White spot syndrome virus (WSSV) is a strong causative agent for high mortality in cultured and wild shrimps. From this study, the WSSV prevalence in marine organisms around shrimp farm as well as live feed-mediated transmission of WSSV to farmed shrimps were investigated. Based on nested-PCR method, WSSV was detected in wide array of marine organisms including Perinereis aibuhitensis (81.3% of prevalence rate, 13/16), Enedrias fangi (100%, 16/16), Ruditapes philippinarum (20%, 2/10), crab larvae (100%, 10/10), copepoda (30%, 3/10), Periophthalmus modestus (50%, 5/10), Pachygrapsus crassipes (10%, 1/10), Helice tridens (20%, 2/10) and Neomysis sp. (70%, 7/10). On the other hand, WSSV was not detected in Bullacta exarata, Uca arcuata, and Reishia clavigera. The percent prevalence of WSSV in wild shrimps, Fenneropenaeus chinensis was only 6%, but markedly increased up to 56% after a feeding trial using polychaete worms for one month, indicating that the live feed is one of significant carriers of WSSV to shrimps under practical farming conditions.
본 연구는 WSSV의 재조합단백질 rVP466에 대하여 생산된 항혈청을 사용하여 WSSV에 대한 neutralization (중화) 효과를 확인하고자 수행하였다. 먼저 재조합단백질 rVP466의 생산을 위해 WSSV의 구성단백질 VP466을 암호화하는 유전자인 VP466을 포함하는 재조합 플라스미드 pCold-VP466을 제작한 다음 이것을 발현용 숙주인 E. coli RIPL에서 발현하였다. 발현된 rVP466에 대한 항혈청은 토끼를 사용하여 생산하였으며, 항원 rVP466에 대한 특이면역반응은 Western blot을 통해 확인하였다. WSSV에 대한 항혈청의 중화효과를 확인하기 위해 항혈청과 반응시킨 바이러스액($1{\times}10^4$ 배로 희석된 WSSV)을 이용하여 실험용 새우(Penaeus chinensis)에게 주사 감염을 통해 공격실험(challenge test)을 수행하였다. 실험 결과, WSSV로 공격실험한 감염대조구(positive control)의 새우들은 감염 후 17일째에 100% 누적폐사율을 보였으며, preimmune serum과 WSSV의 혼합액을 challenge한 preimmune control의 새우들은 감염 후 25일째에 83%의 누적폐사율을 보였다. WSSV와 rVP466 항혈청을 1:0.01, 1:0.1, 1:1로 혼합한 액으로 challenge한 새우들은 감염 후 25일째에 각각 73%, 53%, 46%의 누적폐사율을 보였다. 이상의 결과를 통해 WSSV가 rVP466 항혈청에 의해 농도의존적으로 neutralization됨을 확인하였으며, 이는 WSSV 감염과정에 VP466이 관여함을 나타내는 것이다.
흰반점바이러스(WSSV, white spot syndrome virus)는 세계적으로 새우양식산업에 가장 심각한 피해를 주는 질병으로 우리나라에는 1993년 서해안에서 처음 보고된 이래 해마다 축제식 새우양식장에 반복적으로 대량폐사를 가져오고 있다. WSSV는 전염성이 매우 강한 바이러스로서 새우양식장에 내에서 감염된 새우들 간에 공식에 의하여 빠르게 감염이 확산될 수 있다. 황복과 같은 육식성 어류는 감염새우 혹은 약한 새우를 선택적으로 포식함으로써 바이러스의 발병을 지연 혹은 억제시킬 수 있는 것으로 알려져 있어 양식현장에서 새우와 함께 복합적으로 양식이 시도되고 있지만 황복의 감염새우에 대한 선택적 포식의 정도와 효과에 대해서는 보고되어 있지 않다. 본 연구에서는 WSSV에 감염된 새우와 비감염된 건강한 새우를 대상으로 사육생물의 연령과 크기에 따른 황복의 선택적 포식효과를 조사하기 위하여 흰다리새우 Litopenaeus vannamei의 치하와 5개월산 황복, 중형 새우와 16개월산 황복으로 구분하여 원형수조($28.26\;m^2$)에서 사육실험을 실시한 결과, 치하와 5개월산 황복의 복합사육의 경우 건강새우와 감염새우의 생존율은 각각 89.1%, 46.0%였으며 중형새우와 16개월산 황복의 실험에서는 건강새우와 감염새우의 생존율이 각각 48%, 4%로서 모두 감염새우가 건강새우에 비해 생존율이 크게 떨어져 황복은 건강새우보다는 감염새우를 선택적으로 포식하는 것으로 나타났다. 황복은 크기에 관계없이 단위체중당 하루에 포식하는 새우의 총 중량은 크게 차이가 나지 않으며 새우의 크기와 밀도의 차이에 따라서도 차이를 보이지 않았다. 또한 황복은 감염새우를 선택적으로 포식하기는 하지만 감염새우가 부족할 경우에는 새우의 건강상태와는 무관하게 일정량의 새우를 포식하기 때문에 새우양식장에 황복을 넣을 때는 황복의 입식시기와 밀도 뿐 아니라 황복의 총중량도 충분히 고려되어야 한다.
Since 1993, sudden and massive death has occurred among penaeid shrimp, Penaeus orientalis cultured in Korea. We investigated the pathological characterizations on the spontaneously and experimentally infected penaeid shrimp. The major gross findings of the spontaneous cases were 2-6mm sized-white spots on the inside of the carapace and reddish discolorization. Histopathologically, massive necrosis of lymphoid organ, degeneration and necrosis of epithelia of epidermis and foregut were observed in both spontaneous and experimental cases. Amphophilic to basophilic intranuclear inclusion bodies were readly observed epithelia of epidermis, foregut and gills. Electron microscopy revealed enveloped, non-occuluded ellipsoid to rod shaped virus particles, within the nucleus, in the lymphoid organs and interstitial cells of hepatopancreas of both spontaneously and experimentally infected shrimps. The size of the virion was $375{\times}167nm$, and the nucleocapsid was $290{\times}75nm$. The causative agent causing massive death in penaeid shrimps in Korea resembles baculovirus associated with white spot syndrome (WSBV) occurred in Taiwan in virus morphology and gross and histological changes of the shrimps.
본 연구에서는 호염성 세균 Bacillus sp. Mk22를 사료에 섞어 투여함으로써 Penaeus monodon 새우의 성장증진과 Vibrio parahaemolyticus 와 흰반점바이러스(WSSV)의 감염 감소에 대한 영향을 조사하였다. 새우는 45일 동안 3가지 먹이를 공급하였 는데, 무첨가(대조구), 시판 프로바이오틱, 그리고 Bacillus sp. Mk22이었다. 호염성세균 Mk22를 투여한 새우들은 다른 그룹들의 새우들보다 성장(7.1 ± 0.21 g), 생존율(94.3 ± 0.58%), 체중증가(178 ± 4.93 g), 그리고 감소된 사료전환효율(0.8 ± 0.03 g)을 보였다. Bacillus sp. Mk22를 투여한 새우들은 다른 그룹의 새우들보다 새우배양 수조안에서 낮은 비브리오 수자(0.02 ± 0.01 × 102 CFU/ml)를 보였다. 이 세 그룹의 새우들을 비브리오나 WSSV로 공격감염을 하였다. 비브리오 감영에서는, 시판 프로바이오틱그룹과 Mk22 그룹에서 배양수조의 물 감염과 경구투여감염에서 치사 새우가 없었다. WSSV 감염에 대해서는, Mk22 그룹의 경우 새우배양 수조 감염에서는 68%의 생존율과 경구투여 감염에서는 20% 생존율이 45일째에 관찰되었고, 대조구와 시판 프로바이오틱 그룹에서는 모두 훨씬 빠른 시간 내에 100% 사망률을 보였다. 산화적 스트레스의 표지인, catalase와 superoxide dismutase와 같은 항산화 효소 활성은 비브리오와 WSSV 감염된 Mk22 그룹 모두에서 다른 그룹들에 비해 유의적으로 감소하였다. 이 사실은 Bacillus sp. Mk22는 산화적 스트레스 감소하는데 효과적이었고, 이는 감소된 감염효과로 인한 것으로 추정된다.
수산종묘는 인류에게 중요한 동물성 단백질을 제공할 뿐만 아니라, 방류를 통한 수산자원 관리의 측면에서도 매우 중요하다. 수산자원의 증강을 목적으로 2009년에는 33품종, 2010년에는 44품종, 2011년에는 43품종, 2012년에는 46품종에 대해 수산생물전염병에 대한 감염 여부를 조사하였다. 검사품종 중에서 해면품종으로는 전복이 가장 많았으며, 그 다음 해삼, 넙치, 조피볼락, 꽃게 순으로 나타났다. 내수면품종 중에서는 붕어가 가장 많았으며, 그 다음으로 쏘가리, 대농갱이, 다슬기, 참게의 순으로 나타났다. 감성돔, 돌돔, 붉은쏨뱅이, 뱀장어는 4년 동안 지속적으로 검사 횟수가 감소하였다. 숭어에 대해서는 2009년에만 전염병 검사가 수행되었다. 8개의 검사 항목에 대해 총 8,476건의 검사가 실시되었으며, 56건 (0.67%)에서 koi herpesvirus, white spot syndrome virus, red sea bream iridovirus 또는 viral haemorrhagic septicemia virus와 같은 병원체가 검출되어 불합격 처리되었다.
농림수산식품부와 국립수산과학원에서는 2009년도 방류 품종 (해면 품종 22종과 내수면 품종 11품종)을 대상으로 수산동물전염병의 감염 여부를 검사하였다. 총 12개 지방자치단체에 서 방류를 실시한 것으로 나타났으며, 이 중에서 경상남도, 전라남도, 제주도 및 충청남도는 해면 품종을 주로 방류하였으며, 경기도, 전라북도 및 충청북도는 내수면 품종을 많이 방류하는 것으로 나타났다. 검사품종중에서 해산품종으로는 전복이 24.5%로 가장 많았으며, 그 다음 해삼(15.2%), 넙치 (11.5%), 감성돔과 조피볼락(6.8%), 꽃게 (5.6%), 돌돔 (5.1%), 볼락 (4.6%), 붉은쏨뱅이 (4.5%)로 나타났다. 내수면 품종 중에서는 붕어가 19.4%로 가장 많았으며, 그 다음으로 뱀장어 (17.0%), 동자개 (12.3%), 다슬기 (12.0%), 메기 (8.4)의 순으로 검사 실적이 많았다. 총 33종의 품종을 대상으로 1,080회의 검사가 의뢰되었으며, 검사항목별로 2,066건의 검사를 실시한 결과 19건에서 red sea bream iridovirus (RSIV), koi herpesvirus (KHV) 또는 white spot syndrome virus (WSSV)와 같은 병원체가 검출되어 불합격 처리되었다.
배양장에서 생산된 양식생물은 자원조성에 필요한 종묘를 제공한다는 측면에서 매우 중요한 역할을 담당하고 있으며, 방류종묘의 질, 특히 개체의 건강도 는 방류이후 서식처에서 생존하고 자원조성 효과를 결정짓는데 매우 중요한 요소가 된다. 2010년도 방류 품종(해면품종 33종과 내수면품종 12품종)을 대상으로 수산동물전염병의 감염 여부를 검사하였다. 검사 품종 중에서 해면품종으로는 전복이 20.0%로 가장 많았으며, 그 다음 해삼(15.6%), 넙치(8.4%), 조피볼락(6.7%), 감성돔(6.3%), 꽃게(6.1%) 순으로 나타났다. 내수면품종 중에서는 붕어가 19.4%로 가장 많았으며, 그 다음으로 뱀장어(11.8%), 동자개(10.9%), 쏘가리(10.8%), 다슬기(8.4%), 메기(7.7%)의 순으로 나타났다. 총 45개 품종을 대상으로 1,120회의 검사가 의뢰되었으며, 검사 항목별로 2,105건의 검사를 실시한 결과 30건에서 koi herpesvirus (KHV), red sea bream iridovirus (RSIV), white spot syndrome virus (WSSV) 또는 viral haemorrhagic septicemia virus (VHSV)와 같은 병원체가 검출되어 불합격 처리되었다.
Penaeidins은 새우류에 존재하는 항미생물성펩티드의 한 종류로서 새우의 외부 병원체에 대한 방어기작을 구성하는 중요한 인자이다. 본 연구에서는 대하 혈구세포의 cDNA library로부터 분리된 EST 클론을 분리 동정하였다. 아미노산 염기서열 분석과 계통수 분석을 통하여 본 연구에서 분리한 EST 클론이 대하의 Penaeidin 3-2 유전자와 아미노산 수준에서 동일함을 밝혔다. 대하의 Penaeidin 3-2는 signal peptides로 예상되는 19개 아미노산 잔기를 포함하여 전체 71개의 아미노산 잔기로 이루어져 있고, C-말단에는 3개의 이중황화결합을 형성할 수 있는 6개의 cysteine가 존재하였다. 대하 Penaeidin 3-2 전사체는 혈구세포, 간췌장, 근육 조직에서 발현되었으며, 특히 혈구세포에서 주로 많이 발현되었다. 흰반점바이러스의 인위감염 실험에서 바이러스 감염 후 대하 Penaeidin 3-2의 발현이 증가하였다. 이상의 결과들로부터 대하 Penaeidin 3-2가 자체 방어 작용에서 중요한 역할을 할 것으로 예상된다.
Zhang, Xuzhi;Ji, Xinming;Cui, Zhengguo;Yang, Bing;Huang, Jie
Bulletin of the Korean Chemical Society
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제33권1호
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pp.69-75
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2012
Five-channel electrochemical chips were fabricated based on the Micro-electromechanical System (MEMS) technology and were used as platforms to develop DNA arrays. Different kinds of thiolated DNA strands, whose sequences were related to white spot syndrome virus (WSSV) gene, were separately immobilized onto different working electrodes to fabricate a combinatorial biosensor system. As a result, different kinds of target DNA could be analyzed on one chip via a simultaneous recognition process using potassium ferricyanide as an indicator. To perform quantitative target DNA detection, a limit of 70 nM (S/N=3) was found in the presence of 600 nM coexisting noncomplementary ssDNA. The real samples of loop-mediated isothermal amplification (LAMP) products were detected by the proposed method with satisfactory result, suggesting that the multichannel chips had the potential for a high effective microdevice to recognize specific gene sequence for pointof-care applications.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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