Purification of Hemolysin from Vibrio anguillarum Isolated from Fish

어류분리 Vibrio anguillarum 용혈소의 정제

A marine microbe, Vibrio anguillarum was isolated from fish and studied for its concerning pathogenic substance of hemolysin. Purification of hemolysin was achieved by the procedure of ammonium sulfate precipitation from cul-ture filtrate, DEAE-cellulose chromatography, and G-200 gel filtration with 36 fold of purification and 2.3% yield. The molecular weight of the purified hemolysin was 38,000 dalton by SDS-PAGE. The purified hemolysin was stable at pH 6-9, below 45$^{\circ}C$, and up to 1% of NaCl, respectively. $Ca^{2+}, Cu^{2+}, Zn^{2+}, Fe^{2+}$ inhibited the hemolytic activity whereas EDTA and $Mg^{2+}$ did not.

1. 어류에서 분리한 V. anguillarum KS410의 용혈소를 분리하여 배양 상등액, 황산암모늄 침전, DEAE-cellulose column chromatography, Sephadex G-200 gel 여과 등의 과정을 통하여 36배 정제하였고 최종 회수율은 2.3%였다. 2. 정제된 용혈소의 SDS-PAGE상의 전기영동 결과는 38 Kda의 분자량을 보유하였다. 3. 온도에 대한 정제 용혈소는 45$^{\circ}C$까지는 안정하였으나 그 이상의 온도에서는 급격히 실활되어 이열성인 것으로 나타났다. 4. NaCl 농도에 따른 V. anguillarum 용혈소의 안정성은 1%가 가장 안정하였고 4%이상에서는 안정성이 감소하였다. 5. 정제된 용혈소의 pH 안정성은 6-9 사이었다. 6. 금속이온에 대한 정제 용혈소는 $Ca^{2+}, Cu^{2+}, Zn^{2+}, Fe^{2+}$ 첨가시에는 실활되었으나 $Mg^{2+}$첨가에는 영향을 받지 않았다. 7. 정제용혈소는 EDTA에 대하여 전혀 활성에 저해를 받지 않았으나 $FeCl_3$에서는 저해를 받았다.