Enterobacter sp. B54 inhibited growth of the fungus Phytophthora capsici on potato dextrose agar (PDA). Three mutants with antifungal activities (denoted M54-47, M54-113, and M54-329) which were lost or increased, through Pl::Tn5 lac mutagenesis, were used to isolate genes responsible for fungal inhibition on PDA. Two clones were selected from the partially EcoR1-digested genomic library of the wild-type strain by probing with genomic flanking sequences of each mutant. We have isolated a 20-kb EcoR1 genomic DNA fragment from this strain that contains genes involved in hyphal growth inhibition of P. capsici on PDA. Subcloning and expression analysis of the above DNA fragment identified a 8-kb region which was necessary for antifungal activities. A 8-kb HindⅢDNA fragment covers three genomic loci inserted by Tn5 lac in each mutant. This suggested that all genes which are related to antifungal activities might be clustered in simple forms of at least 5-8 kb sizes.
A bacterium KL-57 which exhibited biosurfactant activity was isolated. This bacterium was identified as Bacillus subtilis. The biosurfactant-producing gene of B. subtilis KL-57 was cloned into R subtilis MI113 by using plasmid pTB523. The plasmid DNA from the clone was found to carry a 18 kb PstI insert. The biosurfactant-producing gene was cleaved into 4 fragments by SmaI, 3 fragments by PvulI or EcoRl, 4 fragments by PvulI and EcoRI double digestion, 5 fragments by AccI, and 2 fragments by KpnI, HindIII or BamHI. By subcloning the 18 kb Pstl insert, a 2.3 kb EcoRl fragment conferred the biosurfactant producing activity on B. subtilis cells. The 2.3 kb had one HindIII cleave site. But Two fragments, which corresponds HindIII/EcoRl termini, exhibited no biosurfactant activity.
In order to increase the expression of XMP aminase [EC 6.3.4.1], which catalizes the conversion of 5'-XMP to the DNA fragment containing gua A gene coding for XMP aminase from pLC 34-10 plasmid was subcloned into pBR 322, and 1.7 kb gua A gene fragment was recloned under the control of trp promoter of pDR 720, E. coli expression vector. XMP aminase activity had increased by about 17 times when compared with that of the strain earring pLC 34-10.
Proceedings of the Zoological Society Korea Conference
/
1996.10a
/
pp.195.2-195
/
1996
acs gene cloning was constructed by subcloning the 2.2-kb MunI-MunI restriction fragment of 638 and 639 which include acs gene from the kohara phage into the unique EcoRI site of pUC18 and pJM9131 containing the PHA biosynthesis genes. Then recombinant E. coli fadRatoC(Con) mutants containing the polyhydroxyalkanoate(PHA) biosynthesis genes are able to incoporate s significant levels of 3-hydroxyvalerate (3HV) into the copolymer [P(3HB-co-3HV)]. Quantitative determination of PHB and P(3HB-co-3HV) was performed by gas-chromatographic analysis of extracts obtained from methanolysis of lyophilized cells.
Southern hybridization of genomic DNAs with radioactively labeled cDNA of tomato proteinase inhibitor II revealed that proteinase inhibitor II proteins in potato plants are encoded by a family of about 10 related sequences. Screening of potato EcoRI genomic library with the cDNA resulted in isolation of 13 recombinant phage clones which carry 3 different genomic regions. Of these clones, clones 8, 18, and 39 were subjected to restriction mapping and subcloning. Further characterization of the subclones of clones 8, 18 and 39 indicated that two inhibitor II genes are present on a 8.0 kb EcoRI fragment of clone 8, one on 3.3 and 0.8 kb EcoRI fragments of clone 18 and two genes on a 13.5 kb EcoRI fragment of clone 39.
A kanamycin producer, Streptomyces kanamyceticus IFO 13414 is highly resistant to kanamycin. Cloning of the kanamycin resistance genes in S. lividans 1326 with pIJ702 gave several kanamycin resistant transformants. Two transformants, S. lividans SNUS 90041 and S. lividan. SNUS 91051 showed similar resistance patterns to various aminoglycoside antibiotics. Gene mapping experiments revealed that plasmids pSJ5030 and pSJ2131 isolated from the transformants have common resistant gene fragments. Subcloning of pSJ5030 gave a 1.8 Kb gene fragment which showed resistance to kanamycin. Cell free extracts of S. lividans SNUS 90041, S. lividans SNUS 91051 and subclone a S. lividans SNUS 91064 showed kanamycin acetyltransferase activity. The detailed gene map is included.
The Bacillus stearothermophilus cdd gene encoding cytidine deaminase (cytidine/2'-deoxycytidine aminohydrolase; EC 3.5.4.5) was isolated through shot gun cloning by oomplementation of an E. coli cdd mutation. Primarily 3.0 kbp of the exogenote was cloned into the Pstl site of pBR322 (pJSC101). By subsequent deletion and subcloning from the insert of pJSC101 with cdd$^+$ and tetracycline resistancy, about 1.35 kbp of the EcoRI$_1$/PstI$_2$ fragment containing the cdd gene was isolated as pJSC201. The minicell experiment revealed a molecular mass of 33,000 dalton for polypeptide from the cloned DNA fragment complementing the cdd gene. From the lacZ fusion of 550 bp fragment of the EcoRI$_1$/AuaI as a putative promoter region, the transcription direction of the cdd gene on pJSC201 is from EcoRI towards the PstI sites, When the cdd gene was expressed in B. subtilis ED4O (cdd$^-$, pyr$^-$) by transformation with the E. coli-B. subtilis shuttle vector, the gene expression occured more efficiently than in E. coli and the gene appears to be stably maintained in B. subtitis as well as in E. coli.
DNA fragment being able to restore in vitro activity of ${\beta}-1,3-glucan$ synthase was cloned by transformation of the Saccharomyces cerevisiae LP353 mutant strain with genomic library constructed in the YCp50. For the selection of transformants which showed no detectable phenotype linked to recovery of the defect in ${\beta}-1,3-glucan$ synthase activity, the colony autoradiography was succesfully applied. The restriction map of the cloned DNA fragment, which is 8.5-kb in length, was constructed. Both the YEplac195 and the YCp50 carrying the 8.5-kb fragment increased ${\beta}-1,3-glucan$ synthase activity of LP353 by two fold. Neither the YEplac195 nor the YCp50 carrying the 8.5-kb DNA fragment, however, complemented the temperature-dependent osmotic sensitivity which is another distinctive phenotype of LP353. Subcloning experiments indicated that a functional region was located in 4.8-kb BglII-KpnI fragment. The 4.8-kb fragment was also able to increase the level of ${\beta}-1,3-glucan$ content in cell wall as well as the resistance of cells to cell wall lytic enzyme, ${\beta}-1,3-glucanase$. The growth rate of the LP353 with 4.8-kb fragment was almost same as that of wild type strain in liquid medium with 1.2 M sorbitol at nonpermissive temperature. Taken these results together, the 4.8-kb fragment seemed to contain the BGS2 gene for ${\beta}-1,3-glucan$ synthase activity in yeast S. cerevisiae.
Bovine Pneumonic Pasteurellosis는 수송열(輸送熱)로 일반적으로 알려져 있는 질병으로서, 여러가지 요인의 복합적(複合的)인 작용에 의해 발병하는 것으로 알려져 있으나, Pasteurella haemolytica A1이 가장 주요(主要)한 인자(因子)로 밝혀져 있다. P haemolytica A1은 leukotoxin(LKT), lipopolysaccharide(LPS), capsular polysaccharide 등 여러가지의 병원성인자(病原性因子)을 생성한다. 이들 인자중 LKT가 가장 중요한 병원성인자로 밝혀져 있다. 이에 본 실험은 P haemolytical A1의 LKT 유전자를 Bacillus subtilis에서 발현(發現)시킴으로서 LPS에 오염(汚染)되지 않은 LKT을 대량으로 생산할 목적으로 실시되었다. 실험의 첫 단계(段階)로서 pLKT52 plasmid을 Sau3 A1의 제한효소을 이용하여 부분소화(部分消化)시킨 후 이 부분 소화(消化)된 유전자들로부터 3~5kb 크기의 유전자들을 순수분리하여 pUC18와 결합시킨 후 E coli NM522에 형질전환(形質轉換)시켰다. 이때 형질전환된 균주들은 LKT에 대한 단크론 항체인 MAb601을 이용하여 colony blot 법에 의해서 LKT 유전자 보유 및 발현여부(發現與否)을 조사하였다. 이들 양성 clone들은 제한효소분석(制限酵素分析), 염기서열분석(鹽基序列分析) 및 Western blot 등에 의해서 재확인(再確認)하였다. 총 9개의 양성 clone중 위의 방법에 의해서 한 clone을 선택(選擇)하여 lktCA insert를 재분리하여 shuttle vector에 subcloning 하였다. Subcloning된 LKT 유전자들은 shuttle vector의 종류(種類)(pHPS9, p602/20, pHPS9-Sac)와 각기(各其) 다른 종류(種類)의 B subtilis(spoO12A, BR121, WB3O, Raj1105) 숙주내(宿主內)에서 발현정도를 Western blot 법에 의해서 비교(比較)하였다. 이때 최적발현조건(最適發現條件)은 p602/20와 pBL1의 dual plasmid system을 이용하여 B subtilis spoO12A에서 2시간동안 IPTG로 발현을 유도(誘導)하는 것이었다. B subtilis에서 발현된 LKT을 visual 법과 neutral red uptake 법을 이용하여 소 폐포(肺胞) 대식구(大食求)에 대한 biological activity를 확인하였다. 발현된 LKT에 대한 LPS 오염은 LKT을 SDS-PAGE 후 silver stain에 의해서 확인하였다. 본 실험을 통해서 볼 때에 lktCA 유전자를 보유(保有)하고 있는 p602/20는 B subtilis에서 매우 불안정(不安定)하였고, 발현된 LKT는 세균자체(細菌自體)에서 생성되는 protease들에 의해서 파괴(破壞)됨으로서 농도(濃度)가 매우 낮았다. 이러한 문제점들은 다음 단계(段階)의 실험에서 해결되어야할 문제들이다.
Park Soo-Dong;Park Ik-Hyun;Choi Jong-Soo;Kim Il-Kwon;Kim Younhee;Lee Heung-Shick
Korean Journal of Microbiology
/
v.41
no.4
/
pp.300-305
/
2005
A transcriptionally active fragment $(P_{19})$ isolated by utilizing the promoter-probe shuttle vector pSK1Cat was analyzed. By subcloning analysis, the 180 bp region $(P_{180})$ responsible for the activity was determined. Transcriptional fusion of the C. glutamicum metX gene to $P_{180}\;(P_{180}-metX)$ resulted in a 24-fold increase in MetX activity in a complex medium, while a 13-fold increase was observed with the $P_{tac}$ promoter. Additionally, the expression conferred by $P_{180}$ was not affected by methionine added to the growth medium, suggesting that the $P_{180}$ clone is useful for the deregulated expression of biosynthetic genes in C. glutamicum during amino acid fermentation. Introduction of $P_{180}-metX$ into a lysine-producing C. glutamicum resulted in the production of methionine to 0.8 g/l.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.