HIV-1 tat, a strong transactivator, is essential for the HIV-1 replication and AIDS progression. The Tat function is markedly inhibited by human anti-oncogene p53. This work was initiated to identify the p53-associated inhibitory mechanism on tat-mediated transactivation. Inhibitory function of p53 was confirmed by co-transfection of tat-expressing Jurkat cells with LTR-CAT plasmid, or H3T1 cells (LTR-CAT integrated HeLa cells) with different ratio of pSV-tat/pCDNA-p53 plasmids. Results from the direct protein-protein interaction between soluble p53 and tat, and yeast two-hybrid experiments showed that the co-suppression mechanism is unlikely to be due to the direct interaction. CAT activity was not affected by tat in Jurkat cells which were transfected with p53-promoter-CAT or p53-enhancer-CAT, suggesting that the tat-mediated p53 suppression is not directly associated with p53-promoter. Finally, we have tested protein kinase activity in p53-tranfected Jurkat cells, which might phosphorylate HIV-1 tat, resulting in inhibition of tat function. Some of our data lead us to assume that the p53-mediated tat inhibition is likely to be associated with p53-associated, signaling-mediated phosphorylation of tat, resulting in the dysfunction of tat. This study is now under investigation.
Objective: To investigate the promoter methylation status of the E-cadherin gene in non-small cell lung cancer (NSCLC) and its association with clinical pathological parameters, and to explore the relationship between downregulation of E-cadherin gene expression and the methylation status of its promoter region. Methods: Nested methylation-specific PCR was performed to examine CpG methylation within the 5' CpG island of the E-cadherin gene in lung cancer and para-cancerous tissue from 37 patients with primary non-small cell lung cancer. Quantitative real-time PCR was performed to measure the level of E-cadherin mRNA. Results: Of thirty-seven cases, 12 (32.4%) samples showed aberrant CpG methylation in tumor tissues compared with the corresponding normal tissues. In addition, a reduction in E-cadherin mRNA levels was observed in 11 of the 12 (91.7%) tumor tissues carrying a methylated E-cadherin gene. However, only 10 (43.5%) cases displayed reduced mRNA levels in tumor tissues from the remaining 23 cases (excluding 2 samples from which mRNA was unavailable) without methylation events. Downregulation of E-cadherin gene expression significantly correlated with the promoter methylation status of this gene. Conclusion: These results provide strong evidence that the methylation status of E-cadherin gene contributes to a reduction in the expression of E-cadherin mRNA, and may play a role in the development and progression of NSCLC.
The onset, severity, and ultimate outcome of malaria infection are influenced by parasite-expressed virulence factors and individual host responses to these determinants, In both humans and mice, liver injury is involved after parasite entry, which persists until the erythrocyte stage after infection with the fatal strain Plasmodium falciparum (Pf), Hepatocyte growth factor (HGF) has strong anti-apoptotic effects in various kinds of cells, and also has diverse metabolic functions. In this work, Pf-subtilisin-like protease 2 (Pf-Sub2) 5' untranslated region (UTR) was analyzed and its transcriptional activity was estimated by luciferase expression. Fourteen TATA boxes were observed but only one Oct-1 and c-Myb were done. In addition, host HGF interaction with Pf-Sub2 was evaluated by co-transfection of HGF- and Pf-Sub2-cloned vector. Interestingly, -1,422/+12 UTR exhibited the strongest luciferase activity but -329 to + 12 UTR did not exhibit luciferase activity. Moreover, as compared with the control of unexpressed HGF, the HGF protein suppressed luciferase expression driven by the 5' untranslated region of the Pf-Sub2 promoter. Taken together, it is suggested that HGF controls and interacts with the promoter region of the Pf-Sub2 gene.
Kim, June-Sik;Park, Minkyu;Lee, Dong Ju;Kim, Byung-Dong
Molecules and Cells
/
v.28
no.4
/
pp.331-339
/
2009
Capsaicin is a very important secondary metabolite that is unique to Capsicum. Capsaicin biosynthesis is regulated developmentally and environmentally in the placenta of hot pepper. To investigate regulation of capsaicin biosynthesis, the promoter (1,537 bp) of pepper capsaicin synthase (CS) was fused to GUS and introduced into Arabidopsis thaliana (Col-0) via Agrobacterium tumefaciens to produce CSPRO::GUS transgenic plants. The CS was specifically expressed in the placenta tissue of immature green fruit. However, the transgenic Arabidopsis showed ectopic GUS expressions in the leaves, flowers and roots, but not in the stems. The CSPRO activity was relatively high under light conditions and was induced by both heat shock and wounding, as CS transcripts were increased by wounding. Exogenous capsaicin caused strong suppression of the CSPRO activity in transgenic Arabidopsis, as demonstrated by suppression of CS expression in the placenta after capsaicin treatment. Furthermore, the differential expression levels of Kas, Pal and pAmt, which are associated with the capsaicinoid biosynthetic pathway, were also suppressed in the placenta by capsaicin treatment. These results support that capsaicin, a feedback inhibitor, plays a pivotal role in regulating gene expression which is involved in the biosynthesis of capsaicinoids.
The genes involved in riboflavin synthesis (ribI, II, III, and IV) were found immediately downstream of luxG in the lux operon from Photobacterium species. The single stranded DNA containing the intergenic region of lux genes and rib genes from Photobacterium phosphoreum was fully protected by P. phosphoreum mRNA from the S1 nuclease mapping assay suggesting that a transcriptional terminator was not present in the region. In addition, the levels of riboflavin synthase activity in P. phosphoreum was increased during the development of bacterial bioluminescence in the same fashion as the luciferase and fatty acid reductase activities. Insertion of the Photobacterium leiognathi DNA extending from luxB to ribII, between a strong lux promoter and a reporter gene (chloramphenicol acetyltransferase, CAT) and transferred by conjugation into P. leiognathi, did not affect expression of reporter gene. Moreover the CAT gene was not expressed in an analogous construct missing the lux promoter indicating that a promoter was not present in this region. Based on the data here, it can be concluded that the lux genes and rib genes in Photobacterium species are under common regulation.
We report the construction of two Bacillus subtilis expression vectors, pBNS1/pBNS2. Both vectors are based on the strong promoter P43 and the ampicillin resistance gene expression cassette. Additionally, a fragment with the Shine-Dalgarno sequence and a multiple cloning site (BamHI, SalI, SacI, XhoI, PstI, SphI) were inserted. The coding region for the amyQ (encoding an amylase) signal peptide was fused to the promoter P43 of pBNS1 to construct the secreted expression vector pBNS2. The applicability of vectors was tested by first generating the expression vectors pBNS1-GFP/pBNS2-GFP and then detecting for green fluorescent protein gene expression. Next, the mannanase gene from B. pumilus Nsic-2 was fused to vector pBNS2 and we measured the mannanase activity in the supernatant. The mannanase total enzyme activity was 8.65 U/ml, which was 6 times higher than that of the parent strain. Our work provides a feasible way to achieve an effective transformation system for gene expression in B. subtilis and is the first report to achieve B. pumilus mannanase secretory expression in B. subtilis.
Oxidative stress derived from reactive oxygen species (ROS) is one of the major damaging factors in plants exposed to environmental stress. In order to develop the platform technology to solve the global food and environmental problems in the 21st century, we focus on the understanding of the antioxidative mechanism in plant cells, the development of oxidative stress-inducible antioxidant genes, and the development of transgenic plants with enhanced tolerance to stress. In this report, we describe our recent results on industrial transgenic plants by the gene manipulation of antioxidant enzymes. Transgenic tobacco plants expressing both superoxide dismutase (SOD) and ascorbate peroxidase (APX) in chloroplasts were developed and were evaluated their protection effects against stresses, suggesting that simultaneous overexpression of both SOD and APX in chloroplasts has synergistic effects to overcome the oxidative stress under unfavorable environments. Transgenic tobacco plants expressing a human dehydroascorbate reductase gene in chloroplasts were showed the protection against the oxidative stress in plants. Transgenic cucumber plants expressing high level of SOD in fruits were successfully generated to use the functional cosmetic purpose as a plant bioreactor. In addition, we developed a strong oxidative stress-inducible peroxidase promoter, SWPA2 from sweetpotato (lpomoea batatas). We anticipate that SWPA2 promoter will be biotechnologically useful for the development of transgenic plants with enhanced tolerance to environmental stress and particularly transgenic cell lines engineered to produce key pharmaceutical proteins.
Proceedings of the Korean Society of Plant Biotechnology Conference
/
2002.04b
/
pp.49-58
/
2002
Oxidative stress derived from reactive oxygen species (ROS) is one of the major damaging factors in plants exposed to environmental stress. In order to develop the platform technology to solve the global food and environmental problems in the 21st century, we focus on the understanding of the antioxidative mechanism in plant cells, the development of oxidative stress-inducible antioxidant genes, and the development of transgenic plants with enhanced tolerance to stress. In this report, we describe our recent results on industrial transgenic plants by the gene manipulation of antioxidant enzymes. Transgenic tobacco plants expressing both superoxide dismutase (SOD) and ascorbate peroxidase (APX) in chloroplasts were developed and were evaluated their protection effects against stresses, suggesting that simultaneous overexpression of both SOD and APX in chloroplasts has synergistic effects to overcome the oxidative stress under unfavorable environments. Transgenic tobacco plants expressing a human dehydroascorbate reductase gene in chloroplasts were showed the protection against the oxidative stress in plants. Transgenic cucumber plants expressing high level of SOD in fruits were successfully generated to use the functional cosmetic purpose as a plant bioreactor. In addition, we developed a strong oxidative stress-inducible peroxidase promoter, SWPA2 from sweetpotato (Ipomoea batatas). We anticipate that SWPA2 promoter will be biotechnologically useful for the development of transgenic plants with enhanced tolerance to environmental stress and particularly transgenic cell lines engineered to produce key pharmaceutical proteins.
The cloned X-bacterial gene (groEx) which is analogous to groE of E. Coli strongly expressed in E. coli when grown at the temperature 27.deg. C or higher without having to add any inducers. By S1-nuclease mapping, primer extension analysis and site directed mutagenesis, we found 4 promoters in the gene. Among them two promoters located at 5'-extended region of the gene are homologous to the promoters found in groE family of heat-shock genes ; they are , .sigma.$^{32}$ factor-dependent P1 promotor and .delta$^{70}$factor-dependet P2 promoter. The other two promoters found within the coding region of groESx were P3, 5'-TTGGCG-(18 bases)-AATACT-3' and P4, 5'-TTGGCA-(19 bases)-TAAGT which overlapped within 49 bases. These unique intragenic .delta.$^{70}$-dependent promoters are the first to be cloned and characterized in groE analogous heat-shock genes so far. These P3 and P4 promoters appeared to be responsible for the strong expression of GroElx in X-bacteria in vivo.
A heterologous gene expression and secretion system using a methylotrophic yeast, Hansenula polymorpha was developed for the production of anticoagulant hirudin. Hirudin gene was expressed under the control of a strong and inducible methanol oxidase (MOX or AOX) promoter. The mating factor a pre-pro leader sequence of Saccharomyces cerevisiae was employed for hirudin to be secreted into the extracellular medium. Hirudin expression cassette was introduced into three strains of H. polymorpha, A16, HPBl and DLl which have different genetic backgrounds. This expression cassette was stably integrated into the host chromosomal DNA. Biologically active and mature hirudin was efficiently expressed and secreted into the extracellular medium. About 19 mg/L of hirudin was found in the culture supernatant in the case of a two-copy integrant of the strain HPBl under suboptimal culture conditions.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.