Immunoglobulins (IgY) were isolated from egg yolk of hens immunized with bovine serum albumin(BSA). The stability of anti-BSA IgY against heat and pH was investigated. Antibody activity was measured by enzyme linked immunosorbent assay. IgY was relatively heat-stable and most of the antibody activity remained after heating up 65$^{\circ}C$ for 30 minutes. IgY was stable at pH 5-11. However, inactivation of IgY was observed below pH 4, or above pH 12. Inactivation of IgY proceeded rapidly at low pHs(pH 2-3). Most of the antigen binding activity was lost at low pHs probably because of some conformational changes.
A livetin solution(LS) containing yolk immunoglobulins(IgY) was separated by treating the egg yolk with natural gum, carrageenan. Carrageenan has been used as a food ingredient. Relative absorbance of IgY LS after proteolysis was investigated. IgY LS was fairly stable to pepsin digestion at pH 3.0. However, IgY LS appeared to be susceptible to pepsin digestion at pH 2.0, showing 18% of relative absorbance and complete breakdown H chain after 30 min exposure. Relative absorbance of IgY LS was considerably high after exposure to trypsin and chymotrypsin for 8 hr. IgY LS showed especially good stability to chymotrypsin digestion.
체내 소화효소에 대한 안정성을 검토하기 위해 competitive ELISA를 이용하여 항원 결합력의 변화를 조사하였다. YIgG는 펩신에 대해 상당히 불안정하여 pH 2.0에서 30분간의 반응에 의해 항원 결합력이 소실되었다. 한편 yIgG 용액에 50%(w/v) saccharose를 첨가하여 펩신과 30분 반응시킨 결과 native yIgG에 비해 항원 결합력이 6.7배 정도 저하되었으나 미첨가시에 비해 항원 결합력이 상당히 유지되었으므로, 펩신에 대한 yIgG의 안정성은 saccharose에 의해 상당히 증가되었음을 알 수 있다. YIgG는 트립신 및 키모트립신과 반응 후 항원 결합력의 큰 저하는 나타나지 않아 펩신에 비해 상당히 안정한 것으로 생각된다. 트립신과 8시간 반응 후 yIgG의 항원 결합력은 native yIgG에 비해 2배 감소되었으나 키모트립신과 8시간 반응 후 yIgG의 항원 결합력은 1.5배 감소되었다. 그러므로 yIgG는 키모트립신 대해 가장 안정하였다.
Sanaullah Sajid;Sajjad ur Rahman;Mashkoor Mohsin;Zia ud Din Sindhu
한국미생물·생명공학회지
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제50권3호
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pp.430-435
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2022
The infectious bursal disease (IBD) is a highly contagious and acute poultry disease caused by Birnavirus. However, the vaccination is the only disease prevention, but several factors impeded vaccine development. Thus, a need for time to develop a novel technique for managing and treating respiratory diseases in poultry birds. Passive immunization is a hope and a possible alternative used in birds to meet this need. The current research attempted to produce egg yolk-based polyclonal antibodies against the IBD virus. The benefits of IgY include ease of extraction, lack of reaction with mammalian Fc receptors, and low production cost. Commercial layers were immunized with inactivated IBD virus subcutaneously according to the treatment regimen. The eggs were gathered daily, and yolk antibodies were extracted with the ammonium sulfate precipitation technique. The use of an indirect hemagglutination test demonstrated that IgY was IBD-specific. Until the end of the experiment, the specific IgY immunoglobulins did not lose activity when stored at 4℃. The specific immunoglobulin (IgY) treated challenged birds were demonstrated 92% recovery in comparison to the control group. The study implies that the IBDV specific IgY is an easily prepared and rich source of antibodies and offers an alternative therapeutic agent to cure IBD-infected birds.
포유동물과 마찬가지로 암탉은 태어날 병아리에게 계란을 통해서 면역항체를 이행시켜 해로운 병원균의 침입으로부터 병아리를 보호해준다 . 즉 어미 닭의 혈청으로부터 특정항체가 난황에 이행되고 이 면역항체를 IgY 라고 부르며 이것이 발육중인 태아와 갓 부화한 병아리의 면역항체가 되는 것이다. 상대적으로 면역능력이 낮은 갓 부화한 병아리는 병원균에 대한 방어능력을 계란을 통해 어미로부터 받은 항체를 통해 얻는다. 그 결과, 난황 내에는 많은 양의 IgY를 보유하게 되고 이 면역물질이 있으므로 말미암아 계란 내에 들어와 있는 병원균이냐 외부에서 들어오려는 병원균을 무력화시켜 아무 탈없이 병아리가 부화하게 된다 . 이처럼 산란계에 각종 병원균을 접종함으로서 면역항체 IgY 가 많이 들어 있는 계란을 생산할 수 있다. 난황 1 개에는 136~340 mg 의 IgY 가 들어있고 이는 난황 $m\ell$ 당 8~20 mg의 IgY 가 함유되어 있는 셈이다. 그리고 산란계 한 마리로부터 일년에 30 g 이상의 IgY 를 얻을 수 있다. 산란계에 항원을 접종하여 난황으로부터 IgY 를 수확하면 IgY g 당 10$ 도 안 되는 낮은 비용으로 항체를 얻을 수 있게 된다. 이에 비하여 포유동물의 경우 19 의 IgG 를 얻는데 20,000$가 소요된다. 이와 같은 IgY 제조기술을 의학, 공중 보건, 수의학, 식품안전과 같은 분야에 응용을 함으로써 잠재력이 높은 새로운 시장을 여는 장이 될 것이다. IgY 기술을 더욱 폭넓게 활용할 수 있는 분야들로는 생물제제나 의학진단기구, 생리적 기능성 물질이나 기능성식품의 개발, 질병예방을 위한 경구투여제 그리고 질병감염을 막는 특정 병원균성 항미생물 제제와 같은 것들을 들 수 있다. 이 논문에서 우리가 강조하고자 하는 것은 IgY 가 함유된 계란을 생산하고 섭취하였을 때 특정항체들의 결합을 통해 병원성 미생물의 성장이나 군체를 형성하는 것을 무력화시켜 결과적으로 병원균을 감소시키거나 억제시킨다는 점이다. 오늘날 약물에 내성을 지닌 박테리아의 출현으로 질병감염을 막는데 항생제의 사용효과가 점차 감소하고 있기 때문에 이러한 항생제를 대체할 수 있는 방안으로 계란항체를 이용할 수 있다.
우유내 Salmonella를 검출하기 위한 Sandwich ELISA의 특이성을 조사하였다. Sandwich ELISA에 사용한 항체들은 OMP 분획을 닭에 면역주사하여 얻은 IgY와 OMP 분획을 gel filtration하여 얻은 분자량 40,000의 OMP를 토끼에 면역 주사하여 얻은 토끼 IgG를 사용하였다. Immnoblot assay에서 IgY는 분자량 6,000의 OMP에 강하게 반응하였으며 토끼 IgG는 분자량 40,000, 35,000과 6,000의 OMP들에 강하게 반응하였다. IgY와 토끼 IgG는 Salmonella typhimurium의 다른 단백질에도 반응하였다. Competitive ELISA에서 IgY가 Salmonella의 두 개 균주에 대해 특이성을 나타냈으며 Eshcherchia coli와 Yersinia enterocolitica에 의하여서는 반응을 나타내지 않았다. 우유에 세균을 첨가하여 실시한 sandwich ELISA에서 Salmonella typhimurium 2균주가 가장 높은 흡광도를 보였다. Salmonella cholerasuis 균주들은 상대적으로 흡광도가 낮았으며 이루 일부 Salmonella cholerasuis 균주들은 비 Salmonella 균주들과 차이가 없었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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