Serum samples from 123 males and 123 females collected by age in 1996 were analyzed for antibodies against surface antigen of Hepatitis B virus and C22-3, C200 antigens of Hepatitis C virus. Sera from the children under the age of 10 showed 30% seropositivity to the surface antigen of Hepatitis B virus, 33.3% in $10{\sim}19$ year group, 20% in $20{\sim}29$ year group, 17.6% in $30{\sim}39$ year group, 3.3% in $40{\sim}49$ year group, 5.9% in $50{\sim}59$ year group, 8,3% in $60{\sim}69$ year group, 2.9% in $70{\sim}79$ year group, but antibody could not found in $80{\sim}86$ year group. 12 out of 123 male sera were positive, 19 out of 123 female sera were positive and overall rate of positivity of antibody against surface antigen of Hepatitis B virus was 12.6%. Serum samples from peoples under the age of 30 had not antibody against C22-3, C200 antigens of Hepatitis C virus. The positivity rate was 2.9% in $30{\sim}39$ year group. 5 out of 30 sera from $40{\sim}49$ year age group were positive, and 3 positive sera showed extremely high titer (1:524,288) but the titers of two remaining sera were 1:32, 1:8,192 respectively. 5.9% was positive in $50{\sim}59$ year group, 8.3% in $60{\sim}69$ year group, 11.8% in $70{\sim}79$ year group but all negative in $80{\sim}86$ year group 6 out of 123 male sera were positive (4.9%), 9 out of 123 female sera were positive (7.3%). Overall rate of positivity of antibody against C22-3, C200 antigen of Hepatitis C virus was 6.1 %. None out of 246 sera had both antibodies against Hepatitis B virus and Hepatitis C virus.
형질전환 가금의 생산에 있어서 retrovirus vector를 이용하는 방법은 다양한 종류의 표적세포에 대하여 retrovirus 고유의 감염성에 의한 외래 유전자의 전이가 용이하고, 전이된 유전자가 진정염색질 영역 내로 선택적으로 도입될 수 있으며 유전적으로 안정성을 나타내므로 매우 효과적인 방법이다. 그러나 가금에서는 초기 배발달에 의한 급격한 세포의 수적 증가로 인해 고감염성의 virus의 획득이 요구되므로, 이를 위하여 virus stock의 농축에 있어 보다 안정적이고 pantropic인 vesicular stomatitis virus (VSV G) glycoprotein를 envelope로 가지는 pseudotyped retrovirus vector system을 이용하였으며, marker gene으로 eGFP gene이 발현되는 retrovirus를 생산하였다. 이 virus를 이용하여 여러 가지 표적세포와 primary culture한 CEF세포를 감염시켜 GFP의 발현을 확인하였으며, 농축한 virus stock은 stage X의 계란을 선택하여 windowed egg를 제작한 후 배하층에 주입하였다. 형질전환 닭은 정상 발생한 닭에 비하여 저조한 발생율을 보였으나 PCR을 이용하여 외래 유전자의 도입을 확인한 결과 100%인 것으로 나타났다. 또한 한 개체 내에서 유전자의 도입이 폐, 간, 정소, 소장 등의 여러 장기에서 확인되었다.
Background: Fluorescent antibody virus neutralization (FAVN) test is a standard assay for quantifying rabies virus-neutralizing antibody (VNA) in serum. However, a safer rabies virus (RABV) should be used in the FAVN assay. There is a need for a new method that is economical and time-saving by eliminating the immunostaining step. Objectives: We aimed to improve the traditional FAVN method by rescuing and characterizing a new recombinant RABV expressing green fluorescent protein (GFP). Methods: A new recombinant RABV expressing GFP designated as ERAGS-GFP was rescued using a reverse genetic system. Immuno-fluorescence assay, peroxidase-linked assay, electron microscopy and reverse transcription polymerase chain reaction were performed to confirm the recombinant ERAGS-GFP virus as a RABV expressing the GFP gene. The safety of ERAGS-GFP was evaluated in 4-week-old mice. The rabies VNA titers were measured and compared with conventional FAVN and FAVN-GFP tests using VERO cells. Results: The virus propagated in VERO cells was confirmed as RABV expressing GFP. The ERAGS-GFP showed the highest titer (108.0 TCID50/mL) in VERO cells at 5 days post-inoculation, and GFP expression persisted until passage 30. The body weight of 4-week-old mice inoculated intracranially with ERAGS-GFP continued to increase and the survival rate was 100%. In 62 dog sera, the FAVN-GFP result was significantly correlated with that of conventional FAVN (r = 0.95). Conclusions: We constructed ERAGS-GFP, which could replace the challenge virus standard-11 strain used in FAVN test.
우리나라 중부이남 지역에서 벼 오갈병에 의한 피가 현저히 늘어나고 있는 실정이다. 본시험에서는 매개충을 사용, 순수분리하고 이를 접종하여 증식한 후 Toyoda 등의 순화방법을 개선하여 순화하였다. 그 결과 순화된 바이러스 함량은 ml당 3.12mg 이었다. 순화된 바이러스를 Adjuvant와 함께 토끼에 10-14일 간격으로 5회 주사하여 항혈청을 제조한 결과 1/4,096의 높은 역가를 나타내는 항혈청이 제조되었다.
Kim, In-Seop;Park, Yong-Woon;Lee, Sung-Rae;Sung, Hark-Mo
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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제9권1호
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pp.65-68
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2004
The purpose of the present study was to examine the efficacy and mechanism of fraction IV cold ethanol fractionation and pasteurization (60$^{\circ}C$ heat treatment for 10 h), involved in the manufacture of albumin from human plasma, in the removal and/or inactivation of the hepatitis A virus (HAV). Samples from the relevant stages of the production process were spiked with HAV and the amount of virus in each fraction then quantified using a 50% tissue culture infectious dose (TCID$\_$50/). HAV was effectively partitioned from albumin during the fraction IV cold ethanol fractionation with a log reduction factor of 3.43. Pasteurization was also found to be a robust and effective step in inactivating HAV, where the titers were reduced from an initial titer of 7.60 log TCID$\_$50/ to undetectable levels within 5 h of treatment. The log reduction factor achieved during pasteurization was $\geq$4.76. Therefore, the current results indicate that the production process for albumin has sufficient HAV reducing capacity to achieve a high margin of virus safety.
Althaea rosea has been used in traditional Chinese medicine to treat numerous diseases, but no studies have investigated its anti-influenza properties to date. In this study, we investigated the anti-influenza effects of Althaea rosea. BALB/c mice orally pretreated with Althaea rosea ($200{\mu}L$, 0.1 mg/mL concentration in phosphate-buffered saline) and followed by infection of influenza A virus nasally showed higher survivability and lower lung virus titer against divergent subtypes of influenza A virus infection. We also found that oral administration of Althaea rosea elicited antiviral innate immune responses in serum, bronchoalveolar lavage fluid, small intestinal fluid, and the lungs. Taken together, these findings suggest that aqueous extracts of Althaea rosea are a potential candidate for use as an anti-influenza drug.
Papaya ringspot virus (PRSV) causes the most widespread and devastating disease in papaya. Isolates of PRSV originating from different geographical regions in south India were collected and maintained on natural host papaya. The entire coat protein (CP) gene of Papaya ringspot virus-P biotype (PRSV-P) was amplified by RTPCR. The amplicon was inserted into pGEM-T vector, sequenced and sub cloned into a bacterial expression vector pRSET-A using a directional cloning strategy. The PRSV coat protein was over-expressed as a fusion protein in Escherichia coli. SDS-PAGE gel revealed that CP expressed as a ~40 kDa protein. The recombinant coat protein (rCP) fused with 6x His-tag was purified from E.coli using Ni-NTA resin. The antigenicity of the fusion protein was determined by western blot analysis using antibodies raised against purified PRSV. The purified rCP was used as an antigen to produce high titer PRSV specific polyclonal antiserum. The resulting antiserum was used to develop an immunocapture reverse transcription-polymerase chain reaction (IC-RT-PCR) assay and compared its sensitivity levels with ELISA based assays for detection of PRSV isolates. IC-RT-PCR was shown to be the most sensitive test followed by dot-blot immunobinding assay (DBIA) and plate trapped ELISA.
A Total of 703 swine sera from 55 swine farrns (Mar. 1998 through Feb. 2001) were nation-wide collected for the presence of the antibody to influenza A virus H3 subtype isolate. The presence of antibody was tested by hernagglutination inhibition with chicken red blood cells and seropositiveness was determined by HI titer ${\geq}1$: 40. Sero-prevalence was evaluated based on year, season, region and age, respectively. In consequence, there were seme differences by year, season and region, respectively. High susceptibility was routinely observed in 60 and 90 day-old piglets. Therefore, it seems that the sero-prevalence to swine influenza virus H3 subtype isolate is useful for the prevention and control of swine influenza in Korea.
The present study demonstrated lymphocystis disease virus (LCDV) propagation through cytopathic effects (CPE) formation and LCDV detection in olive flounder fin (FFN) cells by polymerase chain reaction (PCR) and fluorescent antibody technique (FAT) methods. Tissue filtrates from the cluster cells produced CPE in FFN cells, which initially cells became enlarged and gradually underwent fusion en masse. Infectivity of culture grown LCDV using the FFN cells reached $10^{2.3}$$TCID_{50}$/ml at 4 days post infection and the highest titer was measured $10^{6.5}$$TCID_{50}$/ml at 12 days. The viral DNA was detected in the cell culture supernatants showing CPE and the CPE cells by PCR. Antigen specific strong fluorescence reacting with monoclonal antibody against the virus revealed the presence of viral antigen in the cytoplasm of infected FFN cells. These results suggest that the FFN cell line originated from the olive flounder has a susceptibility of the LCDV.
Recombinant polioviruses have been developed by many research groups for use as vaccine vector because poliovirus induces mucosal immunity as well as humoral immunity through oral uptake. We assessed the potential use of poliovirus as a T-cell epitope carrier. Recombinant poliovirus V129 5L was constructed to have a substituted T-helper epitope from the core protein of Hepatitis B virus at neutralization antigenic site 1 on its VP1 capsid protein. The recombinant virus replicated less efficiently than type 1 poliovirus Mahoney strain. The V129 5L formed a little smaller plaques than the Mahoney strain and showed some 1.25 log unit lower titer at the peak in the one-step growth kinetics though it had similar growth profile to that of the Mahoney strain. Since V129 5L recombinant virus was genetically stable even after 24 successive passages in HeLa cells, the antigenic site 1 on VP1 capsid protein was confirmed for its ability of carrying T cell epitope. The genetic stability of V129 5L also indicated that recombinant poliovirus can be successfully utilized for the development of the multivalent vaccines.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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