목 적: 사람의 제대유래 줄기세포 (HUC)와 양막유래 줄기세포 (HAM)를 간유사세포로 분화 시키고자 하였다. 연구방법: 산모의 동의아래 만삭 정상 산모로부터 양막 및 제대를 얻고 줄기세포를 분리, 배양하였다. 분리된 세포의 줄기세포로서의 특성을 규명하기 위하여 RT-PCR, 세포면역화학 분석 그리고 중배엽성세포로의 분화능 실험을 하였다. 또한 이들 줄기세포를 분화 배양액에서 간유사세포로 분화 유도 후, 간세포 특이 유전자 발현, 알부민 ELISA, 알부민에 대한 면역블로팅 및 세포면역화학염색 그리고 PAS 염색을 시행하였다. 결 과: 사람의 양막 및 제대로부터 세포를 분리하여 줄기세포로서의 특성을 조사하고, 이들 세포의 지방세포, 연골세포, 골아세포로의 분화능력을 확인하였다. 동일한 분화 배양액에서 HUC과 HAM을 간유사세포로 분화시킨 결과 HUC이 모든 조건에서 HAM보다 알부민과 요소를 더 많이 합성 분비하였다. 간유사세포로의 분화능력이 더 좋은 것으로 나타난 HUC을 가지고 최적의 분화를 유도한 결과 $1.2{\pm}0.8\;{\mu}g/mL$의 알부민을 합성 분비하였고, $8.9{\pm}1.2\;mg/dL$의 요소를 합성 분비하였다. 결 론: HUC과 HAM 모두 알부민을 분비하는 간유사세포로 분화할 수 있었으며, HUC이 더 잘 유도되는 것으로 관찰되었다. 이러한 결과로써 HUC과 HAM을 간질환 환자의 간세포 이식 치료에 필요한 세포치료제로써 이용할 수 있을 것으로 생각된다.
목 적 : 산모 혈청 및 그들의 신생아 제대혈청의 Viral Capsid Antigen에 대한 IgG 항체(VCA IgG)와 Epstein Barr Virus Nuclear Antigen에 대한 IgG 항체(EBNA IgG)의 양성율 및 항체가 수준, 항체의 경태반 전이율에 대해 알아보고자 한다. 방 법 : 1997년 1월 1일부터 5월 30일까지 고려대학교 안산병원에 정상분만을 위해 내원한 산모와 그들의 신생아 제대에서 혈액을 채취하여 효소결합면역흡착검사(Enzyme Linked Immunosorbent Assay) 방법인 ETI-VCA-G Kit와 ETI-EBNA-G Kit (Sorin Biomedica Diagnostics S.p.A, Saluggia, Italy)를 이용하여 VCA IgG와 EBNA IgG를 측정하였다. 항체가는 정해진 방법에 따라 임의 단위(Arbitrary Unit : AU)로 구하였으며 20AU/m1 이상인 경우 양성으로 판정하였다. 신생아 중 재태 연령 37주 미만, 또는 출생 체중 2,500g 미만인 경우는 대상에서 제외하였다. 결 과 : 1) 대상 산모와 신생아는 42쌍(남아 23명, 여아 19명)이었으며 산모 평균 연령 $29.5{\pm}3.0$세, 신생아 재태 연령 $39.9{\pm}1.0$주, 신생아 출생 체중 $3.48{\pm}0.39kg$이었다. 2) VCA IgG 양성률은 산모, 신생아 모두 100%였고 항체 역가는 산모 $260{\pm}201AU/ml$, 신생아 $278{\pm}252AU/ml$였으며 통계학적으로 유의한 차이는 없었다. 산모와 신생아의 VCA IgG 역가 사이에는 유의한 상관관계가 있었으며(r=0.5214, P<0.001) 산모의 역가와 산모 연령, 신생아 제대의 역가와 산모 연령, 재태 연령, 출생 체중 사이에는 유의한 상관관계가 없었다. 3) EBNA IgG 양성율은 산모, 신생아 모두 100%였으며 항체 역가는 산모 $132{\pm}94AU/ml$, 신생아 $149{\pm}104AU/ml$였으며 통계학적으로 유의한 차이는 없었다(P=0.15). 산모와 신생아의 EBNA IgG 역가 사이에는 유의한 상관관계가 있었으나(r=0.7244, P<0.001), 산모의 역가와 산모 연령, 신생아 제대의 역가와 산모 연령, 재태 연령, 출생 체중 사이에는 유의한 상관관계가 없었다. 4) 산모의 VCA IgG와 EBNA IgG 역가 사이에는 유의한 상관관계가 없었다. 결 론 : 산모와 신생아 제대혈의 VCA IgG와 EBNA IgG는 양 군 모두 100%의 양성율을 보였으며, 각각의 역가도 산모와 신생아 모두 비슷한 수준을 보였다.
Umbilical cord blood (UCB), a rich source of hematopoietic stem/progenitor cells, has been proposed as an alternative to bone marrow and peripheral blood for transplantation treatment. Ex vivo expansion of cord blood stem cells could make the use of cord blood transplant feasible even for adult patients. However, the optimal cytokine cocktail for expansion of stem cells is yet to be established. This study compares proliferation, apoptosis, and telomerase activities in human cord blood stem cells cultured ex vivo with FLT3 ligand (FL)/thrombopoietin (TPO) or FL/TPO/stem cell factor (SCF), with a view to determine optimal combination of cytokines. CD34+ cells were cultured in DMEM containing either FL (50 ng/ml) and TPO (10 ng/ml) (FT group) or FL (50 ng/ml), TPO (10 ng/ml) and SCF (50 ng/ml) (FTS group). The cell proliferation rate was ten times higher in the FTS group. Although cells cultured with the two different combinations of cytokines were maintained for a long term (up to 8 weeks), a large number of cells underwent differentiation during this period. Cells cultured in FTS displayed lower levels of apoptosis compared to those of the FT group during the Initial 7 days of culture. The CD34+ fraction in both groups was markedly decreased to $21-30\%$ , and only $5-6\%$ was detected at 14 days of culture. Telomerase activity detected in human CD34+ cord blood at low levels was upregulated during the early phase of culture and decreased to baseline levels in the later phase. The telomerase activity of cord blood cultured in FT was lower than that of the FTS group. Our results suggest that, on adding stem cell factors to the FT cytokines, cultured CD34+ cord blood cells display a greater degree of cell proliferation and decreased apoptosis. However, during CD34+ cord blood cell culture, a Barge number of cells undergo differentiation, indicating that more potent novel cytokines or new culture conditioning methods should be developed to maintain their ability to engraft and sustain long-term hematopoiesis.
배경: 제대 조직은 간엽줄기세포(mesenchymal stromal cells, MSCs)의 유망한 공급원 중 하나이다. 본 연구에서는 동결 보관한 제대 조직에서 유래한 간엽줄기세포의 특성을 신선 제대 조직에서 유래한 간엽줄기세포와 비교함으로써, 제대 조직을 동결한 보관 후 해동하여 간엽줄기세포를 획득하기 위해 제대 조직의 동결 보관 가능성을 제시하고자 하였다. 방법: 각각의 제대 조직을 두 가지 크기($1{\sim}2mm^3$과 0.5 cm)로 처리하여, 두 가지 동결 보존제(자가제대혈장과 RPMI 1640)를 사용하여 액체질소에 동결 보관하였다. $1{\sim}2mm^3$로 잘게 자른 신선 제대 조직을 대조군으로 하였다. 1주일 후 해동하여 세포 배양하였으며, 0.5cm 크기로 동결 보관한 제대 조직은 해동 후 $1{\sim}2mm^3$로 잘게 세포 배양하였다. 각각의 경우에 수확한 세포의 수와 생존율, 세포 증식능, 세포표면항원을 분석하였으며, 배양액에 존재하는 다양한 성장인자(EGF, IGF-1, PDGF, TGF-${\beta}$, bFGF, VEGF)를 측정하였다. 결과: 11개의 제대를 대상으로 하였다. 자가제대혈장을 동결 보존제로 사용한 경우보다 RPMI 1640을 동결 보존제로 사용한 경우에 세포 획득율이 높았으며, 동결 전에 $1{\sim}2mm^3$로 잘게 잘라 동결 보존한 제대 조직보다는 0.5 cm 크기로 동결하였다가 해동 시 잘게 자른 제대 조직에서 세포 획득율이 높았다. 신선 제대 조직과 동결 제대 조직에서 유래한 세포들 간에 증식능의 차이는 없었다. 신선 제대 조직의 배양액보다 RPMI 1640을 이용하여 동결 보관한 제대 조직의 배양액에 성장인자가 더 많이 존재하였다. 결론: 본 연구 결과, 동결 보관한 제대 조직에서 간엽줄기세포뿐만 아니라 배양액의 성장인자도 얻을 수 있었으며, 제대혈을 동결 보관하는 것처럼 향후에는 간엽줄기세포와 성장인자를 필요한 시점에 얻기 위해 제대 조직을 동결 보관하는 것도 가능해질 것으로 기대된다.
The most common abnormality of the umbilicus in the foal is the patent urachus. Patent urachus may be a congenital or acquired condition in foals in which the urachus fails to close spontaneously at or shortly after parturition. A 17-day-old male Thoroughbred foal was requested to the Veterinary Pathology Laboratory of Cheju National University. The foal showed clinical signs such as umbilical urination, anorexia, depression, lethargy, and abdominal pain for 10 days. Because of the umbilical urination, the surgery for patent urachus was performed, but he died next day. Grossly, many pale yellowish foci 10-20 mm in diameter were scattered on the throughout surface of lungs. Severe subcapsular hemorrhage was observed in left kidney. Large milky yellow mass 10X6-7 cm in size was found in the adjacent area of right kidney. Histopathologically, many abscesses with bacterial cocci were scattered in the blood vessels or adjacent pulmonary parenchyma of lungs. Severe numerous abscesses with intralesional bacterial cocci were mostly occupied in the abdominal mass from right kidney. Gram staining for tissue sections demonstrated numerous Gram positive cocci in pulmonary and abdominal abscesses. In bacterial culture, catalase-positive beta-hemolytic colonies were isolated and confirmed as Staphylococcus (S.) aureus by Vitek system. Based on the results, acquired patent urachus and then multiple abscesses may be originated from the umbilical cord infected with S. aureus in this foal.
산모와 태아에 있어서 혈중연농도를 측정하고 연의 분포양상 및 상관요인을 규명하여 산모와 태아 및 영유아의 건강상의 위해를 예방하기 위하여 1989년 3월 1일부터 동년 3월 31일까지 대구시에 소재한 종합병원 1개소와 산부인과의원 1개소에 분만을 위해 내원한 산모 130명을 대상으로 모체혈과 분만직후의 제대혈을 채취하여 원자화 무염광로를 부착한 원자 흡광 광도계로 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 산모의 정맥혈과 제대혈의 평균 혈중연농도는 각각 $17.47{\pm}7.92{\mu}g/d{\ell}$, $15.31{\pm}7.98{\mu}g/d{\ell}$였다. 산모와 신생아의간의 혈중연농도는 상관계수는 0.663이였고 회귀방정식은 Y(제대혈의 연농도)=0.667X(모체혈의 연농도)+3.646였다. 산모의 자연유산력 및 출산시의 산과적 합병증과 산모의 혈중연농도와는 유의한 관계가 없었고, 제대혈의 연농도가 높을수록 출산체중이 적은 경향을 보였으나 통계학적인 의의는 없었으며, 신생아의 성 및 재태연령과 신생아의 혈중연농도와는 유의한 관계가 없었다. 생산직에 근무한 경력이 있는 산모의 경우는 직업이 없었거나 비생산직에 근무했던 산모보다 높은 혈중연농도를 나타내었고 근무했던 기간이 길수록 높은 혈중연농도를 나타내었으나 통계학적으로 유의하지는 않았다. 남편이 직장에서 연에 노출되는 경우 산모의 혈중연농도는 비노출군보다 높았으며 통계학적으로 유의한 차이가 있었다.
Objective There is concern regarding the safety of delayed cord clamping (DCC) in babies born at less than 34 weeks' gestation. Therefore, the primary objective of this study was to compare the rates of hyperbilirubinemia and polycythemia during initial 7 days in infants born at less than 34 weeks' gestation and randomized to receive DCC by 120 seconds or early cord clamping (ECC) within less than 30 seconds. Methods One hundred pregnant women were randomly subjected to DCC or ECC at the time of birth in a tertiary referral hospital setting. Blood samples were obtained from each newborn at 48 hours and 7 days for hematocrit measurement. Serum bilirubin levels were estimated once the infant had clinically significant jaundice or at 72 hours. For the statistical analysis, the ${\chi}^2$ test, Student's t-test, or Wilcoxon rank sum test was used. Results The hematocrit was significantly higher in the DCC group than in the ECC group (P<0.001). None of the babies had polycythemia. Mean total serum bilirubin level was 6.6 mg/dL in the DCC group and 8.7 mg/dL in the ECC group (P<0.001). There was no increased risk of hyperbilirubinemia in the DCC group. Conclusion DCC benefits preterm neonates with no significant adverse effects.
This experiment was carried out to develop the model system for mass production of biomedical and nutritional proteins (human proteins) through mamraary gland of the transgenic cattle produced by gene manipulation and embryological technologies. Human growth hormone gene fused with rat $\beta$-casein gene promoter was microinjected into pronuclei of one cell bovine embryos produced by in vitro fertilization. After microinjection, embryos were cultured in vitro for 6 or 7 days. Twenty embryos reaching to blastocysts were transferred to 10 beef recipients, each receiving two embryos. Recipients were diagnosed for pregnancy by rectal palpation at 76 days after embryo transfer. One of them was pregnant to term and produced a female calf weighing 21 kg at 280 days following embryo transfer. DNA was extracted from umbilical cord tissue and blood of calf born for confirming gene insertion. As determined by Southern hybridization, the transgene was not found.
The ECMO system, including umbilical cord and membrane type oxygenator was connected with extracorporeal circulation unit, was applied to the fetus growth model of goat. The maximum survival time of goat fetus was 48 hours. Average blood rate for the extracorporeal circulation was $223{\pm}15.2 ml/min.$ The survival time of fetus was deeply related to body temperature, blood circulation and water temperature, anesthetized time, and fetus weights. Extern variables that are composed of anesthetized time, fetus weights, change of hemoglobin, circuit pressure, related to the survival time for fetus corrected the problem of previous ECMO model that is controlled by roller pump. It is directly delivered to heart on load. Applying the results from new ECMO model, further research will provide to the system of ECMO for human.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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