Quantitative Analysis of Amino Acids of Paragonimus Westermani Treated with Praziquantel in Vivo and in Vitro

간흡충(肝吸蟲) 성충(成蟲)에 대한 Praziquantel의 시험관내 살충작용(殺蟲作用)에 의한 유리(遊離) 아미노산(酸)의 정량분석(定量分析)

The amino acid constituents of Paragonimus westermani were very imperfectively known. Lee(1964) detected 9 amino acids in the tissue hydrolysates of P. westermani, and 13 amino acids were detected from the cyst content and body fluid constituents of P. ohirai, But, the quantity of amino acids in P. westermani is still unknown. In the present investigation 18 amino acids, the fundamental constituents of proteins, were quantitatively studied by high performance liquid chromatography. The results obtained were as follows : A total of 18 amino acids were recovered in protein hydrolysates of P. westermani obtained from cat. ; They were cystein, aspartic acid, glutamic acid, serine. glycine, histidine. arginine, threonine, alanine, proline, tyrosine, valine, methionine, isoleucine, leucine, phenylalanine, tryptophan and lysin. Among them, glutamic acid was the most abundant form and tryptophan, cystein, methionine, and histidine constitute minor portion of hydrolysates. Compared to the normal P. westermani, the volume of hydrolysates obtained from the praziquantel(PZQ) treated worm-0.lug PZQ/ml saline for 6 hours incubation, and $3{\times}25$mg/kg bwt${\times}$2days in vivo treatment was generally increased except tryptophan. A total of 17 free amino acids were identified and the volume was 174.18 umol/1 gm wet weight P. westermaini. Among them, glycine and alanine constitute 28% of total volume. No significant differences were observed in the material obtained from worm treated with PZQ. However, slight increase of serine, arginine and the slight diminution of glutamic acid and proline was observed.

High performance liquid chromatography를 이용하여 praziquantel 처리전후의 폐흡충(肺吸蟲)(Paragonimus westermani)내 가수분해(加水分解)시킨 아미노산과 유리(遊離)아미노산의 정량분석(定量分析)을 시도하였다. 폐흡충은 고양이에 인공감염시켜 얻었으며 시험관내 살충은 praziquantel $0.1{\mu}g/ml$ 농도인 인산완충액(燐酸緩衝液)에 살아 있는 폐흡충을 넣어 $37^{\circ}C$ 항온기에 6기간 동안 배양한 충체를 사용하였고, 실험 동물내 살충 충체는 praziquantel을 25mg/kg의 용량으로 하여 1일 3회 2일간 경구투약(經口投藥)하고 24시간 후에 폐로부터 충체를 수집하여 사용하였다. 이를 동결건조(凍結乾燥)시켜 1% Triton${\times}$100, 0.5M Potassium acetate가 함유된 50mM Tris-HCl(pH=7.5)에 넣어 homogenize시킨 뒤 $4^{\circ}C$에서 100,000G로 30분간 초원심분리(超遠心分離)하고 상청액(上淸液)을 얻어 시료(試料)로 사용하였다. 위의 시료를 가수분해하고 HPLC에서 각각의 아미노산으로 분리하여 254nm에서 흡광도(吸光度)로 검출하였다. 결과, 폐흡충을 가수분해하여 얻은 아미노산은 cystein, aspartic acid, serine, glycine, histidine, arginine, threonine, alanine, proline, tyrosine, valine, methionine, isoleucine, leucine, phenvlalanine, tryptophan, lysin의 총 18종의 확인되었다. 정상 폐흡충은 wet weight lgm당 아미노산 825.88umol이 검출되었고 이 중 glutamic acid가 87.88umol로 가장 많았다. Tryptophan, cystein, methionine, histidine은 3.21~7.91umol로 소량 검출되었다. Praziquantel 처리후 가수분해 하여 얻은 아미노산의 량은 tryptophan을 제외하고는 일반적으로 증가하는 경향이 있었다. 유리(遊離)아미노산은 17종의 검출 되었으며 폐흡충 wet weight 1gm당 유리아미노산은 174.18umol이 검출되었다. 이중 glycine과 alanine이 24.25~24.59 umol로서 가장 많이 함유되어 있었다. Praziquantel 처리후 별다른 변화는 보이지 않았으나 전체에 대한 구성비로 볼 때, serine은 2.9%에서 5.0~5.5%로, arginine은 3.2%에서 4.5~5.8%로 각각 상승되었고, glutamic acid와 proline은 각각 8.8%, 10.9%로부터 6.2~7.1%, 3.7~6.0%로 감소되었다.