• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2002년도 국제심포지엄
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• pp.84-84
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• 2002

The advantages of the OPS techniques(Vajta G et al, Mol Reprod Dev 51: 53-58,1998) give 1) high survival rates of various types of eggs, 2) quick and simple process, 3) inexpensive equipment and reduced chilling injury. The efficiency of IVM/IVF technique in the porcine species is relatively lower than that obtained in other species such as ruminants. Two experiments were designed to investigate the effects of in-vitro fertilization of porcine oocytes matures using different OPS protocol for chilling and warming of vitrification. Porcine oocytes from ovaries collected at abattoir were matured for 44 hours in TCM199 Earle's salt supplemental with pyruvate, pff, L-cysteine, hormones and gentamycin. Oocytes were denuded and fertilized with frozen boar semen by common method. Porcine embryos produced routinely by in-vitro culture system of NCSU23 medium. The vitrification and the warming were conducted by OPS method with the glass micropipette instead of straw vessels and modified the protocol of G.Vajta(1999). In Exp 1, Chilling/Warming:Holding Medium(HM)+EG+DMSO/HM +sucrose Medium(SM) at 39$^{\circ}C$ warm stage. In Exp 2, : PBS+CS+EG+Ficoll+ Trehalose/PBS+Trehalose at 25$^{\circ}C$ stage. Filling, freezing, packing, thawing out and further culturing were performed to follow the basic protocol of G Vajta. During IVM-lVC and post-warming, fertilization parameter and developmental potential were compared to and statistically analysed. It was not significantly different from Exp 1 and Exp 2 but 25$^{\circ}C$ of stage was slightly higher on the morula/blastocyst forming rate and better atmosphere for worker than that at 39$^{\circ}C$ stage.

• 대한수의학회지
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• 제33권4호
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• pp.757-762
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• 1993

The ovaries of Korean Native cows or heifers were obtained from an abattoir and kept on 20 to $25^{\circ}C$ and transported to laboratory within 2 hrs. The follicular oocystes were collected from 2~6mm follicles in diameter and classified into 3 grades by the morphology of cumulus cells attached. The oocytes were matured in vitro(IVM) for 24 hrs. in TCM-199 supplemented with $23{\mu}g/ml$ FSH, $10{\mu}g/ml$ LH, $1{\mu}g/ml$ estradio-17 ${\beta}$ and granulosa cells at $39^{\circ}C$ under 5% $CO_2$ in air. They were fertilized in vitro(IVF) by incubation for 12 hrs. of epididymal spermatozoa pretreated with heparin, and then the zygotes were co-cultured in vitro(IVC) with oviductal epithelial cells for 7 to 9 days. Assessment of maturation revealed that 93.0%(147/158) of grade I oocytes had expanded of cumulus cells, which was higher(p<0.05) than the 79.4%(85/107) of grade II oocytes. Compared to epididymal sperm(32.9%), the insemination with frozen and thawed sperm resulted in slightly lower(20.5%), but not significant, development to morulae and blastocysts from grade I oocytes. Co-culture of bovine IVF embryos with oviductal epithelial cells improved the development to transferable embryos significantly(38.1%), compared to co-culture with granulosa cells(20.0%). When VF bovine embryos were vitrified at blastocyst, the post-thaw survival rate was obtained higher resulf for 1 min. equilibration time(82.6%) or 2 min.(73.9%) than 3 min.(18.2%) in EFS solution.

• 한국양식학회지
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• 제10권3호
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• pp.363-371
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• 1997

미꾸리 암컷과 미꾸라지 (Misgurnus mizolepis))$\times$미꾸리(M. anguillicaudatus) 잡종 수컷을 교배시켜 역교배체를 생산하였다. 역교배체의 수정율과 부화율은 친어 수컷으로 사용된 미꾸리와 유사하였다. 더욱이 역교배체는 난황흡수기에 저온에 저항성을 보여 전 실험군이 폐사한 미꾸리군에 비하여 단 14%의 낮은 초기 사망률을 나타내어 뚜렷한 생존율 증가가 관찰되었다. 역교배체의 적혈구 크기와 DNA 함량은 친어 암, 수의 중간을 나타내었고 역교배체는 2n=48 혹은 2n=49인 2가지 종류의 2배체 염색체수를 나타내었다. 부화후부터 6개월 동안 동일 조건에서 성장률을 조사한 결과, 역교배체는 친어 암, 수의 중간 성장을 보여 어류양식시 새로운 양식대상 어종으로의 가능성을 시사하였다. 역교배체는 거의 미꾸리와 체색 및 형태에서 유사하였으나 형질계측결과 친어 암수의 중간을 나타내는 형질 및 몇 개의 새로운 획득형질이 관찰되었다. 역교배체는 부화후 2개월 및 부화후 4개월에서 각기 성비를 조직학적으로 조사한 결과 암컷을 전혀 발견할 수 없어 전 수컷 단성집단 생산의 가능성을 보였다.

• 한국패류학회지
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• 제26권2호
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• pp.151-156
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• 2010

본 연구는 말백합 산업화를 위하여 어미성숙 관리한 인위성숙개체군과 시기별로 어미를 수송 채란한 자연성숙개체군을 산란유발 방법 별로 산란을 유도하여, 수정율, 부화율, D형 유생 발생률을 조사하였고, 유생사육 방법별로 유생의 성장과 생존율 등을 조사하였다. 인위성숙개체군의 간출시간별로 산란 유도한 결과 간출 4시간 및 8시간이 반응률이 23% 및 32%로 비교적 높았고, 수온 상승별로는 $28^{\circ}C$ 이상 되어야 반응이 시작되었다. 간출 및 수온상승 병행 시험구에서는 간출 4시간 및 $28^{\circ}C$에서 반응률이 45% 이상으로 나타났고, 29, 30, $31^{\circ}C$에서는 유의한 차이를 보이지 않아 말백합 어미는 간출시간보다는 수온상승에 반응률이 높은 것으로 나타났다. 어미수송개체군의 시기별 산란유발 결과는 2009년 8월 6일이 반응률 67.6%, D형 유생 발생률이 96%로 가장 높게 나타났다. 유생사육 시험 중 수온별로는 유생의 성장과 생존율을 고려할 때 유생사육 적정수온은 $27-31^{\circ}C$, 최적수온은 $29^{\circ}C$로 나타났고, 염분은 25에서 성장 및 생존율이 비교적 높았으며, 수용밀도별로는 5 inds./mL에서 성장 및 생존율이 비교적 높게 나타났음을 알 수 있었다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제24권3호
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• pp.325-333
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• 1997

The use of hormonal stimulation in human in vitro fertilization and embryo transfer (IVF-ET) leads to increased production of embryos for ET. So to avoid high pregnancies and to allow conception in future, unstimulated cycles, cryopreservation of spare embryos is desirable. One of the improvement of cryopreservation methods is vitrification. We cryopreserved mouse day 3 embryos by vitrification using the three different vitrification solution (EFS40, VS11 and VS3a). EFS40 solution is consisted of 40% (v/v) ethylene glycol, Ficol170 30% (w/v) and 0.5M sucrose and VS11 is 6.0M ethylene glycol and 1.8M glycerol. And VS3a is 6.5M glycerol and 6% (w/v) BSA (bovine serum albumin). First we tested the toxicity of three vitrification solution by exposure to these solution during 3 min. After washing by thawing solution, the survival rates of each groups are 95.5%, 90.9% and 84.4% (EFS40, VS11 and VS3a). High percentages of them developed to expanded blastocyst and hatching embryos in culture 48hrs 94.2%, 97.7%, 100% and 97.4% (no treatment group, EFS40, VS11 and VS3a). So there is no significant differences among the each group. Second, after thawing of vitirfied embryos, the survival rates of each groups are 96.8% (slow freeze), 94.1% (EFS40), 85.5% (VS11) and 80.0% (VS3a, P vs. no freeze or EFS40 is 0.01). Vitrified embryos exhibited a high rate of development in vitro after 48hrs culture. The percentages of each group to blastocyst and hatching embryos are 88.7% (no freeze), 91.8% (slow freeze), 93.4% (EFS40), 87.7% (VS11) and 73.0% (VS3a, P vs. other group is 0.01). The results suggest that there is no significant differences in exposure of various vitrification solution and day 3 mouse embryos can be vitrified in solution EFS40 and VS11 by simple procedure.

• 한국양식학회지
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• 제10권4호
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• pp.463-472
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• 1997

산란기간중 붉바리의 난질 변화를 알아보기 위해 1992, 1993, 1995년도에 채란한 알의 산란, 부화, 난경 및 먹이무공급 생존지수(SAI) 등을 조사하였다. 붉바리의 산란은 수온이 23-$28^\circC$인 7월 중순에서 8월 중순 사이에 이루어졌다. 산란기간중 알의 부상률, 수정률, 부화율은 산란 후반기보다는 대체로 전반기 및 중반기에 높은 것으로 나타났다. 부화자어의 SAI는 1.8-9.6으로 나타났는데, 개구시까지 자어의 생존율과 SAI 사이에는 높은 상관관계가 있었다. 산란기간중 난경의 변화는 1992, 1993, 1995년 모두에 있어 산란 전반기에서 후반기로 갈수록 작아지는 경향을 보였다. 유구경은 난경과는 달리 산란기간중 큰 변화가 없었다. 태반 성성숙자극 호르몬 주사에 의한 인공채란은 어체 1 kg 당 5,000 IU이상의 HCG를 주사함으로써 가능하였다. 인공채란한 알의 부상률, 수정률, 부화율은 자연채란난보다 높은 것으로 나타나, 일시에 대량의 수정난을 확보할 수 있는 유용한 방법으로 생각된다. 자연산란된 알의 난질은 산란전기나 중기가 비교적 좋은 것으로 나타나, 종묘생산을 위한 알은 이기간 동안의 것을 이용하는 것이 바람직할 것으로 판단된다. 그러나 산란 성기중에도 난질의 변화가 크기 때문에 부화율, 기형률, 개구시까지의 생존율 및 SAI 등을 종합적으로 고려해야 할 것으로 생각된다.

• 한국양식학회:학술대회논문집
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• 한국양식학회 2003년도 추계학술발표대회 논문요약집
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• pp.28-28
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• 2003

Viable interspecific hybrids between yellowtail flounder (Pleuronectes ferrugineus, Store.) and winter flounder (Pleuronectes americanus, Walbaum) were produced by artificial insemination of yellowtail flounder eggs with winter flounder sperm. However, mean fertilization rate, hatching success and early survival up to 3 weeks post hatch were significantly lower than those of parental pure cross controls (P<0.01). Overall, cytogenetic traits (karyological analysis and estimation of cellular DNA contents using flow cytometry) of hybrid flounder were intermediate between the two parental species. Microsatellite assay was used to distinguish the parental genomes in the hybrids; in most cases, one allele was specific to each of the parents. Morphometrics assessed by body proportions indicated that hybrids generally displayed a morphology intermediate between the maternal and paternal species. Interspecific hybrids exhibited abnormal and retarded gonad development in both sexes based on histological analysis of gonads from adult fish. The sterility of the hybrids presents a significant advantage for their use in aquaculture, as potential escapees would not be capable of reproducing in the wild and contaminating natural stocks.

• 한국해양생명과학회지
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• 제7권2호
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• pp.139-144
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• 2022

본 연구는 붉바리 어미의 사육환경에 따른 난질의 변화를 난의 생화학적 분석을 통하여 난질에 영향을 미칠 수 있는 요소를 구명하기 위하여 수행하였다. 그 결과 육상수조에서 사육하는 것보다 해상가두리에서 사육할 때 부상률, 수정률, 난 발생 생존율 및 부화율이 우수하였다. 그리고 해상가두리에서 생산한 수정란의 유리아미노산의 함량이 높았다. 즉, 해상가두리에서 사육관리할 때 난질이 우수한 수정란을 생산할 수 있고, 난질이 우수할수록 유리아미노산의 함량이 높았다.

• 한국양식학회지
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• 제20권4호
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• pp.260-264
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• 2007

본 연구에서는 대구 Gadus macrocephalus의 종묘생산을 위한 생물학적 기초자료를 제공하기 위하여 수온(4, 7, 10, 13 및 $16^{\circ}C$)에 따른 난발생, 자어의 성장 및 생존율을 조사하였다. 복부압박법으로 채란 하였으며, 채란양과 어체의 관계는 $F=80,220{\times}TL-3,397,700$ ($R^2=0.7528$)이었다. 수정란은 원형의 침성 점착란이었으며, 그 크기는 $0.90{\sim}1.11\;mm$였다. 습식법에 의한 수정률은 68%였다. 난발생의 각 단계에 이르기까지의 수온(T: $^{\circ}C$)에 따른 발생속도(t: hour)는 수온이 높을수록 빨랐으며, 그 관계식은 다음과 같았다. 4세포기: 1/t=0.0175T+0.0356 ($R^2=0.9579$), 16세포기: 1/t=0.0100T+0.0350 ($R^2=0.9759$), 상실기: 1/t=0.0083T-0.0181 ($R^2=0.9586$), 낭배기: 1/t=0.0035T-0.0058 ($R^2=0.871$), Kupffer씨 포 출현기: 1/t=0.0021T-0.0014 ($R^2=0.871$), 부화자어기: 1/t=0.0006T-0.0006 ($R^2=1$). 또한 대구의 난발생이 개시되는 생물학적 영도는 평균 $-0.4^{\circ}C$로 나타났다. 부화가능한 수온의 범위는 $7{\sim}10^{\circ}C$로 나타났다. 수정란에서 부화까지 소요되는 시간은 $7^{\circ}C$와 $10^{\circ}C$에서 각각 288시간(12일)과 192시간(8일)이었으며, 이때 부화율은 각각 65.0% 및 33.4%로 $7^{\circ}C$에서 3배정도 높았다. 부화자어를 40일간 $7^{\circ}C$와 $10^{\circ}C$에서 사육하였을 때, 성장에는 차이가 없었으나, 생존율은 각각 18.3% 및 5.2%로 $7^{\circ}C$에서 유의하게 높았다. 이상의 결론을 종합해 보면, 대구 종묘생산을 위한 수온은 $7^{\circ}C$가 적합하다고 판단된다.

• Animal Bioscience
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• 제34권2호
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• pp.192-197
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• 2021

Objective: The present study evaluated the preservation of ram semen at 0℃ using soybean lecithin with a Tris-fructose extender. Methods: Semen was collected by artificial vagina ejaculation from six rams with proven fertility. High quality ejaculates were diluted by soybean lecithin (0.25%, 0.5%, 0.75%, 1.0%, 1.25%) using Tris-fructose extender and control (Tris-fructose egg yolk extender), respectively. The ejaculates were diluted to a concentration of 5×108 sperm/mL, followed by cooling to 0℃ in 90 min and maintaining the temperature for 12 days. The diluted semen samples were examined and recorded for sperm progressive motility, acrosome integrity at 0, 24, 72, 144, 216, 288 h, respectively. Two hundred and twenty-three ewes were inseminated for 216 h with optimal soybean lecithin concentrated semen or control via trans-cervical insemination. Results: The results showed that there were no differences in sperm progressive motility at 0, 24, 72, and 144 h (p>0.05). After 216 h, the sperm progressive motility in the control group and 0.5% concentration groups was significantly higher when compared to 0.25% concentration (p<0.05). The 0.5% concentration group demonstrated the highest survival rate and had no difference with the control group (p>0.05). At 216 h, the sperm progressive motility of all groups was still above 50%. The acrosome integrity of all groups was decreased with prolongation of storage time, but there was no difference at each time point (p>0.05). There was no significant difference in the lambing rate and pregnancy rate between the 0.5% concentration group and the control group (p>0.05). Conclusion: These results suggest that ram sperm is capable of fertilization after preservation at 0℃ with 0.5% of soybean lecithin in Tris-based extender substituted for egg yolk and produce normal offspring after insemination.