Clostridium botulinum Type B 독소의 정제방법에 관한 연구

Improved Procedure for Purification of Clostridium botulinum type B Toxin

Clostidium botulinum type B가 생성하는 독소를 정제할 수 있는 방법을 연구하였다. 정제과정은 독소를 ammonium sulfate로 배양액에서 침전시켜 추출한후 Polymin P를 처리하여 핵산 및 기타 단백질을 최대한 제거한 후 Sephaex G-I00에서 gel fiItration을 시키고 DEAE-Sephadex로 이온교환 크로마토그래피를 시켰다. 이러한 과정으로 정제된 독소의 회수율은 17%였으며 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 결과 하나의 선을 나타내 동질성을 증명하였다. 정제된 독소의 분자량은 163,000이였으며 $\beta$-mercaptoethanol을 사용하여 환원시킨 결과 분자량 106,000과 56,000의 하위 단위체로 분리되었다.

The neurotoxin of Clostridium botulinum type B was purified from a liquid culture. The purification steps consist of ammonium sulfate precipitation of whole culture, treatment of Polymin P(0.15%, v/v), gel filtration on Sephadex G-100 at pH5.6 and DEAE-Sephadex charomatography at pH8.0. The procedure recovered 17% of the toxin assayed in the starting culture. The toxin was homogeneous by sodium dodecyl sulfate(SDS)-polyacrylamide gel electrophoresis and had a molecular weight of 163, 000. Subunits of 106, 000 and 56, 000 molecular weight were found when purified toxin was treated with a disulfide-reducing agent and electro phoresed on SDS-polyacrylamide gels.