• BMB Reports
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• 제33권6호
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• pp.531-536
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• 2000

Tropomyosin (TM) is an important actin binding protein involved in regulation of muscle contraction. Unacetylated striated tropomyosin failed to bind to actin whereas unacetylated smooth tropomyosin bound well to actin. It has been demonstrated that high actin affinity of unacetylated ${\alpha}-tropomyosin$ was ascribed to the carboxyl terminal amino acid residues. In order to define the role of the carboxyl terminal residues of tropomyosin molecule on actin binding, two mutant tropomyosins were constructed. TM11 is identical to the striated tropomyosin except that the carboxyl terminal last three amino acids was replaced with $^{282}NNM^{284}$ whereas in TM14 $^{276}HA^{277}$ was substituted with smooth specific $^{276}QT^{277}$. TM11 and TM14 were overproduced in Escherichia coli and analyzed for actin affinity. The apparent binding constants (Kapp) of unacetylated tropomyosins were $2.2{\times}10^6M^{-1}$ for sm9, $1.03{\times}10^6M^{-1}$ for TM14, $0.19{\times}10^6M^{-1}$ for TM11, $>0.1{\times}10^6M^{-1}$ for striated, respectively. This result indicated that higher actin affinity of the unacetylated smooth tropomyosin was primarily attributed to the presence of QT residues in the smooth sequence. In case of the Ala-Ser (AS) dipeptide extension of the amino terminus of tropomyosin, Kapp were $21.1{\times}10^6M^{-1}$ for AS-sm9, $8.0{\times}10^6M^{-1}$ for AS-11, $4.7{\times}10^6M^{-1}$ for AS-14, $3.8{\times}10^6M^{-1}$ for AS-striated. AS-TM11 showed considerably higher actin affinity than AS-TM14, implying that interaction of Ala-Ser of the amino terminus with the carboxyl terminal residues. Since Kapp of AS-TM11 was significantly lower than that of AS-sm9, the presence of QT might be required for restoration of high actin affinity of the smooth ${\alpha}-tropomyosin$. These results suggested that the carboxyl terminal amino acid residues Glutamine275-Threonine276 are important for actin affinity of the recombinant smooth ${\alpha}-tropomyosin$, particularly of unacetylated smooth ${\alpha}-tropomyosin$.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제34권4호
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• pp.215-224
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• 1996

작은와포자충의 세포골격 단백질 분포를 알아보기 위하여 actin, tropomyosin, $\alpha$-actinin 및 troponin-T의 분포를 이중면역 황금표지법 (double immunogold labeling method)으로 관찰하 였다 관찰된 모든 발육 단계의 충체에서 매우 많은 양의 tropomyosin이 세포질 및 세포막에 분포하고 있음이 밝혀졌으며 actin보다도 더 많은 양이 관찰되었다. ${\alpha}-actinin$의 경우는 주로 세포막에 소량이 분포하였으며 Troponin-T는 어느 발육 단계에서도 관찰되지 않았다 이 연구의 결과 tropomyosin의 분포 정도도 미루어 볼 때 이 단백질이 작은와포자충에서 매우 중요한 역할을 수행할 것으로 추측되며, 주로 세포막에 다량으로 분포하는 actin, tropomyosin 및 ${\alpha}-actinin$은 면역진단 및 면역치료의 대상으로 이용할 가능성이 있을 것으로 생각된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제31권3호
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• pp.285-292
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• 1993

간흡충 total RNk에는 많은 량의 185 rRNA가 함유되어 있었지만 285 rRNA는 그 양이 매우 적었다. 약 $8{\;}{\mu\textrm{g}}의{\;}poly{\;}(A)^{+}$ mRNAS부터 합성된 double-stranded CDNA는 대부분이 0.4-4.2 kb 크기이었으며 9.5 kb에 달하는 것도 있었다. 이미 보고되어 있는 tropomyosin의 amino산 서열을 기준하여 5개의 degenerated oligonucleotide (sense primer 2개와 antisense primer 3개)를 합성하였다. TotalcDNA를 template로 하고 sense primer와 antisense primer를 조합하여 실시한 PCR 산물 중에서 580 bp 크기의 특이 유전자가 나타났다. 만손주혈흡충의 tropomyosin CDNA를 탐색자로 써서 Southern hybridization했을 때 이 유전자만이 검출되어서. 이 유전자는 간횹충 tropomyosin (CSTM) CDNA의 일부분일 가능성이 높다고 생각되어 sequencing vector인 POEM-3Zf(-)에 cloning한 다음 염기서열을 결정하였다. nRf 증폭된 CSTM CDNA는 크기가 575 bp이었으며 191개의 predicted amino산 서열은 한 개의 open reading frame을 갖고 있었다 CSTM CDNA의 amino산 서열은 만손주혈흡충 tropomyosln과 86.3%. Trichosoonvk: colhnfornis tropomyosin과 51.1% 의 유사성을 갖고 있었다. 이 CSTM cDNA fragment는 앞으로 간흡충 cDNA library를 screening하여 완전한 CnM CDNA를 cloning하기에 좋은 probe로 쓰일 것으로 예상된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제36권4호
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• pp.227-234
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• 1998

쥐와포자충의 운동에 관여하는 구조에 대하여 다른 구충류에서와 마찬가지로 알려진 바가 없다. 이 연구에서는 쥐와포자충에서 microfilament와 그 결합단백질의 분포를 관찰하여 이 기생충의 운동기전에 대한 이해를 돕고자 하였다. Actin의 분포를 보기 위해 두 종류의 actin, 즉 닭 골격근과 평활근의 actin에 대한 항체를 사용하였고, tropomyosin의 관찰을 위해서는 닭 골격근의 tropomyosin에 대한 항체를 이용하여 면역황금표지법으로 관찰하였다. 관찰된 모든 발육단계의 쥐와포자충이 actin과 tropomyosin을 가지고 있었는데 두 종류의 actin은 서로 다른 부위에서 관찰되었다. 즉, 골격근에 대한 항체는 주로 세포질과 세포막 구조에 표지되었고, 평활근에 대한 항체는 feeder organelle과 숙주세포 사이의 섬유질 구조 (filamentous cytoplasm)에 주로 표지되어 서로 다른 actin이 상이하게 분포하고 있음을 알 수 있었다. 분포 위치로 미루어 볼 때 골격근형 actin은 기생충의 세포질 내 여러 가지 현상에, 평활근형 actin은 쥐와포자충과 숙주세포 부착을 유지시키는데 주요 역할을 할 것으로 생각된다. Tropomyosin은 쥐와포자충 모든 발육단계에서 관찰되었는데 세포막에 주로 분포하였고 세포질 내의 소공포 (vacuole) 막 주위 및 핵 주위에서도 관찰되었다. Tropomyosin은 쥐와포자충의 발육단계가 변함에 따라 끊임없이 분포를 달리하는 것으로 생각되며 특히 막구조에 다수 분포하므로 항원으로서 숙주세포를 자극할 가능성이 있는 것으로 보인다.

• 한국식품과학회지
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• 제9권4호
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• pp.295-305
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• 1977

근원성유로 부터 근수축조절단백질들을 추출정제하고 저장중의 변화를 연구하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. ${\alpha}-actinin$은 그 분자형(分子形)이나 생물활성(生物活性)에 아무런 변화도 일으키지 않았다. 2. 근육저장중에 근원섬유의 troponin-troponin complex의 함량은 감소되고 있으며 troponin-tropomyosin complex의 troponin함유비(含有比)는 낮아지고 있다.

• Journal of Life Science
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• 제11권1호
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• pp.1-6
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• 2001

In order to determine the role of the carboxyl terminal amino acid residues of unacetylated ${\alpha}$-tropomyosin in actin affinity two mutant tropomyosins were constructed by site-directed mutagenesis. TM16 was identical to the striated tropomyosin except that three amino acids in the carboxyl terminal end were altered to $^{282}TNM^{284}$ while in TM17 $^{282}TSI^{284}$ of the striated was replaced with$^{282}NSM^{284}$. TM16 and TM17 were overproduced in Escherichia coli and analyzed for actin affinity by comparing actin affinities of the striated and TM11 $^{282}NNM^{284}$). The apparent binding constants (Kapp) of unacetylated tropomyosins to actin were $5.1{\times}10^4M^{-1}$ for the striated, $1.1{\times}10^5M^{-1}$ for TM11, $1.09{\times}10^5M^{-1}$ for TM16, and $1.03{\times}10^5M^{-1}$ for TM17, respectively. Since the actin affinities of TM11, TM16, and TM17 were very similar, this result suggested that amino acid residues 282 and 283 were insignificant for acting affinity of unacetylated $\alpha$-tropomyosin. However, they all exhibited higher actin affinities than that of the striated, suggesting that Met residue at the carboxyl terminus of unacetylated smooth tropomyosin was rather important for actin affinity, presumably due to the nucleophilic nature of sulfur atom in Met residue.

• 대한약리학회지
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• 제8권2호
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• pp.55-61
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• 1972

Superprecipitation of actomyosin has been considered to be an in vitro model of the muscle contraction. The superprecipitation and ATPase activity (which supplies the energy for contraction) are influenced by several factors which are the large amount of changes in ionic strength, Mg and ATP concentrations. But those behaviors are found to be promptly influenced by the change in a small range of calcium concentration which can be controlled by the cellular function of muscle physiologically only in the presence of the modullatory proteins, tropomyosin and troponin. In order to elucidate the precise roles of calcium in the muscle contraction and relaxation, the effects of calcium on the actin- myosin interaction was observed in the presence of tropomyosin and troponin using the superprecipitation system. The results are summarized as follows: 1. EGTA (glycol ether diaminetetraacetic acid)prolonged the initiation of the superprecipitation of natural actomyosin. 2. Superprecipitation curve was declined by adding EGTA at the time when tile curve reached the half- maximum. The degree of declining was proportional to the amount of EGTA added. Especially, upon adding 0.25 mM EGTA the curve was lowered to the level before the protein superprecipitated. But addition of EGTA did not affect the curve after attaining the maximum. 3. Superprecipitation of Perry myosin B was not affected by EGTA added both before and during the course of the reaction. 4. Tropomyosin did not change the response of Perry myosin B to EGTA added at any time of the reaction. 5. Troponin also did not change the response of Perry myosin B to EGTA. 6. Both tropomyosin and troponin together rendered the Perry myosin B to obtain the same response as natural actomyosin to EGTA. 7. It was concluded that actin-myosin interaction was influenced by the minute change of calcium concentration only in the presence of both tropomyosin and troponin. We could reproduce the contraction and relaxation of the muscle in vitro under the presence of ATP by changing the calcium concentration.

• 생명과학회지
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• 제17권2호통권82호
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• pp.204-210
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• 2007

평활근 ${\alpha}$-트로포마이오신의 높은 액틴 친화력은 아미노산 잔기 Gln276 및 Thr277에 기인한다는 이전 보고에 따라, 2 잔기 중 어느 잔기가 액틴 친화력에 더 중요한 가를 알아보기 위하여 골격근 트로포마이오신의 His 혹은 Ala 단일 잔기를 각각 Gln 혹은 Thr으로 치환한 돌연변이 트로포마이오신을 제작하여 대장균에서 대량발현 시킨 후 정제하여 액틴 결합력을 측정하였다. 비록 비아세틸화된 트로포마이오신의 경우 Gln 및 Thr 잔기가 최고 액틴친화력을 위해 모두 필요하나, 돌연변이 트로포마이신 중 Gln 잔기를 가진 돌연변이 트로포마이오신들이 다른 돌연변이 트로포마이오신들에 비하여 3에서 4배 높은 액틴친화력을 보였다. 이러한 결과는 평활근 ${\alpha}$-트로포마이오신의 높은 액틴 친화력은 Thr277 잔기보다 Gln276 잔기에 주로 기인한다는 것을 의미한다.

• 한국식품과학회지
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• 제46권5호
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• pp.538-543
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• 2014

가공식품 중 새우의 검출을 위한 샌드위치 ELISA(sELISA)의 조건을 확립하기 위해 홍다리 새우의 tropomyosin에 대한 특이항체를 이용하여 하였다. 이때, 새우의 검출범위는 1-100 ppm (${\mu}g/mL$)이며, 검출한계는 0.3 ppm이었다. 특이항체의 교차반응 결과, 홍다리새우, 흰다리 새우, 칵테일 새우, 바다가재, 꽃게에 대한 반응성은 각각 100, 73, 155, 18, 0%를 나타내었으며 새우에 대한 특이성이 매우 높았다. 열처리한 시료와 항체간의 반응성은 $100^{\circ}C$까지는 121-221%로 안정하였으나 $121^{\circ}C$에서는 반응성이 급격히 감소하였다(7.8%). 크림스프, 이유식, 소시지, 어묵, 소스에 대한 spike test에서 새우의 분석회수율은 각각 397, 639, 168, 234, 0%로 소스를 제외하고 매우 높게 나타났다. sELISA에 의하여 14점의 시판시료 중 새우의 함유 유무를 조사한 결과, 정성적으로 원료의 표시사항과 일치하는 비율은 79%이었다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제33권3호
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• pp.189-198
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• 2006

목적: 본 연구진은 난자성숙 과정의 조절 기작을 규명하기 위하여 생쥐의 미성숙 난자와 성숙난자에서 차이 나게 발현하는 유전자의 목록을 얻은 바 있다. 이들 유전자 중에서 Bcl-2 homolog인 Diva 유전자가 난자에 특이적으로 발현함을 본 연구를 통해 규명하였는데 이러한 Diva의 기능을 밝혀내기 위하여 immunoprecipitation (IP)과 Mass Spectrometry (MS)를 이용하여 Diva와 결합하여 상호작용하는 단백질을 동정하고자 하였다. 연구방법: NIH/3T3 세포주에 Diva를 encoding하는 pCMV-FLAG-Diva를 24 시간 동안 과발현 시키고 대조군으로는 유전자 없는 pCMV-FLAG empty vector를 transfection 하였다. FLAG에 특이적인 항체로 IP하여 Diva와 결합하는 면역복합체를 형성하게 한 후 이를 12% SDS-polyacrylamide gel 상에서 전기 영동하였고 Coomassie Blue 염색을 통해 단백질 발현양상을 관찰하였다. 대조군에서는 관찰되지 않으면서 Diva 유전자가 발현하는 실험군에서만 확인되는 밴드를 오려내어 trypsin을 사용하여 in-gel digestion 한 후 MS 분석을 시행하였다. 모든 mass spectra는 4700 Proteomics Analyzer (Applied Biosystems, Framingham, MA)에 의해 positive reflector mode에서 얻어졌다. 이렇게 얻어진 단백질들은 MASCOT Peptide Mass Fingerprint software (Matrixscience, London)을 이용하여 NCBI nonredundant database를 찾아서 동정하였다. 결과: Diva를 과발현하는 세포주에서만 관찰되는 15개 밴드에 대한 MS/MS 분석 결과, Diva와 결합하는 단백질로서 actin과 그 외에 ${\alpha}$-actinin, tropomyosin, tropomodulin 3 등의 actin-binding 단백질을 동정하였다. Diva를 과발현하는 NIH/3T3 세포주에서 면역 복합체를 형성하는 actin과 tropomyosin이 실제 난소 조직에서도 Diva와 결합하는지 IP와 Western blot을 통해 확인한 결과, actin과 tropomyosin 모두 Diva와 결합함을 확인함으로써, Diva는 이 두 단백질과 난소에서 상호작용함을 알 수 있었다. 결론: 본 연구는 Diva와 결합하여 상호작용하는 단백질들이 cytoskeletal system의 actin filament와 관계 있음을 규명한 최초의 보고이다. Diva가 actin과 tropomyosin과 결합하는 것을 고려해볼때, 난자 특이적인 Diva는 아마도 난자성숙 동안에 cytoskeletal system 을 조절하는 역할을 할 것으로 사료된다.