Abstract
Separation of the optical isomers of free amino acids by a reversed phase high performance liquid chromatography has been studied by adding a copper(II) complex of L-proline or L-proline derivatives (hydroxy-L-proline, N-benzyl-L-proline, p-xylenyl-L-proline, p-xylenyl-hydroxy-L-proline) in the mobile phase. An OPA postcolumn detection system was used for the detection of amino acids. The chromatographic properties for the free amino acids were discussed in terms of the pH, the kinds and concentration of chelate or organic modifier. The retention behaviors of the free amino acids were considerably different from, those of DNS-amino acids or DABS-amino acids. The enantioselectivity of the free amino acids was better than that of derivatized amino acids. The enantioselectivity between the optical isomers observed by use of the Cu(II)-p-xylenyl-L-proline chiral cheleate was the best among the several copper(II) chelate. A separation mechanism could be illustrated not only by the hydrophobic interaction of the diastereomer with stationary phase but also by the steric effect of the ligand exchange reaction between the free-amino acids and copper chelate.
역상 고성능 액체 크로마토그래피에서 L-proline과 그 유도체들(hydroxy-L-proline, N-benzyl-L-proline, p-xylenyl-L-proline, p-xylenyl-hydroxy-L-proline)의 구리(II) 킬레이트를 이동상에 첨가하여 유도체화 안된(자유) 아미노산 광학이성질체를 분리하였다. OPA-postcolumn 검출장치를 이용하여 검출하였고, 자유아미노산에 관한 머무름 거동을 이동상의 pH와 킬레이트 종류 및 농도, 유기용매의 종류 및 조성에 관해 연구하였다. 자유아미노산에서의 머무름 거동은 DNS-아미노산이나 DABS-아미노산과 같은 아미노산 유도체와는 다르게 나타났고, 분리 선택성도 자유아미노산이 아미노산 유도체들 보다 더 좋았다. 사용한 여러가지 리간드 가운데 p-xylenyl-L-proline을 사용했을 때 최대의 광학 분리의 선택성을 나타내었다. 아미노산과 구리 착물간의 리간드 교환반응의 입체효과에 따른 정지상과의 소수성 상호작용으로 분리 메카니즘을 설명할 수 있었다.