• Applied Biological Chemistry
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• 제49권3호
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• pp.196-201
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• 2006

Vitellogenin은 어류의 난황 단백질의 전구체 물질로서 암컷 혈청에서 발견되는 단백질이며, 외부에서 에스트로겐이나 내분비계장애물질에 노출된 경우에는 수컷이나 미성숙한 암컷에서도 이의 합성이 촉진되는 것으로 보고되었다. 따라서 수컷에서 유도되는 vitellogenin은 외인성 에스트로겐 물질에 노출되었음을 암시하는 중요한 지표로 인정되고 있다. Vitellogenin에 대한 항체를 생산하기 위하여 잉어의 vitellogenin 서열 중의 일부분에 대한 peptide를 합성한 후 그 합성 peptide에 대한 항체를 제작하였다. 그리고 $17{\beta}$-estradiol을 주입한 잉어의 혈청에서 DE-52 이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 vitellogenin을 정제한 후 이에 대한 항체를 제작하였다. 본 연구에서는 상기의 합성 vitellogenin peptide에 대하여 제작한 다클론 항체와 vitellogenin 단백질에 대한 다클론 항체가 추후 에스트로겐의 지표로 사용될 수 있는 지를 조사하고자 항체의 반응성을 조사하였다. 정제하여 얻은 vitellogenin에 대한 다클론 항체는 Western blotting 시 $17{\beta}$-estradiol을 주입한 잉어의 혈청과 암컷 잉어의 혈청에 있는 vitellogenin과 반응한 반면에 vitellogenin peptide에 대한 다클론 항체는 이들과 반응하지 않았다. 이는 공유결합적으로 많은 변형이 일어난 vitellogenin 단백질은 vitellogenin 합성 펩타이드에 대한 항체로는 검출되지 않음을 나타낸다.

• 한국수산과학회지
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• 제28권6호
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• pp.753-760
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• 1995

This study was conducted to determine the serum vitellogenin (VTG) concentration changes during the ovulation period in elkhorn sculpin, Alcichthys alcicornis. The results of sepacryl S-300 showed that the molecular weight of VTG could be 380,000. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis may indicate that the purified VTG consists of three subunits with molecular weights of 180,000, 118,000 and 85,000, respectively. Yolk protein purified from the egg extracts was eluted on an equilibrated sephacryl S-300 column, and its molecular weight was estimated 250,000. The precipitation lines of the female serum against the antiserum of the egg extracts were fused completely by immunoelectrophoresis and immunodiffusion analysis. VTG was detected in the serum, and hepatocytes from males injected with $17\beta-estradiol\;(E_2).$ Furthermore, VTG was immunochemically similar to yolk proteins. The concentration of VTG was high before ovulation $(9.80\pm0.81-11.02\pm0.09 mg/ml),$ and then decreased rapidly after ovulation $(less\;than\;6.19\pm0.59 mg/ml).$ This study suggested that VTG was synthesized in the liver by the action of $E_2$ and released to blood, and then incorporated into oocytes.

• 한국응용곤충학회:학술대회논문집
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• 한국응용곤충학회 2002년도 합동 춘계 학술발표회
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• pp.171-171
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• 2002

• 한국잠사곤충학회지
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• 제31권2호
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• pp.72-81
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• 1989

천잠의 알에서 난황 주단백질인 vitellin을 분리·정제하고 가잠 및 상잠의 vitellin과 첨잠 nitellin과의 면역학적 특성을 비교하였으며 천잠의 배자발생에 따른 난내 vitellin의 변동을 조사하였다. 1. 전잠의 체액 vitellogenin은 유충기의 토사말기부터 검출되었다. 2. 점잠의 vitellinm은 가잠 및 상잠의 vitellin과 저기영동상의 이동도는 같았으나 면역학적인 특성에 있어서는 비동질성이었다. 3. 천잠 vitellin은 함량은 전체 가용성 난단백질의 46.0%였으며, 배자발생에 따른 vitellin의 변동은 산난후 8일까지는 같은 수준이었나, 10일 이후부터는 감소되는 경향을 보이다가 5개월된 난과 17개월된 난에서는 상당히 미량만이 검출되었다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제7권3호
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• pp.99-108
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• 2004

Vitellogenin (VTG) was purified from serum of $estradiol-l7{\beta}-treated rockfish$(Sebastes schlegeli) by precipitation with $EDTA-Mg^{2+}$ and ammonium sulfate and two step chromatography (anion exchange chromatography and gel permeation chromatography) was performed on FPLC system. Rockfish VTG (rfVTG) was characterized and its properties were determined. The monomers have apparent, molecular mass of about 188 kDa as indicated by SDS-PAGE. Amino acid composition analysis of rfVTG was similar to VTG from other oviparous teleosts. Cysteine and lysine were present at relatively high level. Leucine was present at relatively lower level than in other species. The N-terminal amino acid sequence was evaluated to identify rfVTG. Western blot analysis using an antibody against the purified VTG showed that the antibody reacted with both plasma of $estradiol-l7{\beta}-treated rockfish$ treated male and purified VTG, whereas there was no reaction with male serum of the control. An ELISA was developed using monoclonal and polyclonal antibodies against rfVTG. The assay range was 3.2 ng/mL and 1,000 ng/mL and the value of the intra and inter assay variations were within $9.7{\%}$ and $11.2{\%}$, respectively. Recovery rate was $96.8{\%}$. The sandwich ELISA could be useful for the detection of VTG and could be good for screening of estrogenic compounds.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제30권2호
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• pp.96-104
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• 1988

누에 난황단백질의 주성분인 난황소(vitellin)를 분리하고 그 면역반응적 특성과 난소 이식과의 관계 및 배발생중의 양적 변화를 조사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 누에의 용혈액 vitellogenin과 난황소는 원심분리에 이은 DEAE-cellulose column chromatography에 의해 거의 순수하게 분리되었으며 두 단백질의 polyacrylamide gel 전기영동상의 이동도는 같았다. 2. 누에의 난황소와 이의 전구물질인 용혈림프 vitellogenin은 면역반응적으로 서로 동질임이 확인되었고, 가잠의 근록곤충인 상잠(Bombyx mandarina)의 난황단백질에는 가잠의 난황소와 면역학적으로 같은 반응을 나타낸 항원이 있는 반면, 천잠(Antheraea yamamai)의 난황단백질에는 가잠과의 공통항원이 없었다. 3. 수누에에 이식한 난소에서 생성된 난황단백질에는 난황소가 결여됨이 확인되어 난황소의 합성에는 난소이외의 다른 암컷 기관에서 생성된 전구물질이 필요함을 나타내었다. 4. 배발생중의 난황소는 배자발육 후기에 주로 기관의 형성에 이용되어 배자발육 초기부터 꾸준하게 이용되는 난특이단백질(ESP)과는 이용상 다른 특성을 보였다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제8권4호
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• pp.213-219
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• 2005

Vitellogenin (VTG) was purified from the blood plasma of estradiol-17$\beta$ ($E_2$)-treated male marbled sole (Limanda yokohamae) using gel filtration and anion exchange chromatography. The purity of the marbled sole VTG (msVTG) was confirmed by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and N-terminal amino acid sequencing. The purified msVTG was used to produce monoclonal and polyclonal antibodies in mice and rabbits, respectively, and the specificity of the polyclonal antisera for msVTG was confirmed by Western blot analysis. The antibodies cross­reacted with a protein of molecular mass approximately 160 kDa in the plasma samples of mature female marbled sole. No cross-reactivity was observed with the plasma of male fish. A direct non-competitive sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed using the monoclonal anti-msVTG and polyclonal anti-msVTG antibodies, with purified msVTG as the standard protein. The values of the intra- and inter-assay variations were within the ranges of $8.l-9.8\%$ and $8.5-12.2\%$, respectively. The sensitivity was about 0.3 ng/mL. Serial dilutions of plasma from mature female sole reacted with the msVTG-antibodies in the sandwich ELISA, whereas the plasma from male fish did not. The results indicate that the maturation status of female marbled sole can be identified using a sandwich ELISA for msVTG.

• 한국양식학회지
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• 제21권4호
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• pp.285-293
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• 2008

본 연구에서는 동자개, Pseudobagrus fulvidraco의 난황단백질(Vitellin, Vg 난황단백전구체(Vitellogenin, Vg)를 분리하였고, 그 특성을 분석하였다. 난황단백질은 성성숙한 난소 난으로부터 gel filtration chromatography (Sephadex - G200)을 이용하여 분리되었다. 동자개의 난황단백질은 SDS-PAGE에서 분자량이 107 kDa인 1개의 subunit로 구성되어 있었고, 총 난황 단백질 분자량은 360 kDu으로_ 측정되었다. 난황단백전구체는 성숙한 수컷에 $E_2$를 삽입하여 유도하였고, anion exchange chromatography (Momo Q HR 5/5 column)을 이용하여 분리되었다. 분리된 난황단백전구체의 총 분자량은 450 kDa으로 계산되었고, 이는 SDS-PAGE하에서 110 KDa, 125 kDa와 147 kDa로 3개의 subunit로 구성되어져 있었다.

• 한국수산과학회지
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• 제25권5호
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• pp.432-442
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• 1992

동남참게, Eriocheir japonicus의 난황단백전구체 합성부위를 면역조직화학적인 방법으로 구명하기 위하여, 난황단백질을 정제하고, 이 단백질에 대한 항혈청을 제작하여 난황단백질에 대한 면역학적인 성질을 밝힌 후, 난황단백전구체의 항체가 존재하는 항 난황단백혈청을 사용하여 PAP(peroxidase-antiperoxidase)법으로 생식소, 간췌장, 근육조직을 대상으로 면역조직화학 반응을 시켰다. 성숙한 암, 수혈청에 대한 면역전기영동과 Ouch-terlony 면역확산 실험에 의하여 암혈청내에는 암 특이성혈청단백질이 있음이 밝혀졌다. 암, 수혈청에 대한 항혈청과 난황형성중인 암혈청에 대한 조난황단백추출액에 대하여 면역전기영동과 Ouchte-rlony 면역확산 실험을 행한 결과, 암 특이성혈청 단백질은 난황단백전구체임이 밝혀졌다. 조난황단백추출액으로 부터 DEAE 이온교환 chro-matography와 sepharose CL-4B gel 여과법에 의하여 난황단백질을 정제하였으며, 이 난황단백질의 분자량을 sepharose CL-4B gel 여과법에 의하여 추정한 결과 분자량은 약 245,000 dalton이었다. 또한 난황단백질은 면역학적인 분석에 의하여 난황 단백질에 대한 항혈청에는 난황단백전구체에 대한 항체가 존재하고 있음이 증명되었다. 난황단백질에 대한 토끼 항혈청을 이용하여 PAP법에 의한 면역조직화학반응을 시킨 결과, 난황형성중인 난모세포와 성숙한 암참게의 간췌장은 양성반응이 나타는데 반하여 난소내의 여포세포층과 난황형성전 난모세포, 근육층 그리고 성숙한 수참게의 간췌장은 전혀 양성반응이 나타나지 않았다. 따라서 본 종의 난황단백전구체의 합성부위는 간췌장임을 알 수 있다.

• 한국수산과학회지
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• 제30권3호
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• pp.473-479
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• 1997

범가자미, Verasper variegatus의 황단백 질을 증류수로 침전시킨 후 Sepharose CL-6B column chromatography에 의해 분리하였다. 조난황단백추출액에서 분리한 난황단백질이 암컷 특이 혈청단백질과 공통의 항원성을 가짐을 Ouchterony 면역확산 test와 면역전기영동으로 확인하였다. 분리한 난황단백질의 분자량은 약 550kD이었으며, 난황단백질을 구성하고 있는 subunits은 분자량이 각각 108, 85, 31kD인 3종의 major subunits와 103, 80kD인 2종의 minor subunits이었다. 분리한 난황단백질은 vitellin에 대한 항혈청을 이용하여 western blot으로 확인한 바, 면역화학적 반응을 나타냈다.