• 한국산림과학회지
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• 제78권4호
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• pp.372-380
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• 1989

주요(主要) 조림수종(造林樹種)의 하나인 현사시나무를 Agrobacterium rhizogenes의 agropine 계통(系統)인 A4를 이용(利用)하여 유전적(遺傳的)으로 형질전환(形質轉換)시켰다. 형질전환(形質轉換) 여부는 조직(組織)내의 opine(agropine) 존재를 분석(分析)하여 확인(確認)하였다. 형질전환(形質轉換)으로 얻어진 hairy root는 1/4MS+sucrose 30g/L에서 가장 좋은 생장(生長)을 보였으며, 식물체(植物體) 재분화(再分化)는 BAP 0.5mg/l를 첨가한 MS배지(培地)에 배양(培養)하였을 때 가장 좋은 결과(結果)를 얻었다. 재분화(再分化)된 식물체(植物體)는 뿌리가 많고 형태적(形態的)으로 변형(變形)되어 정상의 식물(植物)과 구별(區別)할 수 있었다. 부분적(部分的)으로 뿌리부분(部分)만 형질전환(形質轉換) 시킴으로써 보다 많은 뿌리를 가진 개체(個體)로 만들 수 있었고 이는 임목(林木)의 지상부(地下部) 형질개량(形質改良)에 유리(有利)한 것으로 나타났다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제50권
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• pp.56-62
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• 2023

35S cauliflower mosaic virus 프로모터의 조절을 받고 인트론이 포함된 β-Glucuronidase (gus) gene과 35S cauliflower mosaic virus (enhanced) 프로모터의 조절을 받는 blpR유전자가 있는 pCAMBIA3301 벡터가 포함된 AGL-1 균주를 사용하였다. 아그로박테리움을 이용한 형질전환 체계와 PPT (D-L-phosphinothricin) 선발을 통하여 나리 인편조직으로부터 형질전환 식물체가 획득되었다. 본 연구에서 나리 레드플레임'품종의 인편조직에 선발 및 목적유전자로 바스타 제초제저항성 유전자인 blpR 유전자를 도입하였다. 상기 실험 결과, 20분의 접종시간과 5일간의 아그로박테리움과의 공동배양이 100개의 접종된 인편개체에서 각각 24, 27개의 높은 PPT 저항성 개체가 관찰되었고 신초까지 형성된 인편을 19.6 및 22.7개를 생산하는 우수한 형질전환 결과를 보여주었다. 이렇게 제초제를 이용하여 선발되었을 뿐만 아니라 도입된 reporter 유전자인 gus도 발현되었음을 확인하였고 선발유전자이자 목적유전자인 blpR 유전자도 PCR 검정을 통해 도입되었음을 확인하였다. 12주 이상의 선발과정을 거치고 gus 및 PCR 검정을 거친 형질전환 개체들은 발근 배지를 거쳐 순화 후 화분으로 이식하여 높은 활착율을 보여주었다. 결론적으로 본 연구에서 확립한 프로토콜을 이용하면 평균 20% 이상의 형질전환 효율을 나타내고 본 연구에 기술된 아그로박테리움 매개 형질전환 체계에 향후 보완이 필요하지만, 우수 품종개발을 위한 나리 육종 프로그램에 기여할 수 있을 것으로 판단된다.

• 한국연초학회지
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• 제13권2호
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• pp.34-41
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• 1991

To explore the possibility of introducing Zea mays transposable element Ac(activator) which can be used as a mutagen and gene tag in tobacco plants other than maitre, we tried to introduce a cloned Ac element into tobacco cells by an Agrobacterium tumefaciens binary vector system. Transformation of N. babacum cv. Burley 21 tissues and regeneration to whole plant were carried out. The frequency of the transformed callus induced in shoot induction media was higher than that of transformed callus induced in callus induction media. However, the calli were not grown in the second selection media, and became yellow senescent calli. Regenerated tobacco plantlets with foreign gene were also obtained in shoot induction media containing 100 $\mu\textrm{g}$/ml kanamycin and 100$\mu\textrm{g}$/ml carbenicillin. The leaf tissues of transformant was also resistant to 1000 $\mu\textrm{g}$/ml kanamycin. The chromosomal DNAs of transformant and normal plant of N. tabacum were digested by EcoR I and Hind III but not by Pst I.

• Journal of Plant Biology
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• 제39권2호
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• pp.93-98
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• 1996

In order to enhance the system of potato transformation and further regeneration, potato was transformed using the Agrobacterium tumefaciens harboring $\beta$-glucuronidase (GUS) gene. We found that a series fo modified medium ttained 100% shoot regeneration within 5 weeks after the preincubated explants on stage I medium were infected with Agrobacterium. Callus appeared at the cut edges of stem segments on stage II medium, mainly at the basal parts. Some explants started to form shoots after two to three weeks on stage III medium containing kanamycin (50 mg/L). When transferred to MS medium containing 200 mg/L kanamycin, 81% of the transformed shoots formed roots at the cut edge of the plantlets. In contrast, untrasformed shoots never rooted and became yellowish after few weeks under the same conditions. Southern and northern analysis indicated in vitro shoot regeneration on the callus derived from the potato explants, which were incubated with Agrobacteria. The regeneration cycle was shortened after the transformatin and finally the transformation efficiency was highly enhanced.

• Plant Resources
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• 제6권2호
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• pp.108-113
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• 2003

This study was carried out to obtain basic information for possibility of oral vaccine in carrot using Agrobacteruim -mediated transformation system. The epitope region of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) spike gene which is classified as a member of the Coronaviridae and causes an acute enteritis in pigs was successfully expressed in carrot (Daucus carota) using the Agrobacterium-mediated transformation system. Hypocotyl segments of in vitro germinated plantlets were infected with Agrobacteriun tumefaciens LBA 4404 harboring PEDV spike gene. Embryogenic callus (EC) was induced on MS selection medium with 1 mg/L 2,4-D, 50 mg/L kanamycin and 300 mg/L cefotaxime after 45 days of culture. Subcultured ECs on MS selection medium without 2,4-D were converted to somatic embryos (SE) of various stage; globular, heart and torpedo stage. Putative transgenic embryos were selected on MS medium with 50 mg/L kanamycin and 300 mg/L cefotaxime. Regenerated plantlets from transformed SE were induced on MS medium containing 50 mg/L kanamycin after 30 days of culture. Genomic PCR confirmed the integration of PEDV spike gene into nuclear genome of carrot and northern blot analysis demonstrated the expression of PEDV spike gene in transgenic carrot.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제7권3호
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• pp.203-209
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• 2005

This study was conducted to improve tocopherol (vitamin E) composition in soybean (Glycine max) by introducing a gamma-tocopherol methyl transferase (${\gamma}$-TMT) gene via Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation. Immature cotyledon explants were cocultivated with Agrobacterium tumefaciens. Putative transgenic embryos were selected from immature cotyledons on MS medium supplemented with 40 mg/L 2,4-D containing 100 mg/L kanamycin, 500 mg/L carbenicillin and 250 mg/L cefotaxime. Plantlets were developed from somatic embryos, and then transferred to soil. Nineteen regenerated plantlets obtained on the selection medium from 1,460 cotyledons. However, only 9 plantlets were confirmed as transformed plants. Integration of the transgene into the soybean genomic DNA was confirmed by PCR and Southern blot analysis. HPLC analysis showed that the content of ${\alpha}$-tocopherol in transgenic soybean seeds (AT-1) was approximately 4-fold higher than that of non-transgenic plants. Conclusively, we obtained the transgenic soybean having increased ${\alpha}$-tocopherol content by the overexpression of ${\gamma}$-TMT transgene.

• Applied Biological Chemistry
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• 제38권2호
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• pp.123-128
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• 1995

Agrobacterium rhizogenes를 매개로 한 Populus의 형질전환계를 확립하고자 형질전환율에 영향을 주는 주요 인자들을 검토하고, 형질전환 식물체를 분화시켜 도입유전자의 발현을 확인하였다. 줄기조직보다 잎조직이 kanamycin에 대한 감수성이 커 형질전환체의 선발에 유리한 것으로 판단되었다. 접종용액의 박테리아 밀도는 $4{\times}10^5{\sim}7{\times}10^9\;cfu$의 범위내에서 형질전환율에 거의 영향을 주지 않았다. 공배양 기간은 1일 이내가 바람직하였고, 박테리아 제거배지의 항생제 농도는 cefotaxime과 ampicillin 각각 $250\;{\mu}g/ml$가 적당하였다. 배지에 acetosyringone을 첨가하여 배양한 박테리아를 사용했을 때 형질전환율이 증가했는데 acetosyringone의 적정농도는 $50\;{\mu}M$이었다. 형질전환된 gall은 kanamycin 농도가 $100\;{\mu}g/ml$ 이상인 배지를 사용하거나, 생장조절제가 들어있지 않은 배지를 사용하여 선택적으로 유기 및 증식시킬 수 있었다. A. rhizogenes를 접종시킨 조직으로부터 유기된 gall은 생장조절제를 포함하는 배지뿐만 아니라, 생장조절제가 없는 배지에서도 3주 이내에 뿌리를 형성하였다. NAA 0.05 mg/ml와 BA 0.5 mg/ml를 첨가한 배지에서 배양된 gall로 부터 약 6주일 후 식물체가 분화되었다. A. rhizogenes를 접종시켜 얻은 gall,그리고 gall로부터 재분화된 식물체의 추출물에서 agropine과 mannopine이 검출되어, 도입된 opine합성 유전자가 발현되고 있는 것이 확인되었다.

• 한국약용작물학회지
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• 제15권1호
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• pp.46-50
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• 2007

하늘타리 (Trichosanthes kirilowii)로부터 조직배양 기법을 이용하여 약리작용을 나타내는 생리활성물질인 trichosantin을 생산하기 위한 연구로 Agrobacterium rhizogenes ATCC15834 의 감염을 통하여 기내 배양된 유묘의 잎절편으로부터 형질전환 모상근을 유도하였다. 유도된 모상근 clones으로부터 성장속도와 분지화 정도가 빠르며 단백질 합성능이 가장 우수한 TR-03 clones을 선발하였으며, 이를 사용하여 생체량과 배지내 가용성 단백질의 생산을 최대로 높일 수 있는 최적 배양조건을 조사하였다. TR-03 clone을 4% sucrose가 첨가된 MS 배지에 초기 접종농도 2 g (생중량)을 접종하여 100 rpm으로 배양시 생중량과 배지내 가용성 총단백질의 함량이 플라스크당 약 2.4 g (건중량)과 $28.3ug/\ell$으로 최대치를 나타내었다. 한편, 배지내 가용성 단백질에 대한 RIP활성 검정에서 배양 4주 후 21.3 unit로 최대치를 보였다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제7권4호
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• pp.211-218
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• 2005

Genetic transformation was carried out by using biolistic gun method. The hypocotyl derived embryogenic calli (explants) of cotton (Gossypium hirsutum L.) cv. Cocker-312 were transformed with a recombinant pGreen II plasmid, in which both, bar (selection marker) and GUS (${\beta}$-glucuronidase) reporter genes were incorporated. Explants were arranged on osmoticum-containing medium (0.5M mannitol) 4 hours prior to and 16 hours after bombardment that was resulted into an increase about >80% for GUS stable expression. 3 days after bombardment, GUS assay was performed, which exhibited, $18.36{\pm}1.00$ calli showed blue spots. The transformed embryogenic calli were cultured on selection medium (@ 6 mg/L basta) for 3 months. The putative transgenic plants were developed via selective somatic embryogenesis (@1.50 mg/L basta); maximum $27.58{\pm}1.25$ somatic embryos were obtained while $17.47{\pm}1.00$ embryos developed into plantlets (@ 0.75mg/L basta). In five independent experiments, up to 7.24% transformation efficiency was recorded. The presence of the transgenes was analyzed by using PCR and southern hybridization analysis. The transgenic plants were developed with in 6-7 months, but mostly transformants were abnormal in morphology.

• KSBB Journal
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• 제16권5호
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• pp.480-485
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• 2001

국화과에 속하는 다년생 초본식물의 민들레가 Agrobacteria 에 대한 숙주로서의 가능성을 조사하고 여러 가지 유용한 유전자를 민들레로 도입시키기 위해, 민들레잎 절편을 pBI121으로 형질전환된 Agrobacterium tumefaciens LBA4404와 10분동안 공동배양하여 형질전환시킨 후, 1$\mu$M IAA, 1$\mu$M BA. 50 $\mu$g/ML Km과 100$\mu$g/ML Cb이 함유된 MS 배지에서 약 2주후에 multiple shoot를 유가시켰다. 유기된 shoot로 부터 유식식물체를 얻었으며, 형질전환을 확인하기 위해 GUS활성을 측정한 결과 양성 반응을 보였다.