Analytical Science and Technology (분석과학)

The Korean Society of Analytical Sciences (한국분석과학회)
권호 표지

Assay of $\beta$-Galactosidase Using High Performance Liquid Chromatography

고속액체크로마토그래피를 이용한 유당분해효소의 활성도 측정

  • Shin, Myung Gon (Rice Utilization Research Center, Korea Food Research Institute) ;
  • Chang, Pahn Shick (Department of Food Science and Technology, Seoul National Polytechnic University) ;
  • Min, Bong Kee (Rice Utilization Research Center, Korea Food Research Institute) ;
  • Kim, Sun Chang (Department of Food Science and Technology, Kyungnam University)
  • 신명곤 (한국식품개발연구원 쌀이용연구센터) ;
  • 장판식 (서울산업대학교 식품공학과) ;
  • 민봉기 (한국식품개발연구원 쌀이용연구센터) ;
  • 김선창 (경남대학교 식품공학과)
  • Received : 1992.08.14
  • Published : 1992.12.25
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Abstract

An analytical procedure is presented for the quantitative determination of lactose, glucose, and galactose in the hydrolyzate of lactose by ${\beta}$-galactosidase with high-performance liquid chromatography. An Aminex HPX-87C column at $85^{\circ}C$ and refractive index detector were used to resolve lactose, glucose, and galactose in only 12 minutes with distilled and deionized water as a mobile phase. The validity of high-performance liquid chromatography as a method for the assay of ${\beta}$-galactosidase was supported by recovery experiments and comparision of results with those by ONPG method, a spectrophotometric assay. The procedure was appropriate for determination of sugars in the enzyme reaction mixture and could by applied to analysis of ${\beta}$-galactosidase activity.

유당분해효소의 활성도를 정량하기 위하여 고속액체크로마토그래피(HPLC)를 사용하는 방법을 확립하였다. Aminex HPX-87C 컬럼 및 RI 검출기를 사용하여 유당, 글루코스 및 갈락토스를 12분 이내에 정량적으로 분석할 수 있었다. 컬럼 온도는 $85^{\circ}C$로 고정하였으며 이동상으로는 탈이온화된 증류수를 사용하였다. ONPG(ortho-nitrophenol-${\beta}$-D-galactopyranoside)를 이용하는 발색법의 결과와 비교하여, 고속액체크로마토그래피에 의한 유당분해효소 활성도 측정법의 타당성을 고찰하였으며, 그 결과 ONPG 방법과 고속액체크로마토그래피 방법에 의한 효소활성도 측정의 실험결과에는 큰 차이가 없었으며, 고속액체크로마토그래피를 사용하는 경우에는 420 nm에 대한 방해 작용이 있는 기질에서도 유당분해효소의 활성도를 측정할 수 있는 장점을 가짐을 확인하였다.

Keywords