 높았다.
We investigated whether ${\beta}$-galactosidase (${\beta}$-gal)-containing Escherichia coli cells could transfer a galactose to 2-phenoxyethanol, resulting in 2-phenoxyethanol galactoside (PE-Gal). PE-Gal was confirmed by liquid chromatography-mass spectrometry. In addition, we also confirmed that a galactose molecule was covalently bonded with PE during thin-layer chromatography analysis of the ${\beta}$-gal hydrolysate of PE-Gal. The yield for PE-Gal synthesis was about 37.5% (weight basis), which was about 7-8 times greater than that of a previous report. In addition, the concentration of ${\beta}$-gal (0.96 U/ml) used in this PE-Gal synthesis was about 20 times less than that in a previous report.
Quantitative ${\beta}$-galactosidase estimation in the intestinal mucosal cells of calves with diarrhea under experimental conditions due to rotavirus were undertaken. A quantitative decrease of 40-70% in ${\beta}$-galactosidase activity was observed in proximal and middle segments of the small intestine of the infected calves, more so in the middle segments. The decrease in the distal part of the intestine, however, was lesser (5 to 30%). The decrease in the activity was more marked on the day 2 to 6 post infection indicating the degree of the damage of the villi of the small intestine.
The effect of red ginseng saponins (total saponins, Rbl- and Rgl- fraction of saponins) on the induction of $\beta$-galactosidase in yeast, hccharomyces cereuisiae, was investigated to see that ginseng saponins would penetrate the cell membrane and have a function in a nucleus as steroid hormones do. To attain such a kind of purpose, a DNA fragment (685bp) containing GALI promoter was inserted into the sites of EcoRl and BamHl of polylinker region, upstream of lace gene of the plasmid YEp356 (7.966 Kb), and thus the resulting plasmid pGALl-lacZ is supposed to express $\beta$- galactosidase only in the presence of galactose. The plasmid pGALl -lacZ was introduced into yeast, Ky106 (a leu2 ura3 his3 trp 1 Iys2), and the growth of the transformed cells was much slower in the presence of galactose than glucose. The effects of saponins on the specific activity of P-galactosidase from transformed yeast cells were detected. No significant increase was observed in case of total saponins, but the Rbl- or Rgl- fraction of saponins gave much higher increase in the activity. Maximum increase was observed as 35% in 10-3% of Rbl and as 75% in 10-1% of Rgl. These data suggest that ginseng saponins might be able to enter the nucleus and stimulate transcription. However, further studies to find out the putative saponin receptor are needed to confirm this possibility. Key words : Red ginseng saponin, $\beta$-galactosidase induction, Saccharomyces cerevisiae.
만난의 분해활성을 갖는 Paenibacillus woosongensis의 배양 상등액으로부터 mannanase, ${\beta}$-mannosidase와 ${\alpha}$-galactosidase 활성이 관찰되었다. 배양상등액 내의 locust bean gum를 분해하는 mannanase는 pH 5.5와 $60^{\circ}C$, para-nitrophenyl-${\beta}$-D-mannopyranoside를 분해하는 ${\beta}$-mannosidase는 pH 6.5, $50^{\circ}C$, para-nitrophenyl-${\alpha}$-D-galactopyranoside를 분해하는 ${\alpha}$-galactosidase는 pH 6.0-6.5와 $50^{\circ}C$에서 각각 최대활성을 보였다. 배양상등액의 만난 분해효소는 mannotriose, mannotetraose, mannopentaose, mannohexaose와 같은 만노올리고당을 분해할 뿐 아니라 mannobiose도 분해하였다. 또한 melibiose, raffinose, stachyose 등의 ${\alpha}$-1,6 결합형 galacto-oligosaccharides를 분해하여 galactose를 생성하였다. 이러한 결과로 보아 P.woosongensis는 galactomannan을 완전히 분해하는데 필요한 3종류 효소를 모두 생산하는 것으로 판단된다.
L. sporogenes가 생산하는 $\beta$-galactosidase의 효소학적 성질을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. ONPG를 기질로 하였을 때 0.05M 인산염 완충용액을 사용하여 pH 7.0과 반응온도 6$0^{\circ}C$에서 가장 높은 효소활성을 나타냈으며 또한 본 효소반응의 activation energy는 50-6$0^{\circ}C$에서 5,800cal/mole 이었다. 효소활성에 미치는 무기염류의 효과는 어느 것도 뚜렷한 첨가효과를 나타내지 않았으나 L-cy-steine 10mM 첨가했을 때 효소활성이 약 6.7배정도 증가됨으로써 본 효소는 sulfhydryl enzyme 특징을 보였다. 한편 lactose와 ONPG에 대한 Michaelis constant는 각각 33.3mM, 1.2mM을 나타냈다. 특히 본 효소는 중성 범위의 pH와 6$0^{\circ}C$에서 30분간 열처리 후에도 약 90%정도의 잔존활성을 나타낼 뿐만 아니라 시유와 10% skim milk 용액에 10units/$m\ell$의 효소를 첨가, 6$0^{\circ}C$에서 1시간 처리 후에 유당 분해 율이 90%, 2units/$m\ell$ 첨가하여 4시간 반응 후에 유당 분해 율이 85%정도 가수분해시킴과 동시에 균체외 효소라는 장점도 아울러 가지고 있어 식품공업에의 그 이용 가능성이 매우 높다고 하겠다.
본 연구는 식물성 에스트로겐인 isoflavone 배당체의 ${\beta}-1,4\;glycoside$ 결합을 ${\beta}-galactosidase$로 분해하여 그 생리적 작용이 더욱 효과적인 aglycone화 하기 위한 조건을 연구하여 기능성식품개발에 응용토록 하는데 목적이 있다. 실험 결과, 모든 ${\beta}-galactosidase$가 ${\beta}-1,4\;glycoside$ 결합의 분해력이 인정되지는 않았으며, 분해 가능성이 인정된 효소를 선택하여 실험한 결과 효소의 함량이 증가함에 따라 aglycone의 성분비율이 증대된 반면, 그 손실률 또한 증대되었고 배양시간이 길수록 aglycone의 성분비율이 증가하였으나 배양초기에 급격한 증가율을 보였으며, pH6과 7, 8에서 유사한 정도의 증가율을 보였고, 온도가 증가함에 따라 aglycone 성분비율이 증가되었지만 $40^{\circ}C$이상에서는 그 손실률이 크게 증가하였다. 결과적으로 판단해 볼 때, isoflavone을 aglycone화 하는데 있어 인체 내 유사조건에서 aglycone의 증가율이 높았으며 최적의 조건과 많은 차이를 나타내지 않았고 그 손실률 또한 최소화된 결과를 나타내어 isofalvone을 적용한 기능성 유제품을 연구하는데 있어 긍정적인 가능성을 보였다.
본 연구는 ${\beta}-galactosidase$와 phytase활성이 높은 균주의 선발을 목적으로 수각 미생물들을 Kefir와 자연환경에서 분리하여 효소활성을 측정하였다. 배양한 유산균과 효모 균체액을 French pressure cell press로 세포를 파쇄하였을 때, 각 미생물의 단백질농도는 효모보다 유산균이 높은 것으로 나타났다. ${\beta}-galcactosidase$의 비활성은 Kluyveromyces maxiranus와 Candida utilis를 제외하고는 대부분 $0.80{\sim}0.89\;umol/min/mg$ 사이였다. 체적활성의 경우는 Lactobacillus paracasei 및 Lactobacillus rahmnosus, Enterococcus faecium이 각각 15.9 및 14.5, 14.5 umol/ml를 기록하여 ${\beta}-galcactosidase$의 추출재료로 우수하였다. phytase의 비활성은 Lactobacillus paracasei 와 Enterococcus faecium이 0.032와 0.038 umol/min/mg로 가장 높았다. 체적활성의 경우는 Lactobacillus paracasei가 35.12 umol/ml로 가장 높았다. 결론적으로 ${\beta}-galactosidase$와 phytase의 생산측면에서 이용한 미생물중에서는 Lactobacillus paracasei가 가장 우수한 것으로 사료되었다.
본 연구는 감과실의 성숙과 연화중에 일어나는 세포벽분해효소의 활성, 펙틴 및 조직의 변화를 조사하였다. Polygalacturonase와 ${\beta}-galactosidase$의 활성은 미숙과실에 없었으나 완숙 감과실에서 각각 55.1, 21.79unit/100g-fr. wt.이었고 연시에서는 각각 206.70, 380.23unit/100g-fr, wt으로 증가하였다. 펙틴질의 변화는 총 펙틴과 불용성 펙틴은 성숙중에 증가하였으나 연시에서는 현저히 감소하였으며, 반면에 수용성 펙틴은 성숙과 연화중에 증가하였다. 감과실의 성숙주엥 간극의 발달과 더불어 middel lamella의 용해현상이 일어났으며 연시에서는 세포가 분리되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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