Transformation of Rhizobacteria Pseudomonas fluorescens by Electroporation

Electroporation에 의한 근권 미생물 Pseudomonas fluorescens의 형질전환

The antagonistic rhizobacteria Pseudomonas(P.) fluorescens against F. oxysporum and R. solani were isolated and selected, and then, their biological and physiological characteristics were investigated. The posibility and optimum condition of the electroporation of antagonistic rhizobacteria with Ps70, one of the selected one, and plasmid pSV2-neo was studied. Its optimum condition was found with HGEB which contains 1 mM (pH 7.0) hepes and 10% glycerol at setting of 200 resistance, 25 ${\mu}F$ capacitance, and 2.5 kV applied voltage. In addition, the transformation efficiency obtained with pSV2-neo was compared to other plasmids with different sizes. The applied voltage, the buffer composition and the parallel resistor (time constant) were shown to have the greatest effect on transformation efficiency in electroporation. And the rest of the selected rhizobacteria were also successfully transformed with pSV2-neo by electroporation.

식물 병원성 사상균 F. oxysporum과 R. solani에 대하여 우수한 길항력을 갖는 Pseudomonas (P.) fluorescens를 작물 근권으로 부터 분리하여 생리, 생화학적 특성을 조사하였다. 이들 분리 근권길항 미생물중 한 균주인 Ps70과 plasmid pSV2-neo를 이용하여 electroporation에 의한 길항 미생물 P. fluorescens의 transformation 가능성과 최적 조건을 조사하였다. 그 결과 10% glycerol을 P. fluorescens buffer로 사용하여 2.5kV의 voltage, $200{\Omega}$의 resistance에서 최적의 electrotransformation 효과를 보였다. 또한, 이균주에 크기가 서로 다른 plasmid를 electroporation하여 transformation 효과를 비교한 결과 voltage, electroporation buffer의 조성, 그리고 resistance (time constant)가 transformation의 효과를 증진하는데 주요한 역할을 하는것으로 나타났으며, 또 다른 P. fluorescens 균주에 같은 실험을 반복한 결과 유사한 electrotransformation 효과를 보였다.