Poliovirus, coxsackievirus, and ecovirus isolates from environmental sources were compared with laboratory strains to determine their removal rate in the water treatment process. The recovery efficiencies of poliovirus, coxsackievirus and echovirus using positive strains ranged from $72{\sim}108%$. Regarding virus removal efficiency in water treatment of pilot-plants, about 99% of all of the viruses were removed in the sedimentation step and 100% of viruses were clearly removed through post-ozonation and BAC filteration. Using six cell lines tested viral sensitivity in cell line and showed different sensitivity as viruses. Polioviruses showed higher sensitivity in the BGMK cell line than other cells, and coxsackieviruses were detected in higher level in the BGMK and Vero cell lines. On the other hand, the RD cell line was useful in the isolation of ecoviruses.
Newcastle disease virus (NDV) vaccines were produced from Vero cells by using lively attenuated virus strain. The MOI of 0.1.' serum concentration of 2%. initial pH of 8.0. and infection time of 3 days were found to be optimum conditions for vaccine production. The treatment of polycation enhanced the virus production. When ascorbic acid was added as an antioxidant, NDV production was also enhanced. Utilization of $CaCl_2$ showed an inhibitory effect on the propagation of NDV. It was also found the ammonium ion concentration higher than 4mM inhibited virus production. Thus ammonium ion removal system was tried for the efficient production of NDV vaccine.
Getah virus is known as a causative agent of recognized febrile illness of horses characterized by fever, rash and edema. A serological survey indicated that hemagglutination inhibition antibody against Getah virus was detected in 34% of 464 racehorses from Korean Horse Affairs Association and 57% of 262 ponies from Cheju island, respectively. Several field strains of Getah virus isolated were from the racehorse that have been shown fever and febrile signs in 1989. The field isolates produced cytopathic effect in Vero, MA-104, BHK-21 cell cultures. Especially, they multiplied to the highest titer($10^6TCID_{50}/0.1ml$) in Vero cell cultures. When day-old mice were inoculated with field isolates by the intracerebral route, they showed a typical paralysis sign and died within seven days after inoculation. The guinea pig exhibited skin rash and edema, and died with neural signs after inoculation with the field isolates. In the cross neutralization test and indirect immunofuorescent assay, the field isolates were proved to be closely related to the Sakai strain of Getah virus antigenically.
Several methods for rapid and accurate detection of VTe-producing E coli were established. These methods contain beta-glucuronidase-secretion test, beta-haemolysis-production test in blood agar, verocytotoxicity test, and PCR. All of the VTe-producing strains made beta-haemolysis on 5% sheep blood agar. VTe-producing strains secreted beta-glucuronidase whereas 0157:H7 strains producing VTI or VTII did not secrete that enzyme. Verocytotoxicity test was established for rapid diagnosis. VTe detection was rapider in Vero cell suspension than Vero cell monolayer. In PCR, there was a positive result only in VTe-producing E coli, not in VTI or VTII-producing E coli. In this experiment, 165 strains of E coli were islated from feces or intestinal contents of post-weaning piglets showing nervous sign or diarrhea. And 20 strains of E coli that produced VTe were selected by verocytotoxicity test and PCR. According to these experiments, there was a direct correlation between verocytotoxicity test and PCR. And verocytotoxicity test is recommended as a routine diagnostic method and PCR does as a accurate diagnostic method to detect VTe-producing E coli.
Park, Se-Hoon;Choi, Jaydo;Kang, Ju-Il;Choi, Sang-Yun;Hwang, Soon-Bong;Kim, Jungsuh P.;Ahn, Byung-Yoon
Molecules and Cells
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v.21
no.1
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pp.21-28
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2006
The interferon-induced, double-stranded RNA (dsRNA)-dependent protein kinase PKR plays a key role in interferon-mediated host defense against viral infection, and is implicated in cellular transformation and apoptosis. We have isolated a cDNA of simian PKR encoding a product with 83% amino acid identity to the human homolog and showed that PKR expression is significantly attenuated in the Vero E6 African green monkey kidney cells devoid of type I interferon genes. A variant form of PKR lacking the exon 12 in the kinase domain is produced in these cells, presumably from an alternatively spliced transcript. Unlike wild type PKR, the variant protein named PKR-${\Delta}E12$ is incapable of auto-phosphorylation and phosphorylation of eIF2-${\alpha}$, indicating that the kinase sub-domains III and IV embedded in exon 12 are indispensable for catalytic function. PKR-${\Delta}E12$ had no dominant negative effect but was weakly phosphorylated in trans by wild type PKR.
In this study, the effects of low molecular weight chitooligosaccharides were assessed. Low molecular weight chitooligosaccharide evidenced no cytotoxicity in in vitro trials with the normal cell line, Vero E6(Africa green monkey kidney cell). The $IC_{50}$ of low molecular weight chitooligosaccharide was $923.20{\mu}g/m{\ell}$. Low molecular weight chitooligosaccharide exhibited in vitro antineoplastic activity in five human tumor(lung carcinoma, bladder carcinoma, colon carcinoma, stomach carcinoma, breast carcinoma) cell lines. The $IC_{50}$ values of low molecular weight chitooligosaccharide on A549, J82, SNU-C4, SNU-1 and ZR75-1 were $477.42{\mu}g/m{\ell}$, $480.40{\mu}g/m{\ell}$, $436.84{\mu}g/m{\ell}$, $373.55{\mu}g/m{\ell}$, and $539.95{\mu}g/m{\ell}$, respectively.
Korean isolate, porcine epidemic diarrhea virus (KPEDV-9) was adapted through serial passages in vero cell. The viral yield reached up to $10^{5-6}$$TCID_{50}/ml$ at the passage level of 90th. The cell adapted virus was characterized through genetic and morphological examinations. The RNA extracted from virus infected cell revealed the presence of RNA band with molecular size of >20Kb. The electron microscopic examination on purified virus showed the pleomorphic appearance of enveloped particles with 5-10nm surface projections, which fit with the shape of coronavirus. The etiological survey on swine diarrhea by immunofluorescence test(FA) indicated 17.5% positive rate on the PEDV infection. In addition, the incidence were detected both in piglets within two weeks old as well as fattening pigs. Serological survey by ELISA revealed the overall 45% positive result, thus, indicating the PEDV infection are widespread throughout this country.
The present study was carried out to evaluate whether the coculture system of human embryos with Vero cells can improve the quality of embryo or overcome the repetitive implantation failures in order to obtain pregnancy. From January to December 1996, a total 202 cases which patients with the problems of repetitive implantation failures (group I) or those with the poor embryonic quality in their previous cycles (group II) was analysed. The quality of cocultured embryo, pregnancy, on-going and implantation rates between coculture and control groups were compared. Of 93 cases in group I, coculture was performed in 34 cases and conventional IVF for the rest. Of 109 cases in group II, 36 for coculture and 73 for conventional IVF. In group I, pregnancy, on-going and implantation rates in coculture group (14/34 (41.2%), 9/34 (26.5%), 16/81 (19.8%), respectively) were higher than those of control (11/59 (18.6%), 8/59 (13.6%), 12/152 (7.9%), respectively). There is significance in the pregnancy and implantation rates (p=0.028 and p=0.015). In group II, pregnancy, on-going and implantation rates in coculture group (8/36 (22.2%), 5/36 (13.9%), 8/87 (9.2%), respectively) were higher than those of control (5/73 (6.8%), 3/73 (4.1%), 3/158 (1.9%), respectively). Like the result of group I, there is significance in the pregnancy and implantation rates (p=0.028 and p=0.022). Coculture system with Vero cells works well in the groups of the two indications. Although the case of 3 day-coculture was small as 15 cases in group II, 3 day-coculture improved pregnancy rate (4/15 (26.7%)). Therefore, 3 day-coculture with assisted hatching is recommended to the patients with poor embryonic quality. In conclusion, coculture system with Vero cells can be suggested as an effective method which improves pregnancy rate in those who have repetitive implantation failures or whose embryonic quality was poor in their previous cycles.
Ribosome-inactivating protein (RIP) from Mirabilis jalapa L. leaves has cytotoxic effects on breast cancer cell lines but is less toxic towards normal cells. However, it can easily be degraded after administration so it needs to be formulated into nanoparticles to increase its resistance to enzymatic degradation. The objectives of this study were to develop a protein extract of M. jalapa L. leaves (RIP-MJ) incorporated into nanoparticles conjugated with Anti-EpCAM antibodies, and to determine its cytotoxicity and selectivity in the T47D breast cancer cell line. RIP-MJ was extracted from red-flowered M. jalapa L. leaves. Nanoparticles were formulated based on polyelectrolyte complexation using low viscosity chitosan and alginate, then chemically conjugated with anti-EpCAM antibody using EDAC based on carbodiimide reaction. RIP-MJ nanoparticles were characterised for the particle size, polydispersity index, zeta potential, particle morphology, and entrapment efficiency. The cytotoxicity of RIP-MJ nanoparticles against T47D and Vero cells was then determined with MTT assay. The optimal formula of RIP-MJ nanoparticles was obtained at the concentration of RIP-MJ, low viscosity chitosan and alginate respectively 0.05%, 1%, and 0.4% (m/v). RIP-MJ nanoparticles are hexagonal with high entrapment efficiency of 98.6%, average size of 130.7 nm, polydispersity index of 0.380 and zeta potential +26.33 mV. The $IC_{50}$ values of both anti-EpCAM-conjugated and non-conjugated RIP-MJ nanoparticles for T47D cells (13.3 and $14.9{\mu}g/mL$) were lower than for Vero cells (27.8 and $33.6{\mu}g/mL$). The $IC_{50}$ values of conjugated and non-conjugated RIP-MJ for both cells were much lower than $IC_{50}$ values of non-formulated RIP-MJ (>$500{\mu}g/mL$).
A total of eight strains of avian reoviruses were isolated from chickens with arthritis or stunted growth. The isolations were made from broilers or broiler breeders under 12 weeks of age. The viruses had a typical morphology of reoviruses with double capsid layers and 81nm of diameter. In agar gel precipitation tests, the isolates reacted with antisera prepared against S-1133 or R-1 strains of avian reoviruses and cross reacted with S-1133 antigen. They did not agglutinated RBC's from day-old chicks, adult chickens, guinea pigs, and horses. The isolates showed strong resistance against the treatments of chloroform, IUdR, and heat, When infectivities of the viruses were titrated in cell cultures of chicken embryo fibroblast, chicken embryo liver, and Vero cells, similar end points reached four to five days after inoculation, regardless of tell types and virus inoculation time, either inoculated simultaneously at the time of cell seeding or on confluency. Mean times of mortality of chicken embryos inoculated with the isolates via the chorioallantoic membrane ranged from 54 to 59 hours and that of S-1133 strain was 73 hours.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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