• 대한의생명과학회지
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• 제12권1호
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• pp.17-22
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• 2006

The baculovirus expression system is a powerful method for producing large amounts of the human erythrocyte-type glucose transport protein, heterologously. Characterization of the expressed protein is expected to show its ability to transport sugars directly. To achieve this, it is a prerequisite to know the properties of the endogenous sugar transport system in Spodoptera frugiperda Clone 21 (Sf21) cells, which are commonly employed as a host permissive cell line to support the baculovirus replication. The Sf21 cells can grow well on TC-100 medium that contains 0.1% D-glucose as the major carbon source, strongly suggesting the presence of endogenous glucose transport system. However, unlike the human glucose transport protein that has a broad substrate and inhibitor specificity, very little is known about the nature of the endogenous sugar transport system in Sf21 cells. In order to characterize further the inhibitor recognition properties of the Sf21 cell transporter, the ability of phloretin, cytochalasin B and D-fructose to inhibit 2-deoxy-D-glucose (2dGlc) transport was examined by measuring inhibition constants $(K_i)$. The $K_i's$ for reversible inhibitors were determined from plots of uptake versus inhibitor concentration. The 2dGlc transport in the Sf21 cells was very potently inhibited by phloretin, the aglucone of phlorizin with a $K_i$ similar to the value of about $2{\mu}M$ reported for inhibition of glucose transport in human erythrocytes. However, the Sf21 cell transport system was found to differ from the human transport protein in being much less sensitive to inhibition by cytochalasin B (apparent $K_i$ approximately $10\;{\mu}M$). In contrast, It is reported that the inhibitor binds the human erythrocyte counterpart with a $K_d$ of approximately $0.12\;{\mu}M$. Interestingly, the Sf21 glucose transport system also appeared to have high affinity for D-fructose with a $K_i$ of approximately 5mM, contrasting the reported $K_m$ of the human erythrocyte transport protein for the ketose of 1.5M.

• 한국수산과학회지
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• 제48권2호
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• pp.178-186
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• 2015

Protease inhibitors (PI) of trypsin and papain as target proteases from the roe of bastard halibut Paralichthys olivaceus were fractionated out using ammonium sulfate precipitation (A), DEAE 650M anion exchange chromatography (D), and Sephacryl S-300 gel filtration (S). The recovery percentages of the fractions with the strongest inhibitory activity for each fractionation method were 13% for the A4 fraction, 21.2% for the D3 fraction, and 21.3% for the S2 fraction, with specific inhibitory activities of the fractions toward trypsin and casein of 168, 139, and 218 U/mg, respectively, while no inhibition of papain was observed. The $IC_{50}$ for the trypsin-specific substrate $N{\alpha}$-benzoyl-$\small{L}$-arginine-p-nitroanilide (BAPNA) was 0.65, 1.55, 2.26, and 2.85 mg/mL for the A4, S2, A3, and D3 fractions, respectively. These results suggest that chromatographic fractionation methods (D and S) based on the molecular mass and charge of the protein were more effective at fractionating PI than was ammonium sulfate precipitation based on protein solubility, and that the bastard halibut roe extract acts as a serine protease inhibitor. Therefore, the PI fraction from fish roe might be useful for inhibiting proteases in foodstuffs, and could constitute an alternative food-grade inhibitor for the surimi industry.

• 통합자연과학논문집
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• 제4권4호
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• pp.273-277
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• 2011

It's a threat for the public health that H1N1 (Influenza virus A) causes disease and transmits among humans. WHO (world health organization) declared that the infections caused by the new strain had reached pandemic proportions. The approved neuraminidase inhibitors (Zanamivir and Oseltamivir) and related investigative drug (BCX-1812) are potent, specific inhibitors of influenza A and B viruses. These drugs are highly effective to prevent influenza A and B infections. Early therapeutic use reduces illness duration and respiratory complications. Recently, we found one of the potent inhibitor of erystagallin A ($IC_{50}$ of 2.04 ${\mu}M$) for neuraminidase target, this inhibitor shows most similar structure to its natural substrate, sialic acid. Therefore, we chose 1l7f to get the receptor structure for docking study among many crystal structures. A docking study has been performed in Surflex-Dock module in SYBYL 8.1. In the present study, we attempt to compare the docking studies of pterocarpin and erystagallin A with neuraminidase receptor structure. In the previous report, the methoxy group of pterocarpin had H-bonding with Arg residues. The present docking results for erystagallin A showed the backbone of hydroxyl group shows significant H-bonding interactions with Arg152 and Arg292. The results showed that erystagallin A interacts more favorably with distinctive binding site rather than original active site. Therefore, we tried to reveal plausible binding mode and important amino acid for this inhibitor using docking and site id search calculations of Sybyl. The results obtained from this work may be utilized to design novel inhibitors for neuraminidase.

• Molecules and Cells
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• 제27권4호
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• pp.417-422
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• 2009

Lipoxygenase (LO) metabolites are generated in inflamed tissues. However, it is unclear whether the inhibition of the LO activity regulates the expression of c-Fos protein, a pain marker in the spinal cord. Here we used a carrageenan-induced inflammation model to examine the role of LO in the development of c-Fos expression. Intradermally injected carrageenan caused elevated number of cells exhibiting Fos-like immunoreactivity (Fos-LI) in the spinal dorsal horn, and decreased the thermal and mechanical threshold in Hargreaves and von Frey tests. Pretreatment with an inhibitor of phospholipase A2, that generates the LO substrate, prior to the carrageenan injection significantly reduced the number of Fos-(+) cells. A general LO inhibitor NDGA, a 5-LO inhibitor AA-861 and a 12-LO inhibitor baicalein also exhibited the similar effects. Moreover, the LO inhibitors suppressed carrageenan-induced thermal and mechanical hyperalgesic behaviors, which inidcates that the changes in Fos expression correlates with those in the nociceptive behaviors in the inflamed rats. LO products are endogenous TRPV1 activators and pretreatment with BCTC, a TRPV1 antagonist inhibited the thermal but not the mechanical hypersensitivity. Overall, our results from the Fos-LI and behavior tests suggest that LO products released from inflamed tissues contribute to nociception during carrageenan-induced inflammation, indicating that the LO pathway is a possible target for modulating inflammatory pain.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제7권2호
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• pp.113-118
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• 2003

포유동물의 성숙한 난포의 난포액 속에는 여러 종류의 단백질 분해효소가 있으며 이들은 난포의 형성과 퇴화 및 난자의 성숙과 배란 등의 다양한 변화에 중요한 역할을 하는 것으로 여겨진다. 난포액 속의 단백질 가수분해효소 중에는 serine proteinase가 비교적 잘 알려져 있으나 다른 효소 특히, caseinolytic enzyme에 대해서는 거의 알려져 있지 않다. 본 연구에서는 사람의 난포액을 재료로 하여 caseinolytic enzyme의 존재 여부 및 동 효소의 특성을 알아보고자 하였다. 사람의 난포액과 혈청 그리고 사람의 제대혈을 $\alpha$-casein을 기질로 하는 zymography 방법으로 분석 한 결과 분자량 80 kDa의 매우 강한 caseinolytic activity를 지니는 효소 단백질과 분자량 78 kDa의 비교적 약한 caseinolytic activity를 갖는 단백질 등 두 개의 caseinolytic enzyme이 관찰되었다. 이 caseinase들의 특성을 알아보기 위해 phenylmethylsulfonyl fluoride(PMSF), soybean trypsin inhibitor(SBf), 1,10-phenanthroline, E-64 그리고 ethylenediamine tetraacetic acid(EDTA)를 zymouaphy의 substrate buffer에 처리한 결과 EDTA와 SBTI에 의해서 80 kDa와 78 kDa caseinase의 활성이 억제되었다 이로 미루어 80 kDa와 78 kDa caseinase는 trypsin-like enzyme인 것으로 추측된다. 한편 사람 난포액의 zymouaphy 수행시에 5 mM의 EDTA가 첨가된 substrate buffer에 CaC $l_2$, MgC $l_2$, MnC $l_2$ ZnC $l_2$를 각각 0에서 10 mM의 농도별로 처리한 결과 모두 5 mM 농도에서 가장 높은 caseinase 활성을 보였다. 금속 이온의 첨가없이 EDTA만 처리한 대조군의 경우 caseinase의 활성은 나타나지 않았다. 이로 미루어 80 kDa 및 78 kDa caseinase는 효소 활성을 위해 이가 금속 양이온을 필요로 하는 것으로 여겨진다.

• 한국식품과학회지
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• 제20권1호
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• pp.79-84
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• 1988

대두(大豆)중에 존제하는 장내(腸內) 가스 발생인자인 raffinose와 stachyose의 제거에 이용될 수 있는 Aspergillus niger의 ${\alpha}$-galactosidase는 Czapeck-Dox 액체배지와 밀기울 배지에서 5일간 배양하였을 때 효소생성이 제일 높았다. Czapeck-Dox 액체배양에서 raffinose와 $NaNO_3$가 효소생산에 가장 효과적인 탄소원과 질소원으로 나타났으며 밀기울 배양에서는 질소원 또는 탄소원의 첨가효과가 없었다. 생성된 조효소(組酵素)용액의 작용 최적 pH는 4.0-5.0, 안정도 최적 pH는 3.5-6.5, 최적온도는 $40-50^{\circ}C$ 였다. 합성기질인 p-nitrophenyl-${\alpha}$-D-galactoside에 대한 Michaelis상수는 0.42mM, 최대반응속도는 152${\mu}moles$ substrate/min/kg (고체배지)이었다. $HgCl_2$는 강력한 비경쟁 저해제로 작용하였고 p-chloromercuribenzoate는 낮은 농도에서 경쟁 저해제로 작용하였다. 조효소 용액은 raffinose와 stachyose를 완전 분해하여 단당류 만을 생성하였다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제14권12호
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• pp.7561-7568
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• 2013

Galectin-3 (Gal-3) is a carbohydrate-binding protein which is thought to be involved in cancer progression but its contribution to epithelial ovarian cancer (EOC) remains unclear. The present study sought to determine the role of Gal-3 in chemoresistance of the human SKOV-3 ovarian cancer cell line to paclitaxel (PTX) using recombinant human Gal-3 (rhGal-3) and PectaSol-C modified citrus pectin (Pect-MCP) as a specific Gal-3 competitive inhibitor. Our results showed 41% increased cell proliferation, 36% decreased caspase-3 activity and 33.6% increased substrate-dependent adhesion in the presence of rhGal-3 compared to the control case (p<0.001). Treatment of cells with a non-effective dose of PTX (100nM) and 0.1% Pect-MCP in combination revealed synergistic cytotoxic effects with 75% reduced cell viability and subsequent 3.9-fold increase in caspase-3 activity. Moreover, there was 39% decrease in substrate-dependent adhesion compared to control (p<0.001). These results suggest that inhibition of Gal-3 could be a useful therapeutic tool for combination therapy of ovarian cancer.

• 한국식품영양과학회지
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• 제17권4호
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• pp.348-357
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• 1988

갈변반응에 관여하는 polyphenol oxidase(PPO : EC 1.10.3.1)를 한국산 고구마(Ipomoea batatas, val : Hong-mi)로부터 추출하여 ammoniun sulfate 분획 및 DEAE-cellulose column chromatography법에 의하여 정제한 결과, 효소활동도는 23.1배였으며 enzyme activity 수율은 41.5%이었다. 이 효소는 일반 전기 영동법에 의하여 8개의 isozymes 으로, 또한 isolectric focusing에 의하여 pI가 각각 다른 12개의 isozymes으로 분리되었고 그 pI의 범위는 3.2-9.6이었으며, Isoelectric focusing에 의하여 분리된 각 isozyme의 specific activity는 6,000-46,700U/mg protein의 범위에 있었다. 고구마 중의 PPO는 $65^{\circ}C$이하에서는 안정하였으며 $65^{\circ}C$ 에서는 1분 가열에 의하여 약 50%의 효소활성이 상실되었고, pH optimum은 6.0-6.5이었다. o-diphenol이 이 효소의 가장 좋은 기질로서, 이 효소는 o-diphenolase임이 확인되었고, catechol에 대한 Km치는 6.7mM로 나타났다. 또한 이 효소에 대한 저해작용은 dithiothreitol, cysteine 및 ascorbic acid 순으로 크게 나타났다.

• 미생물학회지
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• 제32권4호
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• pp.252-257
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• 1994

황화수소 산화세균인 Thiobacillus sp.를 전남 화순의 폐탄광수에서 분리하였다. 분리된 균주는 그람음성의 운동성이 있고, 포자를 형성하는 간균이었으며, 환원된 무기 황화합물을 산화하여 에너지원으로 사용하는 호기성 통성 화학합성 영양균이었다. 분리균주는 thiosulfate를 첨가한 기본배지에서 유기물을 동화하며 성장하였고, 에너지원으로 사용된 thiosulfate는 32mM 이상의 농도에서는 오히려 기질억제 인자로 작용하여 균의 성장을 억제하였다. 최적 thiosulfate 농도는 32mM이었다. DNA의 G+C 함량은 65.0mol%이고, 세포내 주요 지방산중 비순산화 지방산은 16:1+7$_{cyc}$, 16:0과 수산화 지방산은 3-OH 12:0을 가지며, $C_{18}$의 미동정 가지형의 지방산도 포함하고 있었다. Ubiquinone system은 Q-9을 가지고 있었다. 위와 같은 생리생화학적 특성 결과로부터, 본 분리균주는 Thiobacillus sp. iw.의 새로운 종으로 판단하였다.

• 생명과학회지
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• 제28권7호
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• pp.778-785
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• 2018

오토파지(Autophagy, 자가포식)는 복합적인 신호과정으로, 암세포의 증식 억제 및 항암제에 대한 내성 획득의 상반적인 조절에도 관여한다. 오토파지의 암 억제 효과는 아팝토시스(apoptosis)와 상호협력으로 오토파지성세포 사멸의 유도에 기인된다. 본 연구에서는 NSAID 계열의 다기능 약물인 celecoxib (CCB)이 아팝토시스 및 오토파지의 복합적인 유도로, 항암제 다제내성(multidrug resistant, MDR) 암세포의 Hsp90 molecular chaperone inhibitor인 17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin (17-AAG)에 대한 감수성을 증가시키는 활성이 있음을 밝혔다. 17-AAG 처리에 의한 항암제 다제내성 암세포의 변이형p53 분해 및 caspase-3 활성은 CCB 처리로 촉진되었다. MCF7-MDR세포에서 Z-DEVD-FMK 처리에 의한 caspase-3-매개의 아팝토시스 경로 차단은 CCB 유도의 세포 사멸을 완전히 차단시키지 못함을 알 수 있었으며, 또한 17-AAG과 CCB 병합 처리에 의한 오토파지 활성화는 Z-DEVD-FMK에 의해 방해되지 않는 것을 알 수 있었다. 본 연구의 결과를 토대로, CCB의 오토파지 유도 활성은 항암제 다제내성 암의 Hsp90 inhibitor에 대한 감수성 증가를 위한 약물 개발에, CCB가 효과적인 병용 약물로서 제안 될 수 있다.