This experiment was performed to study the ultrastructural changes of the juxtaglomerular cell of mice following subcutaneous injection of heavy metallic agents. Male mice were divided into normal and experimental groups. The mice were subcutaneouly injected with $HgCl_2$ (2mg, 5mg or 10 mg/Kg/BW) or with $K_{2}Cr_{2}O_7$(5 mg, 10 mg or 20 mg/Kg/BW). Mice were sacrificed on 6 hours, 3 days and 14 days after the injection. Kidneys were fixed in the 2.5% glutaraldehyde-1.5% paraformaldehyde solution, followed by refixation in the 1% osmium tetroxide solution. Dehydrated blocks were embedded in araldite mixture. The sections were cut on a LKB-V ultratome, and ultrathin sections stained with uranyl acetate and lead citrate were observed with JEM 100CX II electron microscope. The results were as follow: 1. Juxtaglomerular cell of the experimental groups showed some alterations, especially in the structures of protein synthesis including dilations and degradations of granular endoplasmic reticula, atrophy of Golgi complex, and numerous free ribosomes in the cytoplasm. 2. Juxtaglomerular cells treated groups showed a number of vacuoles, protogranules and some myelin figures in the cytoplasm, especially in the earlier groups. 3. Juxtaglomerular cells of treated groups, contained a large number of secretory granules showing variable electron densities and pleomorphism in later groups (2 weeks). From the above results, it was concluded that, the mercuric chloride or potassium bichromate induces acute renin release from juxtaglomerular cells of the mice, but many juxtaglomerular cells may secrete prematured secretory granules, or the synthetic system of the cell can not perform normal function.
닭(Gallus domesticus B.)의 視細胞 外절과 內절의 移行部에는 他 脊椎動物에서 흔히 觀察되는 纖維가 極히 적었는데 이것은 鳥類視細胞의 特徵이며 內절에 많은 미토콘드리아가 存在함은 모든 脊椎動物에서와 같은 現象이지만 鳥類에서는 內部 절의 構造가 多樣하게 變化되어 나타나고 있다. 視細胞核 部位에 存在하는 外境界膜의 屈曲이 심한 것도 닭에서뿐 아니라 참새나 비둘기 等 鳥類에서 보이고 있는 特徵的인 構造이지만 外절의 層板 構造라든가 色素上皮細胞, 外顆粒層과의 連結部位등 一般的인 視細胞의 構造들은 거의 모든 脊椎動物에서 비슷하게 나타나고 있음을 알 수 있었다. 一般的인 電顯方法으로 實驗하였으나 보통 쓰이고 있는 phosphate buffer 代身 cacodylate buffer를 사용한 것이 다를 뿐이다.
골수내 정상적인 혈구형성은 줄기세포와 주위의 미세환경 사이에 일어나는 상호작용에 의해서 좌우된다고 알려져 있다. 이때 미세환경은 성장요소, 기질세포 및 기질세포가 분비한 세포외기질의 복잡한 망상구조로 이루어져 있다. 골수의 세포외기질은 거대분자로 구성되어 있으며 이중 구성요소의 일부인 당단백이 혈구형성의 조절에 주요한 요소가 된다고 많은 학자들이 주장해 왔다. 골수의 기질을 이루고 있는 망상세포, 지방세포, 섬유모세포, 혈관내피세포 및 혈관주위세포 등이 분비하는 세포외기질에 여러종류의 laminin 동형체가 함유되어 있으며 여러 종류의 혈구형성에 주요한 역할을 한다는 연구보고가 있다. 저자는 골수내 종양을 치료하기 위해 빈번히 사용되는 cyclophosphamide가 골수에 미치는 영향을 규명하고자 실험동물의 혈구형성에 영향을 미치는 laminin-1의 발현의 변화를 골수의 기질세포에서 추적하고자 하였다. 건강한 SD계 흰쥐를 실험동물로 사용하여 cyclophosphamide를 체중 kg당 75 mg을 복강내로 1회 투여하고 3일, 1주, 3주 및 5주 후 희생하여 골수조직을 채취하여 면역조직염색법으로 염색하여 laminin-1의 골수내 분포의 변화를 관찰하였고, 일부 조직은 전자현미경표본을 제작하여 1차 항체(rabbit anti-laminin)로 반응시킨 후 직경 12 nm의 금과립이 섞인 제2차 항체(biotinylated goat anti-rabbit IgG)로 다시 반응시키고 uranyl acetate로 단일염색 후 전자현미경으로 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. Cyclophosphamide 투여 후 3일 경과군의 흰쥐 골수조직은 정맥동이 확장 되었고, 일부 조직이 괴사되었으며, 혈구형성세포가 감소되었다. 망상조직과 지방세포사이의 조직에서 laminin-1의 면역반응이 강하게 나타났다. 2. Cyclophosphamide 투여 후 1주, 2주 및 5주 투여군의 골수에서 laminin-1의 약한 면역반응이 기질조직에 계속되었고 혈구형성세포의 수는 증가되었다. 3. Laminin-1의 면역반응을 나타내는 금과립은 cyclophosphamide 투여 3일군의 골수 기질세포에서 가장 많은 수가 관찰되었고, 투여 1주, 3주 및 5주군에서는 금과립의 수량이 감소되었다. 이상과 같은 실험결과는 cyclophosphamide가 흰쥐에 투여되었을 때 골수의 혈구형성의 미세환경을 유지하는 기질세포의 laminin-1의 발현을 증가시키는 것으로 생각되었다.
이 실험은 Ehrlich 종양세포를 이식한 후 5-fluorouracil, mitomycin 및 acriflavine-guanosin 복합제(AG60)을 투여하였을 때, 위점막 점액상피세포의 미세구조적 변화를 연구하고자 시행하였다. 실험동물로는 ICR생쥐를 사용하였으며 정상대조군 이외의 종양대조군, 5-fluorouracil, mitomycin C 및 AG60 투여군의 동물들은 샅부위 피부밑조직에 각각 $1{\times}10^7$의 Ehrlich 종양세포를 이식하였다. 각각의 실험군은 종양세포를 이식한 다음날부터 5-fluorouracil (30 mg/kg), mitomycin C ($400{\mu}g/kg$) 및 AG60 (30 mg/kg)을 격일 간격으로 한번씩 피부밑조직에 주사하였다. 종양대조군은 종양세포이식 후에 0.2 mL의 생리식염수를 피부밑조직에 주사하였고 정상대조군은 종양세포를 이식하지 않은 동물을 사용하였다. 종양대조군을 비롯한 실험군은 생리식염수 또는 각각의 약제를 격일 간격으로 7회씩 투여한 다음날, 에테르(ether) 마취하에 앞배벽을 열어 위조직을 절취하였다. 절취한 조직은 2.5% 글루타르알데히드(glutaraldehyde)-1.5% 파라포름알데히드(paraformaldehyde) 혼합액에 고정한 후, 1% 오스뮴사산화물(osmium tetroxide)용액에 다시 고정한 후 탈수과정을 거쳐 애럴다이트(araldite) 혼합액에 포매하였다. 포매된 위점막 조직은 얇은 절편을 만들었으며, 각 절편은 우라닐아세테이트(uranyl acetate)용액과 구연산납(lead citrate)용액으로 대조염색한 후, 전자현미경으로 비교 관찰하였다. 5-fluorouracil 투여군은 종양대조군에 비해 점액상피세포에 수초구조(myelin figure)가 자주 관찰되고, 분비과립이 세포질을 포함한 막성구조에 싸여 속공간으로 함께 분비되는 부분분비현상이 보일 정도로 손상을 받았다. 그리고 mitomycin C 역시 수초구조가 자주 관찰되고 분비과립을 함유한 세포질이 속공간으로 돌출되는 등의 미세구조적 변화를 보였다. 그러나 AG60의 경우는 수초구조와 다소포체가 비교적 자주 관찰되는 외에는 별다른 미세구조적 변화를 관찰할 수 없었다. 이상의 결과를 종합해보면 mitomycin C, 5-fluorouracil 및 AG60을 반복 투여 하면 위점막 점액상피세포의 분비기능이 억제되었음을 시사하는 미세구조적 변화를 보였다. 그러나 세포의 손상 정도가 mitomycin C와 5-fluorouracil 투여군에 비해 AG60 투여군에서 매우 경미하였으므로 AG60은 위점막 점액상피세포의 분비기능에 큰 손상을 주지 않는 약제라고 생각된다.
A single injection of cadmium chloride (3.75 mg/kg) was made into the peritoneal cavities of albino rats. The cortices of kidney were obtained from the experimental animals at 3 hr., 6 hr., 12 hr., 24 hr. and 36 hr. after administration of cadmium chloride, respectively. The specimens of each experimental animal were prefixed in 2% glutaraldehyde-4% paraformaldehyde solution for $2{\sim}4$ hours, and these specimens were post-fixed in 1% osmic acid. After fixation, the specimens were dehydrated with alcohol and acetate and embedded in Epon 812. Ultrathin sections, $600{\sim}800{\AA}$ thickness were made and stained with uranyl acetate and lead citrate. And all the preparations were observed with Hitachi-600 transmission electron microscope. The results obtained were as follows: 1. The main changes in ultrastructures of the glomeruli observed at 3 hr. after cadmium chloride administration include loss of filtration slit and fenestrae of capillary endothelium that was resulted from thickings of the basal lamina and fusion of pedicels of the podocytes. At 12 hr. after cadmium chloride administration the Bowman's capsules were mostly filled with abnormally thickened and fused pedicels. After 24 hr. however, the only recognized change was loss of fenestrae of the capillary endothelium. And the ultrastructure of the glomeruli were almost normal in 36 hr. after cadmium chloride treatment. 2. At 3 hr. after treatment with cadmium chloride, in the renal tubular cells the vesicles and vacuoles increased in number at the apical portion, of the tubular epithelial cells, the basal infoldings were reduced and the basal lamina was thickened. After 12 hr., a number of phagosomes appeared at the apical portion and the cisternae of rough endoplasmic reticulum were swollen. At 24 hr. after cadmium chloride administration irregularly shaped mitochondria were observed in the apical area, and mitochondria with swollen cristae were found at the basal portion. And after 36 hr. The ultrastructures of the epithelial cells appeared almost normal except for a moderate increase in the number of vesicles and vacuoles. Consequently it is suggested that in albino rats, cadmium chloride induces acute reversible degenerative changes in the glomeruli as well as in the epithelial cells of the proximal convoluted tubules.
포유류 장생 상피세포의 하나인 파네스세포(Paneth cell)는 여러 가지 금속류를 함유하고 있으며, 생체가 과잉의 이들 금속류에 노출되거나 부족할 때에 장 내강을 통해 제거하거나 흡수함으로써 금속류의 항상성에 기여한다고 알려져 있다. 이번 연구는 이러한 연구보고에 근거하여 금속류중에서 zinc를 실험적으로 과량투여한 후 파네스세포내 zinc의 분포에 어떤 변화가 초래되는 지를 광학 및 전자현미경적 autometallography(AMG)로 관찰함으로써 파네스세포의 zinc와 관련된 세포생물학적 기능을 규명하고자 하였다. Wistar 랫드에 체중 당 20mg의 zinc chloride를 생리식염수 5ml에 녹여 복강주사한 후 2시간에 이르러 0.1 M phosphate buffer(PB)에 녹인 0.5% sodium sulphide-3% glutaraldehyde 흔합액으로 관류고정하였다. 회장(ileum)의 일부를 Dry Ice나 $CO_2$ gas로 얼린 후 cryostat을 이용하여 $20{\mu}m$ 두께의 조직절편을 만들어 및 단계의 AMG법을 시행하였다. 이와는 별도로 EM용으로 선택된 회장절편은 일련의 전자현미경 표본제작과정을 거쳐, 100nm두께의 thin section을 만들어 uranyl-lead 이중염 색 추 전자현미경으로 관찰하였다. Zinc를 투여한 동물에서 관찰된 소견은 생리식염수만을 투여한 대조군의 것과 비교할 때 큰 차이를 보였다. 우선 대조군에서는 파네스세포의 꼭대기(apex)부위에서 낱알모양을 띤 AMG양성반응 구조물(AMG grain)들이 분비과립과 사이토졸(cytosol)에서 관찰되었고, 세포사이공간에서도 적은 양의 grain이 분포하고 있었다. 반면 zinc를 투여한 랫드의 파네스세포에서는 AMG 입자가 이상의 부위에서 훨씬 많은 양의 grain이 분포해 있었으며, 특히 분비과립에서는 가장 높은 농도로 관찰되었다. 더욱이 대조군에서 관찰되지 많았던 장샘의 분비관(Lieberkuhn crypt)및 고유판 혈관의 내에서도 많은 grain이 관찰되었다. 이상의 결과를 요약하면 과량의 zinc에 노출된 생체는 혈관을 경유하여, 파네스세포의 분비과립을 매개로 하여, 장관의 내강쪽으로 과잉의 zinc 를 피내고 있는 모습을 보인다. 따라서 연구자는 파네스세포가 생체내 zinc의 양을 조절하는데 중요한 역할이 있을 것으로 본다.
It is well known that dichlorvos (DDVP), an organophosphate insecticide in common use, is so easily and rapidly hydrolyzed and excreted that it has usually little toxic effect on human body. In these days, however, it is widely used as an industrial and domestic insecticide and as an anthelmintic agent for animals, so that the accident of chemical poisoning occurs frequently. DDVP acts as a powerful inhibitor of carboxylic esterase, which can cause accumulation of acetylcholine at the synapses so paralysis of muscle and the transmission failure in cholinergic synapses dueing to desensitization of acetylcholin receptor may occure. Moreover accumulation of the acetylcholine brings about the elevation of the cyclic-AMP, which alters the cellular metabolisms of nucleic acid, carbohydrate, protein and lipid. Present study has undertaken to investigate the cardiotoxic effect of DDVP by electron microscopic study. A total of 30 Sprague-Dawley strain rats, weighing about 250gm were used as experimental animals. 2mg/kg/day of DDVP is intraperitonealy injected 3 times with intervals of every other day. On 1 day, 3 days, 5 days, 7 days and 14 days after drug administration, the animals were sacrified by cervical dislocation. Left ventricular cardiac muscles were resected and sliced into $1mm^3$. The specimens were embedded with Epon 812 and prepared by routine methods for electron microscopical observation. All preparations were stained with lead citrate and uranyl acetate and then observed with Hitachi-600 transmission electron microscope. The results were as follows: 1. In the cardiac muscle of DDVP treated rats, mitochondria with disorganized double membrane and mitochondrial crista, and vacuole formation in mitochondrial matrix were observed. But structures of mitochondria were recovered to normal in 14 days group. 2. In the cardiac muscle of DDVP treated rats, cisternae of sarcoplasmic reticulum were dilated and sacculated. But these changes were recovered to normal in 14 days group. 3. In the cardiac muscle of DDVP treated rats, glycogen particles around damaged myofibrils were decreased. But amount of glycogen particles were restored in 14 days group. 4. In the cardiac muscle of DDVP treated rats, disruption and discontinuation of myofilaments and disorganization of Z-disc were observed. But the structures of myofibrils were recovered to normal in 14 days group. It is consequently suggested that DDVP would induce the reversible degenerative changes on the ultrastructures in cardiac muscle of rat.
Xerostomia and xerophthalmia are delicate or serous side effects, occuring when the radiotherapy is administered to the head and neck cancer patient. It is known that the cause of the above side effect is radiosensitivity of serous cells. In this study, the ultrastructural features of the parotid glands of the X-irradiated rats were observed. Sprague-Dawley rats weighing 200-250g each were anesthetized with sodium thiopental, and placed on the Mitsubishi linear accelerator. Only the head and neck areas of animals were exposured at the distance of 80cm, within the area of $30X30cm$, in the depth of 1cm, with the speed of 200R/min. Total doses applied were 3,000R or 6,000R depending on the experimental groups. Animals were sacrificed on the 6th hour, 2nd day and 6th day after the irradiation. Parotid glands were fixed in the 2.5% glutaraldehyde-1.5% paraformaldehyde solution, and followed by refixation in the 1% osmium tetroxide solution. Dehydrated blocks were embedded in araldite mixture, and ultrathin sections were cut. Sections were contrasted with the solution of uranyl acetate and lead citrate, and observed with JEM 100 CX-II electron microscope. The results were as follows: 1. Normal parotid acinar cells are two types; the light and the dark acinar cells. The light acinar cell contains dense secretory granules, whereas dark acinar cells contains granules of medium density with some darker spots within them, or other cells contain granules of medium density with darker rims. 2. Six hours after the irradiation, many acinar cells were degenerated showing variable stages of cytolytic bodies, light bodies, or dense degenerations. Within the acinar cell, Golgi apparatus and granular endoplasmic reticula were most severely altered elements. Granules showed more contrasting densities and irregularities. 3. Two days after the irradiation, some cytolytic bodies, and focal lucent degeneration of cytoplasm, and fine granular alteration of cytoplasmic matrix were pronounced. But other elements including secretory granules are rather looked unlatered. 4. Six days after the irradiation, most severe alterations were seen. Many intracellular canaliculi (or secretion figures), quanta of cytoplasm containing secretion antecedants, severely irregular luminal border, and again contrasting density of secretory granules showing tigroid spots or dense rims were noted. And myoepithelial degenerations were observed not uncommonly. 5. Irregular densities of secretory granules were interpreted as abnormal components of protein or carbohydrate portion are synthesized or abnormally metabolized under severe X-irradiation. 6. Myoepithelial degeneration and related alteration of nerve endings, etc., were suggested as the other causes of xerostomia following X-irradiation. 7. It is requested that radiation doses should be arranged, considering in mind not only the sensitivity of acinar cells but also the myoepithelial and neural functions.
To investigate the histogenesis of tracheal epithelium in Sprague-Dawley strain rat, the author has used the fetal rats at the 16th, 18th, 20th and 22nd prenatal day and neonatal rats at the 1st and 7th day as well as rats at age of 5, 10 and 15 weeks after birth as experimental animals. Specimens were double stained with uranyl acetate and lead citrate for electron microscopic study. The results obtained were as follows; 1. At the 16th day of gestational age, ciliated cells were found in tracheal epithelium and light and dark ciliated cells possessing numerous mitochondria and smooth endoplasmic reticulum in the cytoplasm at the 22nd day of gestational age of the rat are observed. 2. At the 16th day of gestataional age, basal cells lying upon the basement membrane and having large numbers of glycogen particles in the cytoplasm, were found and at the 22nd day of gestational age, basal cells possessing numerous polysomes in the cytoplasm were observed. 3. At the 20th gestational age of the rat, microvillous cells possessing many rough endoplasmic reticulum and mitochondria as well as microvilli protruding into the lumen were found in tracheal epithelium. 4. At the 5th week after birth brush cell having profound filamentous strands and many pinocytic vesicles in the cytoplasm, was visible in the tracheal epithelium. 5. At the 15th week after birth large proportions of tracheal epithelium were lined with ciliated cells. Cosequently it is suggested that pseudostratified ciliated columnar epithelium was differentiated at the 16th day of gestational age, in addition cytoplasmic organelles of the microvillous and basal cells were matured at the 20th and 22nd gestational age, respectively and most of the part of the tracheal epithelium was lined with ciliated cells at the 15th week after birth.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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