• Journal of Dairy Science and Biotechnology
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• 제17권1호
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• pp.1-10
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• 1999

돼지의 장에서 분리된 Lαb. acidophilus GP4A가 생산하는 박테리오신은 typsin과 pepsin에 민감한 단백질성 물질이며 조사되어진 총 17종의균주들 중 Lactobacillus, Acinetobacter, Bacillus, Klebsiella, Streptococcus, Staphylococcus, Yersinia 속 등에 대하여 항균작용을 나타내었다. 또한 넓은 pH 조건에서도 안정하였으며 $65^{\circ}C$에서 20분가열시에는 어떠한 활성의 변화도 보이지 않았고 특히 $121^{\circ}C$에서 60분 가열시에도 완전하게 활성이 소실되지 않았다. 최대 활성의 박테리오신을 생산하기 위하여 적정 배양온도와 배지 pH를 조사한 결과 $37^{\circ}C$ 및 $40^{\circ}C$에서 그리고 MRS 배지 pH가 6.5${\sim}$7.5 사이 인 경우, 가장 높은 활성의 박테리오신이 생산되었다. 또한 Lab. delbrueckiisubsp. lactis 4797이 접종된 배지에 접종 초기와 2시간 후에 5% 농도로 cell free spent broth를 첨가시 18시간까지 성장을 억제할 수 있었으며$2{\times}10^8$ CFU/ml로 지시균이 접종된 배지에 5%와 10%로 첨가시에는 4시간 후 지시균의 생균수가 각각 약 10배 및 100배 정도 감소됨을 알 수 있었다. 그리고, 박테리오신은 cell free spent broth에서 냉장온도에 저장시 약 30일까지 활성이 유지 되었으며 (p<0.05) ammonium sulfate를 50%농도로 처리하고 침전물을 회수하여 Octyl sepharose CL-4B column chromatography를 실시한 결과 21.7%의 활성 회수율과 13.6배의 정제도를 보여주었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제38권5호
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• pp.382-386
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• 1995

감자의 단백질 분해효소 억제제-II(PI-II)단백질은 카이모트립신 저해부위와 트립신 저해부위로 나뉘어 있는데 PI-II 유전자중의 하나인 PI-IIT 유전자의 염기서열에서 비롯된 아미노산 서열이 폴리펩타이드 카이모트립신 저해제(PCI) 단백질의 아미노산 서열과 84%의 높은 동질성을 가지고 있으므로 감자의 단백질 분해효소 억제제유전자 집단 (family) 중의 하나인 PCI와 homology가 있는 유전자단편을 클로닝하기 위하여 이미 클론된 PI-IIT 유전자로부터 PCR을 행하여 얻어진 DNA 단편을 백터에 클로닝하고 염기서열을 결정하였다. 염기서열을 확인한 유전자 단편을 박테리오파아지 T7 promoter와 terminator를 갖고있는 플라스미드 pET3a에 옮겨 대장균 BL2l(DE3)에서 발현시켰던바 IPTG의 부가에 따라 유기되는 것을 확인 하였으나 발현수준은 기대했던것에 미치지 못하였다.

• 식물조직배양학회지
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• 제24권5호
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• pp.305-311
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• 1997

Bacillus thuringiensis는 그람 양성 토양 세균으로 포자형성시 결정화된 내포체를 형성하는데, 이 내포체를 구성하는 결정단백질은 각 곤충에 대하여 특이적인 독성을 나타낸다. 살충성 결정단백질 중 Cry II A 결정단백질은 인시류와 쌍시류 곤충에 모두 특이적으로 작용한다. 결정단백질은 살충제로서 불안정하고 포장에서 지속성이 낮은 단점을 가지고 있으므로, 본 연구에서는 Cry II A 결정단백질 유전자가 형질전환된 담배 식물을 제작하고자 하였다. cry IIA 유전자가 삽입된 벡터를 대장균에 형질전환한 후, 알칼리 용액에 대한 용해도의 차이를 이용하여 Cry II A 결정단백질(70 kDa)을 분리하였고, 분리한 Cry II A 결정단백질을 trypsin 처리하여 활성화된 Cry II A (50 kDa)를 확인하였다. 식물 형질전환을 위하여 두 개의 CaMV 35S promoters에 의해 발현이 조절되는 식물 발현 벡터에 cry II A 유전자를 클로닝 하였다. 이 식물 발현 벡터를 Agrobacterium을 이용한 엽편형질 전환을 통해 담배(N. tabacum var. Petit Havana SRI)에 형질전환 시켰으며, 재분화 과정을 거쳐 여섯 개체의 형질전환 식물체를 얻었다. Southern blot을 통하여 분석한 결과 세 개체 내에 cry II A 유전자가 존재하였는데, 한 개체에는 하나의 cry II A 유전자가, 또 한 개체에는 두 개의 cry II A 유전자가, 다른 한 개체에는 잘려진 형태의 cry II A 유전자가 존재함을 확인할 수 있었다. 본 연구를 통하여 얻어진 cry II A 형질전환 식물체는 살충성 검정 등을 거친 후 내충성 식물 생산 및 후대 유전 양상 분석을 위한 기초 자료로 이용될 수 있을 것이다.

• International Journal of Oral Biology
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• 제31권4호
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• pp.141-148
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• 2006

The effects of adenosine triphosphate(ATP) on salivary glands have been recognized since 1982. The presence of purinergic recepetors(P2Rs) that mediate the effects of ATP in various tissues, including parotid and submandibular salivary gland, has been supported by the cloning of receptor cDNAs and the expression of the receptor proteins. P2Rs have many subtypes, and the activation of these receptor subtypes increase intracellular $Ca^{2+}$, a key ion in the regulation of the secretion in the salivary gland. The apical pores of taste buds in circumvallate and foliate papillae are surrounded by the saliva from von Ebner salivary gland(vEG). Thus, it is important how the secretion of vEG is controlled. This study was designed to elucidate the roles of P2Rs on salivary secretion of vEG. Male Sprague-Dawley rats (about 200 g) were used for this experiment. vEG-rich tissues were obtained from dissecting $500-1,000\;{\mu}m$ thick posterior tongue slices under stereomicroscope view. P2Rs mRNA in vEG acinar cells were identified with RT-PCR. To observe the change in intracellular $Ca^{2+}$ activity, we employed $Ca^{2+}-ion$ specific fluorescence analysis with fura-2. Single acinar cells and cell clusters were isolated by a sequential trypsin/collagenase treatment and were loaded with $10\;{\mu}M$ fura -2 AM for 60 minutes at room temperature. Several agonists and antagonists were used to test a receptor specificity. RT-PCR revealed that the mRNAs of $P2X_4$, $P2Y_1$, $P2Y_2$ and $P2Y_3$ are expressed in vEG acinar cells. The intracellular calcium activity was increased in response to $10\;{\mu}M$ ATP, a P2Rs agonist, and 2-MeSATP, a $P2Y_1$ and $P2Y_2R$ agonist. However, $300\;{\mu}M\;{\alpha}{\beta}-MeATP$, a $P2X_1$ and $P2X_3R$ agonist, did not elicit the response. The responses elicited by $10\;{\mu}M$ ATP and UTP, a $P2Y_2R$ agonists, were maintained when extracellular calcium was removed. $10\;{\mu}M$ suramin, a P2XR antagonist, and reactive blue 2, a P2YR antagonist, partially blocked ATP-induced response. However, when extracellular calciums were removed, suramin did not abolish the responses elicited by ATP. These results suggest that P2Rs play an important role in salivary secretion of vEG acinar cells and the effects of ATP on vEG salivary secretion may be mediated by $P2X_4$, $P2Y_1$, $P2Y_2$, and/or $P2Y_3$.

• KSBB Journal
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• 제6권4호
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• pp.327-336
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• 1991

수산물 가공시 부산물로 얻어지는 어피(魚皮)를 보다 효율적으로 이용하기 위하여 효소로 대구피를 가수분해할 때 가수분해조건을 구명하였으며 그 가수분해물을 이용한 천연조미료(모조간장 및 복합조미료)의 개발을 시도하였다. pH-drop법으로 대구피분해에 있어서의 collagenase, trypsin 및 pronase의 활성을 비교해 본 결과 pronase가 가장 활성이 높았으며 이 pronase의 $K_m$ 및 $V_{max}$값은 각각 1.82 mgN/ml, 0.06 mgN/mL/min였다. Pronase에 의한 대구피 가수분해조건은 반응온도 $50^{\circ}C$, 반응시간 3시간, pH6, 효소농도 0.03%였으며, 이 조건하에서의 가수분해도는 78.8%였다. 그러나 대구피를 collagenase로 1시간 분해시킨 후 pronase로 처리할 경우 가수분해도는 90.83%였다. 이때 가수분해물의 분자량은 8,000 dalton이었다. 아미노산 조성은 glycine(27.95%), glutamic acid(10.94%), proline(10.48%), aspartic acid(7.47%), serine(7.39%)이 전체 아미노산의 64.23%였으나 쓴맛을 내는 valine, methionine, isoleucine, leucine, phenylalanine, histidine 등은 13.05%에 불과하였다. 가수분해물과 기타 부원료로 제조한 모조간장원액과 시판 100% 양조간장을 8:2(v/v)로 혼합한 모조간장은 시판대두간장에 비해 최소유의차 검정 결과 맛, 색 및 종합평가면에서 5% 유의수준내에서 유의차가 없었다. 가수분해물 31.7% 함유한 복합조미료도 시판 복합조미료와 관능적으로 비교해 본 결과 복합조미료로서의 손색이 없는 제품이었다.

• 한국작물학회지
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• 제55권2호
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• pp.165-176
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• 2010

Soybean seeds contain many biologically active secondary metabolites, such as proteins, saponins, isoflavones, phytic acids, trypsin inhibitors and phytosterols. Among them, saponins in soybeans have attracted considerable interest because of their health benefits. Soyasaponin A and B are the most abundant types of saponins found in soybeans along with soyasapogenol (aglycone), which is a precursor of soyasaponin. The main purpose of this experiment was to determine the concentration of soyasapogenol in soybean seeds and sprouts as a function of seed size, usage, seed coat color and seed cotyledon color. The 79 Korean soybean varieties were cultivated at Yesan of Chungnam in 2006 for the analysis of soyasapogenol using HPLC with Evaporative Light Scattering Detection (ELSD). The total average concentration of soyasapogenol was $1313.52{\mu}g\;g^{-1}$ in soybean seeds and $1377.22{\mu}g\;g^{-1}$ in soybean sprouts. Soybean sprouts were about 5% higher than soybean seeds in average total soyasapogenol concentration. In the process of sprouting, the average soyasapogenol A content decreased by approximately 1.6%, but soyasapogenol B and total soyasapogenol increased by 8.31% and 4.88%, based on the content of soybean seeds. When classified according to the size of seeds, the total soyasapogenol concentration of soybean seeds were not significantly different (p<0.05) On average, small soybean seeds were increased by as much as $103.14{\mu}g\;g^{-1}$ in sprouting process. As a function of the use of the seeds, The total soyasapogenol in soybean seeds were significantly different (p<0.05). While, the soybean sprouts were not significant different (p<0.05). Altogether, sprout soybean seeds show the greatest change in content during the germination process. When seeds with different coat colors were compared, the total soyasapogenol concentration of soybean with yellow seed coats ($1357.30\mu g\;g^{1}$) was slightly higher than that of soybean with black ($1260.30{\mu}g\;g^{-1}$) or brown ($1263.62{\mu}g\;g^{-1}$) seed coats. For the color of the cotyledon, the total soyasapogenol concentration was significantly increased in green cotyledon during the germination and seedling process. The results of this study suggest the functional characteristics of soybeans through quantitative analysis of soyasapogenol. In addition, the concentration of soyasapogenol exhibited a change during the germination process, which was evaluated by the nutritional value of the soybean sprouts.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제28권1호
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• pp.13-20
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• 2004

This study was conducted to investigate the developmental ability of caprine embryos after somatic cell interspecies nuclear transfer. Donor cells were obtained from an ear-skin biopsy of a caprine, digested with 0.25% trypsin-EDTA in PBS, and primary fibroblast cultures were established in TCM-199 with 10% FBS. After maturation, expanded cumulus cells were removed by vigorous pipetting in the presence of 0.3% hyaluronidase. The matured oocytes were dipped in D-PBS plus 10% FBS＋7.5 $\mu\textrm{g}$/ml cytochalasin B and 0.05 M sucrose. The reconstructed oocytes were electrically fused with donor cells in 0.3 M mannitol fusion medium. After the electofusion, embryos were activated by electric stimulation. Interspecies nuclear transfer embryos with bovine cytoplasts were cultured in TCM-199 medium supplemented with 10% FBS including bovine oviduct epithelial cells for 7∼9 day. On the other hand, the NT embryos with porcine cytoplasts were cultured in NCSU-23 medium supplemented with 10% FBS for 6∼8 day at $39^{\circ}C, 5% CO_2$ in air. In caprine-bovine NT embryos, the cleavage(2-cell) rate was 36.8% in confluence and 43.8% in serum starvation. The developmental rate of morula- and blastocyst-stage embryos was 0.0% in confluence and 18.8% in serum starvation. In caprine-porcine NT embryos, the cleavage(2-cell) rate was 76.7% in confluence and 66.7% in serum starvation. The developmental rate of morula and blastocyst stage embryos was 3.3% in confluence and 3.0% in serum starvation, and no significant difference was observed in synchronization treatment between donor cells. In caprine-bovine NT embryos, the cleavage(2-cell) rate of cultured donor cells was 30.8% and 17.6% in 5∼9 and 10∼14 passage(P＜0.05). The developmental rate of morula and blastocyst stage embryos were significantly higher(P＜0.05) in 5∼9 passage(23.1%) than in 10∼14 passage(0.0%) of cultured donor cells. In caprine-porcine NT embryos, the cleavage rate was significantly higher(P＜0.05) in 5∼9 passage(86.7%) than in 10∼14 passage(50.0%) of cultured donor cells. The developmental rate of morula and blastocyst stage embryos were 3.3 and 0.0% in 5∼9 and 10∼14와 passage of cultured donor cells. In caprine-bovine NT embryos, the developmental rate of morula and blastocyst stage embryos were 22.6% in interspecies nuclear transfer, 33.9% in in vitro fertilization and 28.1% in parthenotes, which was no significant differed. The developmental rate of morula and blastocyst stage embryos with caprine-porcine NT embryos were lower(P＜0.05) in interspecies nuclear transfer(5.1%) than in vitro fertiltzation(26.9%) and parthenotes(37.4%).

• Radiation Oncology Journal
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• 제22권4호
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• pp.298-306
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• 2004

목적:. 방사선 감수성이 다른 마우스 조직에서 apoptosis 유도 수준을 확인하고 방사선 감수성에 관여 된 인자를 Proteomics를 통해서 확인한다. 대상 및 방법: C3H/HeJ 마우스에 10 Gy 방사선을 조사하고 8시간 후 비장과 간을 채취하여 apoptosis 유도 수준을 비교 분석하였다. 조직에서 단백질을 추출하여 2-dimension electrophoresis (2-DE)를 실시하였다. 2-DE에서 방사선에 의해 발현의 변화를 보이는 gel의 spot를 trypsin 처리하여 MALDI-TOF 측정한 후 Swiss-prot database를 통하여 단백질 을 동정하였다. 결과: Apoptosls index는 방사선 조사 후 비장 조직에서 $35.3{\pm}1.7{\%}$, 간조직은 $0.6{\pm}0.2{\%}$로 비장에 비해 간 조직이 낮게 나타났다. Proteomoics 결과에서 방사선 내성 조직인 간은 ROS대사에 관여되는 단백질인 glutathione Stransferase Pi, carbonic anhydrase, NADH dehydrogenase, peroxiredoxin VI, riken cDNA 등이 방사선 조사 후 증가되었고 apoptosis 관련된 단백질인 cytochrome c는 간과 비장 조직에서 확인되었다. 그러나 방사선 민감 조직인 비장에서는 방사선 조사 후 산화적 Stress에 관련된 단백질, apoptosis 관련 단백질, 신호 전달에 관련된 단백질, 면역반응, cell cycle, Ca 신호 전달, 대사 cycle에 관련된 단백질 등이 방사선에 관련하여 발현의 변화를 보여 주었다. 결론 : Apoptosis유도 수준이 다른 조직에서 apoptosis에 관련된 단백질과 redox에 관련된 단백질은 방사성 감수성 조절에 관련된 것으로 보인다.

• Journal of Genetic Medicine
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• 제7권2호
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• pp.156-159
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• 2010

염색체의 역위는 균형재배열을 나타내는 구조적 이상 중 하나로 대부분 정상표현형을 나타낸다. 그러나 생식 세포의 감수 분열 단계에서 역위 고리를 만들어 염색체의 결실 또는 중복을 보이는 재조합 염색체가 형성되면 자녀에게 비정상 표현형이 나타나게 된다. 본 증례는 균형전좌를 가진 산모와 그 태아에 대한 정확한 핵형분석을 위해 세포유전학적인 방법과 분자유전학적인 방법을 함께 이용한 증례 보고이다. Trypsin과 Giemsa를 이용한 GTG 분염법의 결과에서 태아는 산모와는 다른 형태의 구조적 이상이 나타났으며, 정확한 분석을 위해 MLPA와 FISH를 시행하였다. 그 결과역위를 보인 9번 염색체 단완 말단 부위의 부분 소실과 13번 염색체에서는 장완 말단 부위의 부분 증폭이 확인되었다. 이는 생식세포의 감수분열시 상동염색체 사이의 교차에 의한 결과로써 드문 재조합 염색체로 판단된다. 따라서 이 태아의 최종 염색체 분석 결과는 46,XY,rec(9)t(9;13)(p22;q32)inv(9)(p12q13)mat로 보고 하였다. 세포유전학적인 방법을 기초로 한 FISH 또는 MLPA 등과 같은 분자유전학적 방법의 적극적인 이용은 복잡한 염색체 이상을 보이는 핵형 분석에 있어서 유용하고 효과적인 방법이라 하겠다.

• 한국수산과학회지
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• 제25권3호
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• pp.229-235
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• 1992

수산자원의 기능특성 해명을 위한 연구의 일환으로 고등어 근육단백질을 8가지 효소로 가수분해하여 얻은 가수분해물의 ACE 저해작용을 살펴보고 gel 여과에 의한 획분별 ACE 저해작용을 검토하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 단백질의 가수분해에 따른 $5\%$ TCA 가용성 peptide-nitrogen의 생성량은 가수분해 8시간까지는 급격히 증가하였으나 그 후로는 완만하게 증가하였다. 2. 가수분해에 따른 ACE 저해작용 또한 가수분해 8시간까지는 급격히 증가하였으나 특히 복합효소, bromelain에 의해 우수하게 나타났다. 3. 단백질 가수분해물의 ACE 저해작용은 첨가량의 증가와 함께 우수한 것으로 나타났으며, 가열에 의한 영향은 적은 것으로 나타났다. 4. Gel 여과에 의한 단백질 가수분해물의 획분별 ACE 저해작용은 서로 비슷한 획분에서 큰 것으로 나타났으며, 이 때의 분자량은 약 1,450 부근인 것으로 나타났다. 5. 복합효소에 의한 가수분해물의 획분 C 및 bromelain에 의한 가수분해물의 획분 d의 $IC_{50}$은 각각 95와 $130{\mu}g$으로 나타났다. 6. 복합효소 및 bromelain에 의한 가수분해물의 ACE 저해작용을 갖는 획분의 아미노산 조성은 다소 다른 것으로 나타났으며, Asp, Glu, Lys, Leu, Val 및 Ala의 함량이 많은 것으로 나타났다.