• 대한미생물학회지
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• 제34권6호
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• pp.513-518
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• 1999

A total of 113 Vibrio sp. strains were examined for plasmid content which were subjected to digestion with restriction enzymes. About the 55% Vibrio spp. have the plasmid more than one. Most of these plasmid various derivatives ranged from $2.4\;kb{\sim}23\;kb$, especially two strains of V. mimicus and one strain of V. furnissii carried one high-molecular weight plasmid (molecular weight ranging between $70\;kb{\sim}100\;kb$). Results of restriction analysis for plasmid of this three strains were by no means the rule. For detection of tdh and ctx gene, the virulence factor involved in the pathogenesis, we carried out the TDH and CT assay, PCR amplification, and hybridization. A total 11 strains were produced TDH, involved in 9 strains of V. parahaemolyticus and 1 strain of V. alginolyticus from clinical isolates and 1 strains of V. mimicus from environmental isolates. In the experiments of tdh gene detection, in all, 3 strains of V. parahaemolyticus from clinical isolates and 2 strains from environmental isolates could be successfully amplified in 400 bp by PCR. The PCR results were consistent with DNA hybridization tests. In the experiments of CT assay, in all, 3 strains of V. cholerae from clinical isolate and 1 strain of V. cholerae from environmental isolates were observed CT-producing. These CT-producing strains amplified in 302 bp by PCR for the detection of ctx gene. All CT-producing strains hybridized with digoxigenin-labeled DNA probe, while CT-negative strains did not hybridize. Also hybridization tests results for detection of ctx gene consistent with PCR.

• 생명과학회지
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• 제17권3호통권83호
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• pp.386-395
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• 2007

본 연구는 1999년에서 2001년도 걸쳐서 3년간 국내에서 분리된 환자유래 장염비브리오 18균주와 일본 후쿠오카 지역에서 2002년도에 환자에서 분리한 장염비브리오 9균주 등 총 27균주에 대하여 toxR 유전자의 검출, 혈청형별 검사, 약제내성의 양상, tdh, trh1 및 trh2 유전자의 보유상태 및 urease 생성성을 살펴보고, 혈청형 O3:K6 균주에 대하여 TDH의 생성성 검사, tdh 양성균주의 RFLP 형별, ORF 8의 분포, PFGE법과 RAPD법을 실시하였으며 결과는 다음과 같다. 1. 한국 및 일본의 환자유래 균주 대부분에서 urease음성이었으며, toxR 유전자로 확인 동정하였고 혈청형의 분포는 국내 분리 주의 O3:K6, O4:K9, O6:K46, O3:K57, O5:Kl5와 일본 분리주의 O3:K6, O1:K38, O4:K68, O4:Kl2의 혈청형으로 나타났다. 2. 항생제 감수성 시험에서는 vancomycin과 oxacillin은 27균주 (100%), penicillin은 26균주 (96.3%)로 높은 내성을 나타내었고, 14균주 (51.9%)가 4가지 이상의 항생제에 다제내성을 나타내었다. 항생제의 내성양상은 6종류로 혈청형에 관계없이 vancomycin, oxacillin, penicillin에 내성을 나타내는 V형이 15균주 (55.6%)로 가장 많이 나타났다. 3. tdh 유전자는 26균주가 PCR법과 DNA probe hybridization법의 결과에서 양성으로 나타났으며, urease양성이었던 일본 환자유래 혈청형 O3:K6 1균주만이 tdh유전자 음성, trh2 유전자 양성을 나타냈다. 혈청형 O3:K6의 TDH 생성성역가는 전 균주가 256배에서 2,048배 정도로 나타났으며, RFLP 양상은 모든 균주가 11.5 kb와 4.3 kb에 tdh 유전자를 보유하고 있었다. 또한 혈청형 O3:K6 균주들은 RAPD법과 PFGE법으로 유전자형별을 비교 검토한 결과 8형으로 거의동일한 유전자형별의 결과를 나타내었다. 4. ORF 8의 분포는 혈청형 O3:K6 전 균주에서 양성이었고, 특히 혈청형 O6:K46 4균주 모두에서 ORF 8 양성을 나타내어 새롭게 나타난 유행균주일 가능성을 시사 하였다. 따라서 ORF 8 유전자의 검출은 범세계적으로 유행하는 균주들을 동정하는데 있어 genetic marker로서 매우 유용한 것으로 사료된다.

• 한국수산과학회지
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• 제52권6호
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• pp.596-604
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• 2019

Vibrio parahaemolyticus causes food poisoning, mainly via marine fisheries products. We investigated the virulence factors and drug resistance of V. parahaemolyticus isolated from fisheries products purchased from the Yeosu Fisheries Market. The isolates were identified using a variety of biochemical tests and the detection of toxR and hns gene. The presence of the virulence factor-encoding genes tdh and trh in the isolates was also investigated by PCR. The resistance of the isolates to 13 antibacterial agents was tested using the disc-diffusion method and carriage of β-lactamase genes and class 1 integrons by ampicillin-resistant isolates was investigated by PCR. Four of seventeen isolates identified as V. parahaemolyticus by biochemical tests produced a species-specific PCR band. Those isolates showed >98% 16S rRNA gene sequence homology with V. parahaemolyticus and only one isolate harbored the tdh gene. All of the V. parahaemolyticus isolates were resistant to ampicillin and amoxicillin; moreover, VPA0477, a class A β-lactamase gene, and class 1 integrons were detected. Therefore, V. parahaemolyticus from fisheries products represents a low risk to human health. Also, V. parahaemolyticus is likely to develop multidrug resistance because it has class 1 integrons.

• 생명과학회지
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• 제10권4호
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• pp.380-387
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• 2000

Recently Vibrio sp. are the most frequently isolated microorganism, which causing food poisoning. We investigated the detection of toxin genes and effect of chitosan to toxin genes with PCR. Thirty strains of Vibrio sp. were isolated from sea water and sea products through biological and biochemical tests. Out of 30 strains, 8 were identified as V. parahemolyticus, 7 as V. mimcus, 6 as V. damsela, 5 as V. vulnificus, 4 as V. alginoyticus. In detection of ctx, tdh, and t고 as food poisoning-causing toxin genes, ctx from 7 strains, trh from 4 strains and tdh from 6 strains were detected. Among toxin genes detected strains, we selected V. vulnificus-2 V. damsela-1 and V. parahemolyticus-7. As adding chitosan solution to PCR product of 3 strains, the amplified DNA bands were not detected over 450$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ concentrantion of chitosan. Over the result, chitosan is thought to influence the detection of toxin gene.

• KSBB Journal
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• 제18권6호
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• pp.522-528
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• 2003

본 연구는 식중독 환자로부터 분리한 장염비브리오균 120 균주를 세균학적 특성시험, 항균제 감수성 여부, 독소 유전자와 독소조절유전자의 검출 및 보유 여부를 PCR, RPLA 로 시험하였으며, 각 지역간의 분리 세균을 GS-PCR, PFGE 시험으로 병원체 상관 관계를 분석한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 장염비브리오균은 0%의 NaCl 농도에서는 성장을 보이지 않았고, 8% NaCl이 첨가된 농도에서는 성장을 보였다. 국내 설사환자의 장염비브리오균의 O, K 혈청형은 17가지로 나타났으며, 이 중 O3:K6형이 68.3%로 가장 많았다. Ampicillin 등 18가지 항균제 시험에서 Ampicillin, Ticacillin에 높은 내성을 보였으며, Ampicillin, Ticacillin, Vancomycin에 동시 내성을 나타낸 경우가 52.5%로 나타났다. 독소조절 유전자 toxR은 PCR시험에서 시험균주 모두 368bp 크기의 유전자를 가지고 있었으며 장염 비브리오균의 조기진단에 유용한 것으로 확인되었고, 독소유전자 tdh는 120균주 중 109 균주만이 199bp 크기의 유전자를 보유하고 11균주가 음성이었다. trh 독소 유전자를 보유한 균주는 시험균주 중 3 균주만이 250bp 크기의 유전자를 보유하고 있었으며, tdh, trh 유전자를 동시에 가지고 있는 균주는 3균주로 이 균주의 TDH 독소 생성능은 x16 정도로 독소 생성능이 미약했다. 독소생성 Kanagawa 시험에서 120균주 중 107균주가 양성반응 을 나타내었으며, Kanagawa 양성반응을 보인 균주은 모두 tdh 유전자를 보유하고 있었다. Group Specific-PCR에서 최근에 유행을 일으키는 O3:K6 혈청형의 유연관계를 찾는데 유용한 것으로 나타났다. 조절유전자 toxRS 염기서열을 분석한 결과 같은 혈청형이라도 3균주는 7개의 염기서열 차이를 나타내었으며, 이는 현재 유행을 일으키는 균주와는 다른 균주임을 확인하였다. PFGE로 보다 더 세분화하여 혈청관계를 분류할 수 있었으며, 식중독 환자 유래 장염비브리오균은 3가지 type으로 나타났으며, 이들 균주 사이에는 상호 밀접한 상관관계를 나타내었다. 따라서 PFGE 기법으로 얻어진 결과는 분자 역학적으로 유용한 도구로 사용될 수 있음을 확인하였다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제38권4호
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• pp.246-254
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• 2023

장염비브리오균은 급성 설사와 같이 수인성·식품매개 질병을 일으키는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 제주지역 해수, 수족관수, 유통 수산물에서 분리한 장염비브리오균을 real-time PCR을 이용하여 잠재적인 독소 유전자 또는 종특이성 유전자(tdh, trh, tlh, toxR)를 조사하고, 이 균주의 유전적인 특성을 PFGE로 분석하였다. 총 245개 시료 중 해수에서 33주, 수족관수에서 7주, 수산물에서 50주로 90주(36.7%)의 장염비브리오균을 분리하였다. 모든 장염비브리오균에서 tdh 유전자는 검출되지 않았지만, tlh 유전자 또는 toxR 유전자는 검출되었다. 또한, 해수에서 3주와 수산물에서 1주 분리된 균주에서 trh 유전자가 검출되었다. 매달 해수를 정량검사한 결과 장염비브리오균은 수온과 양의 상관관계를 가지고 있었다. 90주의 장염비브리오균은 64.0-97.3% 범위에서 유사한 유전자 상동성을 보였다. 이중에서 13개 유형에서 유전자 상동성이 100%였다. 이러한 결과는 일부 독소 유전자를 가진 장염비브리오균이 분리되었고, 해수, 수족관물, 유통 수산물에서 분리된 장염비브리오균 사이에 유전적 유사성이 있기 때문에 식중독 역학조사에 도움이 되도록 지속적인 모니터링이 필요함을 나타낸다.

• 한국수산과학회지
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• 제55권6호
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• pp.850-857
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• 2022

Seventy-five Vibrio parahaemolyticus isolates from the surface seawater of the Geum River Estuary area, on the west coast of Korea, were analyzed for the presence of virulence genes and susceptibility to 17 different antimicrobials. All 75 isolates were examined for the presence of two virulence genes (tdh or trh) using polymerase chain reaction; Only one of the isolates possessed the tdh or trh gene. According to the results of disk diffusion susceptibility tests, all of the strains were resistant to penicillin G, 92.0% were resistant to ampicillin, 82.7% were resistant to amoxicillin, 2.7% were resistant to ciprofloxacin, 2.7% were resistant to trimethoprim, 1.3% were resistant to cephalothin, and 1.3% were resistant to erythromycin. However, all of the strains were susceptible to amikacin, cefoxitin, chloramphenicol, gentamycin, kanamycin, nalidixic acid, nitrofurantoin, rifampin, streptomycin, and tetracycline. The average minimum inhibitory concentrations for ampicillin for V. parahaemolyticus was 557.6 ㎍/mL. These results not only provide novel insight into the necessity for seawater sanitation in Geum river estuary area, but they help reduce the risk of contamination of antimicrobial-resistant bacteria.

• 한국수산과학회지
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• 제47권3호
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• pp.220-226
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• 2014

Sixty-seven Vibrio parahaemolyticus isolates from surface seawater from the Wando area, on the southern coast of Korea, were analyzed for their susceptibility to 15 different antimicrobials and the presence of virulence genes. According to the disk diffusion susceptibility test, all of the strains studied were resistant to ampicillin and oxacillin, while decreasing percentages were resistant to vancomycin (64.2%), streptomycin (56.7%), amikacin (31.3%), kanamycin (22.3%), cephalothin (20.9%), erythromycin (10.4%), ciprofloxacin (4.5%), and tetracycline (3.0%). All of the strains were susceptible to five antimicrobials: chloramphenicol, gentamycin, nalidixic acid, sulfamethoxazole/trimethoprim, and trimethoprim. Fifty-nine isolates (88.1%) were resistant to three or more classes of antimicrobial and defined as multidrug resistant, and two strains were resistant to seven antimicrobial agents. The minimum inhibitory concentration (MIC) of the 67 V. parahaemolyticus isolates to ampicillin and oxacillin ranged from 512-2,048 and $64-512{\mu}g/mL$, respectively. All 67 isolates were also examined for the presence of the tdh and trh virulence genes using the polymerase chain reaction (PCR). However, no isolates possessed either tdh or trh. The VPA0477 (${\beta}$-lactamase) gene, present in all of the tested strains, was validated as a new specific marker gene in PCR assays for the accurate detection and identification of V. parahaemolyticus.

• 한국수산과학회지
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• 제49권4호
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• pp.460-466
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• 2016

From 2013 through 2015, we investigated the contamination status and antimicrobial resistance patterns of pathogenic Vibrio parahaemolyticus in commercially valuable seawater and shellfish (Oyster Crassostrea gigas, short-neck clam Venerupis philippinarum, ark shell Scapharca broughtonii and mussel Mytilus galloprovinciallis) from the southern coast of Korea. The detection rate of V. parahaemolyticus was highest in short-neck clams (23.7%), followed by ark shells (19.2%), oysters (15.9%), mussels (13.6%), and seawater (8.6%). The following percentages of PCR assays of shellfish were positive for the thermostable direct hemolysin-related hemolysin gene (trh) : oysters (12.8%), short-neck clams(11.8%), and ark shells (3.4%). Similar assays for the thermostable direct hemolysin gene (tdh) resulted in positive results for short-neck clams (5.9%) and ark shells (3.4%). Antimicrobial resistance was present in 100% of 8 tdh (+) and 2 trh (+) V. parahaemolyticus isolates challenged with ampicillin. However, all pathogenic V. parahaemolyticus were sensitive to 14 other antibiotics. To ensure the safety of shellfish consumption, the continuous monitoring of the prevalence and distribution of virulence factors of V. parahaemolyticus in shellfish farms is needed.

• 한국수산과학회지
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• 제49권5호
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• pp.582-588
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• 2016

Seventy-nine Vibrio parahaemolyticus isolates from surface seawater from Gomso Bay, west coast of Korea, were analyzed for the presence of virulence genes and their susceptibility to 30 different antimicrobials. All 79 isolates were examined for the presence of two virulence genes (tdh or trh) using polymerase chain reaction (PCR); however, no isolates possessed either the tdh or trh gene. According to a disk diffusion susceptibility test, all of the strains studied were resistant to oxacillin, penicillin, and vancomycin, followed by ticarcillin (97.5%), ampicillin (96.2%), clindamycin (86.1%), erythromycin (10.1%), streptomycin (7.6%), cefoxitin (6.3%), amikacin (2.5%), and cephalothin (2.5%). However, all of the strains were susceptible to 19 other antimicrobials including cefepime, cefotaxime, chloramphenicol, gentamycin, nalidixic acid, sulfamethoxazole/trimethoprim, and trimethoprim. All 79 isolates (100%) were resistant to four or more classes of antimicrobials, and two strains exhibited resistance to eight antimicrobial agents. The average minimum inhibitory concentrations (MICs) for V. parahaemolyticus for ampicillin, penicillin, ticarcillin, and vacomycin were 946.5, 1,305.9, 1,032.3, and 45.0 µg/mL, respectively.