Abstract
Carboxypeptidase A-catalyzed hydrolysis of ester substrates was carried out at room temperature in the presence of a number of external reagents. If the acyl-enzyme intermediate, an anhydride, is attacked by the external reagents, products formed by trapping at the acyl portion or at the enzyme portion of the anhydride group can be obtained. Examination of the uv/vis spectral properties of the reaction products and of changes in enzyme activity indicated that such trapping reactions did not occur. Also performed was evaluation of enzymatic rate parameters for the the hydrolysis of O-(o-hydroxyphenylacetyl)-L-${\beta}$-phenyllactate. Detection of 2-coumaranone possibly formed by attack of the o-hydroxy group as an intramolecular trapping group at the acyl-enzyme intermediate was tried, but no evidences for the intramolecular trapping reaction were obtained. Failure to trap the intermediate was discussed in terms of steric hindrance imposed on the approach of the trapping reagents to the anhydride group of the acyl-enzyme intermediate and of the fast enzymatic breakdown of the intermediate.
상온에서 카르복시펩티다제 A에 의한 에스테르 기질의 가수분해 반응을 여러가지 외부 시약의 존재하에 행하였다. 산무수물 형태의 아실-효소중간체가 외부시약에 의해 공격받는다면 아실 부분에 포획된 생성물이나 효소부분에 포획된 생성물이 형성될 것이다. 반응생성물의 분광도와 효소활성도의 변화를 조사한 결과 포획반응의 생성물은 검출되지 않았다. 또한, O-(o-hydroxyphenylacetyl)-L-${\beta}$-phenyllactate가수분해에 대한 효소 반응속도변수를 측정하였다. 이 기질의 o-히드록시기가 분자내 포획기로서 작용하여 산무수물형태의 아실-효소중간체를 공격하여 20coumaranone이 형성되었나를 조사하였으나 분자내 포획반응이 일어났다는 증거는 얻지 못하였다. 이러한 중간체 포획반응의 실패는 포획용 시약이 아실-효소 중간체의 무수산기에 접근할때 입체적 방해를 받거나 중간체의 가수분해 단계도 효소에 의해 촉매되기 때문이라고 생각된다.