Effects of Antioxidants Treatment on the Cryopreservation of Human Hematopoietic Stem Cells

인간 조혈모 줄기세포의 냉동보존에 미치는 항산화제의 영향

Oxidative damage resulted from reactive oxygen species (ROS) is one of the main causes for the decrease of the viability during in vitro culture and cryopreservation process. This experiment was performed to determine the effects of antioxidants on the human hematopoietic stem cell (HSC) during cryopreservation procedure. HSCs cultured in vitro with or without antioxidants were frozen and then examined for stem cell potential after thawing. The cell viability of thawed HSC was increased in $\alpha$-tocopherol and ascorbic acid treatment group compared to control group ($62.7{\pm}8.0%$) and it was higher in 150 uM $\alpha$-tocopherol treatment group ($70.5{\pm}7.0%$). No significant difference was observed in the membrane integrity in all groups. In auto-differentiation rate, no significant difference was appeared in all groups, but was lower in 150 uM $\alpha$-tocopherol ($7.3{\pm}2.6%$) compared to control group ($10.1{\pm}1.6%$). These results demonstrate that treatment of antioxidants improves the efficiency of cryopreservation for HSC and $\alpha$-tocopherol may be considered effective antioxidant for the protective effect on HSC.

Reactive oxygen species(ROS)에 의한 산화적 손상은 냉동보존 과정과 체외 배양과정 중 세포 생존률 감소의 주된 요인 중 하나이며, 특히 줄기세포의 경우 냉동보존 후 쉽게 분화하거나 사멸하는 경향이 있음이 잘 알려져 있다. 따라서 본 연구는 체외 배양된 인간 조혈모 줄기세포의 냉동보존 시 선별된 항산화제를 처리하여 항산화제가 줄기세포의 생존 및 자동분화에 미치는 영향을 조사하고자 하였다. 해동 후 세포의 생존률은 $\alpha$-tocopherol과 ascorbic acid 처리군이 대조군($62.7{\pm}8.0%$)에 비해 높은 생존률을 보였고, 그 중 150 uM $\alpha$-tocopherol처리군($70.5{\pm}7.0%$)이 가장 높은 생존률을 보였다. 세포막 손상은 대조군 및 실험군 모두에서 나타나지 않았다. 자동분화율에 있어서는 모든 실험군에서 대조군($10.1{\pm}1.6%$)과 유의한 차이를 보이지 않았으나, 150 uM $\alpha$-tocopherol ($7.3{\pm}2.6%$) 처리군에서 가장 낮은 자동분화율을 나타내었다. 본 실험의 결과, 항산화제는 인간 조혈모 줄기세포 냉동보존 시 생존율을 향상시키며, 특히 $\alpha$-tocopherol은 인간 조혈모 줄기세포의 냉동보존 과정 동안 효과적인 항산화제로 작용할 것이라 생각된다.